棉花TRAP-PCR扩增体系的建立

为将新型分子标记-靶位区域扩增多态性(target region amplified polymorphism,TRAP)应用到遗传棉花多样性研究中,分析了不同浓度梯度的模板DNA、Mg2+ 、dNTPs、Taq酶与引物浓度对TRAP-PCR扩增结果的影响.确立了稳定性强、重复性好的棉花TRAP-PCR最佳反应体系:在15 μL的TRAP-PCR反应体系中,含10×buffer 1.5 μL,25 mM MgCl2 1.5 μL,2.5 mM dNTPs 2.0 μL,20 mM固定引物0.75 μL,20 mM随机引物0.15 μL,100 ng/μL DNA 0.5 μL,Tap酶0.2 μL.结果表明优化后的TRAP-PCR反应体系可应用于棉花遗传多样性分析研究中.     

鲅鱼皮酸溶性胶原蛋白提取及分子特性的初步研究

[目的]在分子水平上初步探究酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白的特征性.[方法]在提取方法中用L9(34)正交试验寻求最佳提取条件.在分子特征性研究中检测了胶原蛋白紫外吸收图谱,并使用SDS - PAGE电泳 .测定分子量.[结果]酸溶性鲅鱼皮胶原蛋白的最佳提取条件是提取液浓度为0.2 mol/L柠檬酸溶液、固液比1:30、提取48 h;所提取出的胶原蛋白在230 nm处有显著吸收峰而在260 nm处无吸收峰是酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白的特征性之一.[结论]SDS - PAGE电泳图表明酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白含有2条α链(a1和a2)、β、γ链,分子量约为127、115、278、343 kDa,根据文献可知该胶原为典型的Ⅱ型胶原蛋白.     

新疆巴旦木花药总RNA的提取

[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究.     

地高辛随机引物法标记探针的Southern杂交技术优化

为检测转基因抗虫棉中的Bt Cry1A基因的表达,采用地高辛随机引物法标记探针、化学发光检测的Southern杂交技术,通过纯化探针、使用最适探针浓度、优化真空转印、杂交及免疫检测方法等一系列优化过程,最终得到背景低、信号强的Southern杂交结果。     

硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立

对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究.结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA.较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响.通过A2s0/A280,琼脂糖凝胶电泳和PCR-SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR-SSR反应体系是30～50 ng DNA模板,0.5UTaqDNA聚合酶,2.0mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.2 mmol·L-1的引物,10×Taq酶配套缓冲液(pH 8.0),反应终体积20uL,引物最佳退火温度为54～57C.利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200～600 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好.     

库尔勒香梨的传粉生物学研究

2008年阿克苏地区库尔勒香梨4月5日进入初花期,花期持续约15 d.单花开放时间5～6 d,花粉寿命25 d,柱头可授性在开花第1～2 d内最强.花粉胚珠比(p/o值)为12 186±2 603,属异交繁育系统.花部形态具有典型的动物传粉特征,结实必须依赖传粉昆虫或人工授粉,意蜂、鼠尾管食蚜蝇等膜翅目和双翅目昆虫是有效传粉者,昆虫有效传粉距离约20 m.砀山、早酥和红香酥等梨品种与库尔勒香梨花期相遇并均能有效提高其坐果率.     

番茄苗期响应盐胁迫的生理特性研究

[目的]研究番茄苗期响应盐胁迫生理指标及其变化规律.[方法]以盐敏感番茄品种M82和耐盐渐渗系IL7-5-5幼苗为材料,在室内利用1/2 Hoagland营养液进行水培养,通过200 mmol/L NaCl胁迫处理,分别在加盐后0、1、12、24h取样测定每个材料在各时间点叶片中丙二醛、脯氨酸和超氧化物歧化酶的含量,每个处理设3次重复.[结果]在盐胁迫条件下,耐盐番茄IL7-5-5较敏感番茄M82可保持较低的膜脂过氧化程度、较好的膜完整性以及较高的超氧化物歧化酶活性,从而保持细胞膜的有序性和稳定性;同时,耐盐番茄IL7-5-5可通过主动积累游离脯氨酸进行渗透调节,降低渗透势,提高渗透调节能力,从而保持相对较好的叶片水分状况.[结论]丙二醛、脯氨酸和超氧化物歧化酶的含量与活性可以作为番茄耐盐的评价指标,也可以通过检测这3种生理指标的变化筛选番茄耐盐品种.     

胡桃EST-SSR标记的筛选及引物设计

[目的]筛选胡桃的EST-SSR分子标记并对其进行引物设计。[方法]利用生物信息学方法对NCBI网上公开的5213条胡桃（Juglans regia Linn.）ESTs序列进行EST-SSR特征分析,利用利用Primer3.0软件对筛选出的EST序列设计引物。[结果]在ESTs序列中共检索出207个SSR,其中无冗余序列188,检出率为3.97%,平均分布距离为21.12kb,包括92种重复基元,其中以二核苷酸和三核苷酸重复类型为主,分别占总数目的31.40%和35.27%;对随机筛选出的50条SSR引物进行PCR扩增验证,初步筛选出30对引物。[结论]通过对胡桃EST序列中SSR位点的发掘分析,有针对性地设计EST-SSR引物,将为胡桃科EST-SSR分子标记的开发奠定基础。     

新疆核桃种质资源遗传多样性的ISSR分析

[目的]通过ISSR标记技术,对新疆核桃种质资源的遗传多样性及遗传结构进行分析,为该资源的保护与利用提供理论依据和技术支持.[方法]采用ISSR标记对5个居群和1个栽培类型共163份样品进行遗传多样性分析.[结果]用13条引物对163份样品进行扩增,共检测扩增位点117个,其中多态性位点98个.在物种水平上,多态性位点百分率(PPL)为83.76%,Nei's基因多样性(H)为0.3010,Shannon信息指数(Ⅰ)为0.4182;在居群水平上,多态性位点百分率平均为68.36%,Nei's基因多样性(H)平均为0.1 265,Shannon信息指数(Ⅰ)平均为0.1651.基于Nei's遗传多样性分析得出的居群间遗传分化系数(Gst)为0.6425,表明有64.25%的遗传变异存在于居群间.居群间的遗传一致度平均为0.7499,估测的居群问基因流(Nm)为0.2782,表明核桃采集的6个居群或类型之间存在较小的基因流.AMOVA方差分析也表明居群间的核桃遗传变异大于居群内.Mantel检测与UPGMA聚类均表明居群间的遗传距离与居群的地理距离之间具有较高的相关性.[结论]新疆核桃遗传多样性水平较高,居群之间遗传分化大,种质资源保护和利用策略首选就地保护;在就地保护过程中,通过监测遗传多样性水平可评价其保护的有效性.     

奶牛乳腺上皮细胞体外培养体系的建立

通过乳汁中提取细胞进行传代培养获得增殖且可分泌特异性酪蛋白的奶牛乳腺上皮细胞,细胞形态以鹅卵石型和多角型为主,逐渐趋于多角型.当多角型细胞增殖融合到一定阶段,会出现乳头状和圆顶型结构.并进一步对泌乳中后期乳汁分离的细胞做细胞生物学性状检测:细胞接种存活率达到81;;细胞生长曲线呈典型的"S"形,符合细胞生长的一般生物学规律;细胞群体倍增时间最短达48.7 h;经过对乳腺上皮细胞特异性分泌蛋白-酪蛋白的检测,证明培养获得的细胞为乳腺上皮细胞,且具有正常分泌乳蛋白功能.试验初步建立了奶牛乳腺上皮细胞的体外培养体系.