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利用RT-PCR技术。用包容口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从口蹄疫分离株(China/99-2)中扩增得到一级750bp的DNA片段,克隆后,经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较。显示其与国外同源参考序列(O1K/66)的同源性为80.44%。与国内同型参考株(HB/WH/99)的核苷酸序列的同源性达99.06%。随后以重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增得到目的基因VP1(650bp)。对目的基因和表达载体pGEX-4T-1分别以相同的限制性内切酶酶切后构建成重组表达载体。转化宿 主菌BL21(DE3)后得到重组质粒pGEX-VP1。经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆。测序证明目的基因正确插入到表达载体。用IPTG诱导VP1基因的表达。收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析检测。结果表明,结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中表达,表达产物的分子量约为53ku,并能被口蹄疫阳性血清所识别,经薄层扫描分析,表达蛋白约占菌体蛋白总量的20.00%。证明口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中高效表达,且表达产物有一定的生物学活性。 相似文献
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应用已构建的真核表达质粒pCI-H1-HA、pCAGGS-H1-HA、pCI-H3-HA和pCAGGS-H3-HA作为DNA疫苗,利用BALB/c小鼠进行免疫保护试验,通过测定不同免疫期HI抗体滴度、分析攻毒后BALB/c小鼠体重变化及肺脏病毒含量,评价DNA疫苗的免疫效力。结果表明:构建的DNA疫苗均可诱导小鼠产生免疫力;BALB/c小鼠体重变化统计学分析显示,免疫组与对照组差异极显著(P〈0.01),pCAGGS表达载体构建的DNA疫苗免疫效果优于pCI表达载体构建的DNA疫苗(P〈0.05)。 相似文献
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为提高新城疫临床诊断的准确率,建立了新城疫病毒浓缩方法,将粪便及脑、肺等器官组织病料中的新城疫病毒经特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌(SPA菌)吸附浓缩后,用RT-PCR进行检测。结果表明,所建立的新城疫病毒浓缩方法应用于临床诊断后,可显著提高检测敏感性,从而提高临床诊断的准确率。 相似文献
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以国内主要流行的猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)QH-1、HN-7菌株的基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增出外膜脂蛋白(OML)基因片段,然后将其克隆至pMD18-T载体中,经酶切和PCR鉴定,对阳性克隆进行序列测定。将测序结果分别与标准菌株进行比较,QH—1株的核苷酸序列与血清1、9、11、12型参考株的同源性达99.1%~99.9%;HN-7株的核苷酸序列与血清7、3、4、6型参考株的同源性达97.3%~100%,与其他血清型参考株的同源性较低。 相似文献
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提取2株A型口蹄疫病毒FMDV-L1和FMDV-L2的RNA,用1对通用引物经RT-PCR扩增出2株病毒VP1基因的DNA片段,将扩增的VP1编码序列克隆到质粒载体pGEM-T Easy中,转入大肠埃希氏菌JM109,得到大量携带目的基因的质粒;经过重组质粒的鉴定、测序获得其核苷酸序列;利用序列分析软件及系统发生树绘制软件对FMDV—L1和FMDV-L2以及作为参考毒株的A22/India/17/77进行序列分析。结果表明,核酸序列中的变异多发区要多于氨基酸序列,氨基酸序列最明显的变异发生在构成FMDV抗原位点1的βG-βH环内,其中毒株FMDV-L1和FMDV-L2 RGD序列中的精氨酸(R)发生了变异,分别变成了亮氨酸(L)和谷氨酰胺(Q)。 相似文献
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抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用 总被引:1,自引:0,他引:1
用PRRSV感染SPF猪,血清检测结果显示,机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1),而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2)。根据各种蛋白质的等电点不同,应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG。分别以纯化的抗PRRSV—GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头,7d后经鼻腔感染PRRSV,定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验。抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪,其血样自感染后3~7d均检出PRRSV;3头猪在感染后14~63d未检出PRRSV;2头猪在感染后14~35d检出PRRSV,从42~56d转为阴性,其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫的猪,其血样自感染后3~7d均检出PRRSV;2头猪在感染后14~63d未检出PRRSV;3头猪在感染后14~35d检出PRRSV,从42~56d转为阴性,其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—GP5和抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫作用显著,可作为PRRSV-GP5和PRRSV—M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体,保护机体免受PRRSV的感染。 相似文献
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