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101.
为深入了解绵羊myostatin基因的表达及调控机理,进行了绵羊myostatin蛋白多克隆抗体的制备.首先将绵羊myostatin基因C-端克隆人含组氨酸标签的表达载体pET-30a-c(+)中,转化大肠杆菌BL21后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化重组蛋白,薄层扫描及Bradford法分别检测纯化后蛋白的纯度与含量.应用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测多克隆抗体效价,用Western blot及免疫细胞化学染色检测抗体特异性.结果,薄层扫描分析纯化后蛋白纯度可达95%以上,Bradford法检测蛋白浓度约5 mg·mL-1,制备的抗血清效价可达1:250 000以上,Western blot检测证明抗体特异性良好,免疫细胞化学染色表明抗血清可检测剑肌肉细胞中内源性myostatin的表达,说明所制备的多克隆抗体可以应用于进一步研究,有助于阐明绵羊myostatin的表达及调控机理. 相似文献
102.
Sry—PCR法快速鉴定体外培养兔胎儿成纤细胞系的性别 总被引:5,自引:0,他引:5
从怀孕17d母兔取得3个胎儿,分离培养得到3个胎儿成纤维细胞系RFF1、RFF2和RFF3。通过扩增兔sry基因核心序列片段对3个细胞系的性别进行鉴定(Sry-PCR),结果表明:RFF1和RFF3为雄笥,RFF2为雌性,进一步利用染色体核型分析法鉴定3个细胞系的性别,与Sry-PCR法的结果完全一致。因此表明本实验所用的Sry-PCR的引物、细胞基因组DNA的提取方法、PCR反应条件是合适的,可以快速准确地鉴定体外培养的兔胎儿成纤维细胞的性别。 相似文献
103.
北京奶山羊β乳球蛋白基因(βlg)的克隆及其调控序列的分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从北京奶山羊白细胞中提取高分子量基因组DNA,用Sau3A部分酶切,连接到经BamHI-EcoRI酶切过的λEMBL3载体上,构建了6.7x106plus的基因组文库.荧光标记牛βlg5'端0.5kb片段作探针,原位杂交得到4个阳性斑A、B、C和D.三轮杂交后,经PCR产物序列分析和物理图谱分析,发现克隆D(10.6kb)包括完整的β乳球蛋白基因,其5'侧翼序列长为3.8kb,3'侧翼序列长为2.2kb.将克隆D5'和3'调控区亚克隆,发现5'侧翼序列包含βlg核心启动子,3'侧翼序列具有MAR序列.比较北京奶山羊与绵羊β乳球蛋白基因的5'侧翼序列和3'侧翼序列,发现它们的同源性分别是90%、89%.结果分析表明,克隆D为β乳球蛋白的编码基因. 相似文献
104.
105.
106.