脊尾白虾EcR基因的克隆及其在卵巢和胚胎发育过程中的表达分析

为了解蜕皮激素受体(EcR)在脊尾白虾卵巢和胚胎发育中的作用,采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾EcR基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KC506600),用实时荧光定量PCR方法分析了EcR基因在雌虾不同组织、卵巢以及胚胎发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾EcR基因全长2 638 bp,开放阅读框1 713 bp,编码570个氨基酸,脊尾白虾EcR在系统进化上与行抱卵繁殖的真虾类和蟹类亲缘关系较近,而与对虾类较远。脊尾白虾EcR基因在各组织中均有表达,但主要在肝胰腺内表达。在脊尾白虾繁殖期内,肝胰腺内EcR的表达量始终高于卵巢,表达量峰值出现在卵巢成熟时期,而卵巢内EcR的表达量在卵巢成熟前期达到最大,两种组织中EcR表达量与卵黄蛋白原(Vg)质量浓度变化趋势相一致。随着胚胎发育,EcR表达量呈先上升后下降趋势,在原肠期达到最大,前溞状幼体期和溞状幼体Ⅰ期的表达量虽有下降,但仍保持较高水平。结果表明,脊尾白虾EcR基因系统进化方向与虾蟹类不同繁殖方式相吻合,其mRNA主要在肝胰腺内表达;卵巢发育过程中,EcR基因参与了肝胰腺和卵巢中Vg合成,其在肝胰腺中表达量变化与性腺发育指数变化趋势一致,对卵巢成熟有重要作用;在胚胎发育过程中,EcR基因参与了胚胎细胞分化及器官形成。     

Apelin与鱼类摄食

鱼类通过摄食活动获得能量和营养物质,而食欲是影响鱼类摄食的重要因素之一。食欲调控是一个复杂的网络,大脑整合机体能量和摄食信号,通过食欲调节因子（包括促进食欲因子和抑制食欲因子）调控鱼类摄食行为。Apelin作为一种新型内分泌因子,在体内发挥广泛的生物学作用。其中,apelin在摄食调节方面的作用正在引起学者的关注。本文以哺乳动物为参照,综述了apelin的组织分布、饥饿和营养物质对apelin表达的影响、apelin处理对鱼类摄食的影响及其可能的机制和信号通路,旨在为促进鱼类摄食和水产养殖提供参考。     

鱼类肠道菌群影响因子研究进展

肠道菌群在维持肠道健康、促进肠道发育、抵抗病原入侵、调节机体能量吸收和脂质代谢过程中均发挥重要作用。在鱼类学研究中,由于种类繁多、食性差异大、生存环境复杂多变,导致鱼类肠道菌群方面的研究面临巨大挑战。本文在总结常见鱼类肠道微生物组成的基础上,着重介绍了鱼类饵料组成、水环境因子、物种、基因型、发育阶段、养殖模式及投喂策略对鱼类肠道菌群影响的相关研究进展,并对目前研究中存在的问题进行了剖析,以期为鱼类肠道菌群研究提供一定的参考依据。     

基于转录组测序技术筛选花(鱼骨)卵巢发育相关基因

为筛选影响花■卵巢发育相关的基因,采用Illumina Hiseq技术对花■脑、卵巢和肝脏组织进行高通量转录组测序。结果显示,3个组织分别产生了49 484 132、47 540 538和50 622 304个clean reads,组装后共获得了99 878个unigenes,平均长度为1 430 bp。DE seq分析发现,在脑vs.卵巢组中特异性表达的基因数为2 305个,脑vs.肝脏组中特异性表达的基因数为839个,卵巢vs.肝脏组中特异性表达的基因数为1 474个,3个比较组共有的差异表达基因数为860个。GO分析发现,上述差异表达基因主要集中在初级代谢过程(primary metabolic process)、单细胞过程(single-organism process)、有机物代谢过程(organic substance metabolic process)等生物学过程中。KEGG pathway分析显示,一些与卵巢发育和减数分裂相关的信号通路得到了显著富集,如GnRH信号通路、类固醇激素合成、TGF-β信号通路、卵母细胞减数分裂等代谢通路。本研究结果丰富了花■的基因资源,可为花■的繁殖生物学研究提供基础数据。     

鲤irisin多克隆抗体的制备及应用

为进一步研究鱼类糖代谢与鸢尾素(irisin)之间的关系，亟需制备irisin抗体并检测其应用可靠性。本实验通过构建Rosetta-irisin表达载体，经蛋白纯化、透析、超滤后免疫小鼠，获得相应多克隆抗体并检测其特异性和抗体效价。建立irisin检测方法，检测口服葡萄糖耐量(OGTT)、RNAi实验后鲤血清irisinA和irisinB的含量变化。免疫荧光检测鲤脑、肠道、心脏、肝胰脏irisin的表达及OGTT后，检测上述组织irisin含量变化。检测鲤肌细胞分化前后FNDC5 mRNA表达差异及irisin含量变化。结果显示，Rosetta-irisin表达载体在IPTG诱导4 h对鲤irisinA/B蛋白表达较BL21-irisin表达载体提高2.3/1.6倍；irisinA和irisinB抗体效价分别为9.0×10⁴和2.7×10⁵，不存在交叉反应，可分别对鲤血清irisinA和irisinB进行测定；OGTT后，irisinA和irisinB呈现出不同的合成变化；RNAi后，irisin含量显著降低；免疫荧光结果显示，irisin在脑中表达最高，肝胰脏次之，心脏、肠道中相对较少；OGTT后，脑、肠道、心脏和肝胰脏中irisinA和irisinB荧光强度显著增加。荧光定量表达分析与免疫荧光结果显示，鲤肌细胞分化后，FNDC5和irisin含量显著降低。综上，本实验制备了高亲和力和特异性的鲤irisinA和irisinB抗体，并检测其应用可靠性。该抗体的获得为系统研究irisin对鲤糖代谢的调控机制奠定基础。同时，鲤irisin检测方法可普遍用于其他鱼类irisin蛋白质水平的定量研究。     

高糖饲料中添加沙棘粉对黄河鲤生长性能、抗氧化能力和非特异性免疫的影响

为研究沙棘粉对黄河鲤生长性能、抗氧化能力和非特异性免疫的影响，实验选用初始体重约为7.55 g的黄河鲤450尾，随机分为5组，即对照组(control组)、高糖组(HG组)、高糖+0.1%沙棘粉组(G-LSP组)、高糖+0.3%沙棘粉组(G-MSP组)和高糖+0.5%沙棘粉组(G-HSP组)，开展为期10周的养殖实验。结果显示，与高糖组相比，G-HSP组黄河鲤的增重率(WGR)显著提高。与对照组相比，高糖组黄河鲤血清和肝胰脏中丙二醛(MDA)含量升高，过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(TAOC)降低，而补充沙棘粉可减轻这些负面影响。高糖饲料抑制了肝胰脏和肌肉中nrf2mRNA的表达水平，上调了keap1 mRNA的表达水平。沙棘粉对高糖引起的nrf2 mRNA表达水平的降低和keap1 mRNA表达水平的升高有显著的抑制作用。沙棘粉可显著提高受Nrf2调控的下游转录因子(gr、cat、gpx和sod)的mRNA表达水平。此外，添加0.5%的沙棘粉能显著提高血清、脾脏和肠道中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性和白蛋白(Alb)...     

高脂饲料添加地黄或山药对黄河鲤生长、血清生化指标和脂代谢的调节作用

在黄河鲤(Cyprinus carpio haematopterus)高脂饲料中添加地黄粉或山药粉,旨在探讨两种添加物能否改善高脂对鲤生长、生理和脂代谢的不利影响。分别配制基础饲料、高脂饲料(脂肪含量14%)、高脂饲料+4%地黄粉、高脂饲料+2%山药粉4种实验饲料。将360尾初始体重为(79.97±9.86)g的健康黄河鲤随机分为4组:对照组(NC)、高脂组(HLD)、地黄添加组(HLD+R)和山药添加组(HLD+Y),并分别饲喂上述饲料。养殖实验共进行12周,其中前3周饱食投喂,之后改为等量投喂。分别在第3周、第7周和第12周末进行取样,检测生长和血清生化指标、肝胰脏脂肪含量和脂代谢相关基因的表达量。结果表明:高脂饲料显著降低了黄河鲤的生长速度,而在高脂饲料中添加地黄粉或山药粉可在一定程度上改善这种作用。高脂饲料可引起黄河鲤血清谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性显著升高(P<0.05),地黄或山药均可显著降低血清ALT活性,而对ALP活性无影响;在前三周饱食投喂的情况下, HLD组和HLD+R组的乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于NC组(P<0.05),之后各组...     

同域分布两种鲤科鱼类种群遗传结构的比较

为了解河南省境内黄河水系和卫河水系棒花鱼和（歺又鱼）条的鱼类遗传多样性现状，利用线粒体细胞色素b（cytb）基因，对这两种鱼类开展群体遗传学研究。结果显示，棒花鱼和（歺又鱼）条群体多态性较低；系统发育树和单倍型网络图结果显示棒花鱼和（歺又鱼）条均由3个线粒体谱系组成；棒花鱼和（歺又鱼）条种群间均存在明显的遗传分化，种群间中等偏低的基因流解释了两种鱼类均具有较低的遗传多样性和明显的种群分化；群体历史动态分析显示，棒花鱼和（歺又鱼）条种群数量分别在距今约0.019百万年和0.026百万年开始锐减。鉴于群体多态性，种群分化和群体历史动态研究，这两种鱼类的遗传多样性均较低，需加强对其资源保护。     

淇河鲫IL-8原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与鉴定

为揭示淇河鲫(Carassius auratus var.Qihe)白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的功能,本研究构建了原核表达系统,并制备了兔抗鲫IL-8多克隆抗体。首先采用RT-PCR法扩增淇河鲫IL-8基因编码序列中不含信号肽的基因片段,克隆到pET-32a(+)载体后转化入Rosetta菌株构建原核表达系统。经IPTG诱导表达出相对分子质量约27.8 kD的目标融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,效价达1︰10~5。经免疫亲和层析纯化的抗体能特异性识别重组和天然的淇河鲫IL-8蛋白。比较不同组织的免疫组化和荧光定量PCR结果,IL-8蛋白量和mRNA的表达量在不同组织间变化趋势一致,在肌肉、脾和头肾均检测到较高的表达量,肠道的表达量较低。本研究为进一步探讨淇河鲫IL-8的生物学功能奠定了基础。     

基于线粒体COI基因的河南境内四水系日本沼虾种群遗传多样性

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)是一种经济价值较高的淡水虾类, 广泛分布于我国各淡水水体, 其在河南境内各水系均有分布。随着水产养殖业的发展、水域生态环境的变化及人为因素的影响, 日本沼虾的种质资源也逐渐受到影响。为评估河南境内水系日本沼虾的种质资源现状及其遗传多样性, 本研究利用线粒体 COI 基因对河南境内 18 个地理群体 135 尾日本沼虾开展种群遗传学研究, 样品覆盖河南境内的长江、黄河、淮河和海河 4 个水系。结果显示, 河南境内日本沼虾 18 个地理群体共包含 27 个单倍型, 群体平均单倍型多样性(H_d)为 0.78574, 平均核苷酸多样性(π)为 0.01059, 其中淮河水系日本沼虾群体平均遗传多样性最低, 长江水系日本沼虾群体平均遗传多样性最高, 且各水系群体均显示出高 H_d 低 π 的特点。AMOVA 分析显示, 日本沼虾遗传变异主要来源于日本沼虾群体内(66.03%), 群体间遗传变异为 40.22%。系统发育树和单倍型网络均未显示出明显的水系分化。中性检验、错配分布及贝叶斯天际线分析表明, 日本沼虾群体近期没有发生种群扩张, 群体相对稳定。本研究可为河南境内日本沼虾种质资源的保护和合理开发利用提供参考。