斑鳜胃蛋白酶原C及其5'侧翼区的克隆及序列特征分析

采用RT-PCR和RACE等技术克隆了斑鳜(Siniperca scherzeri)胃蛋白酶原C(pepsinogen C,PGC)的cDNA全长和部分DNA序列,结果表明:PGC cDNA序列全长1 505 bp,5'端非翻译区37 bp,3'端非翻译区304 bp,开放阅读框架(ORF)1 164 bp,共编码含有387个氨基酸的蛋白质,包括由16个氨基酸组成的信号肽、39个氨基酸的激活肽和332个氨基酸的成熟肽.斑鳜PGC氨基酸序列与斜带石斑鱼、伯氏豚虾虎鱼、狼鲈、美洲红点鲑4种鱼的相似度分别为92.0%、91.5%、90.2%、89.1%,与非洲爪蟾、鸡、人、兔、褐家鼠的序列相似度分别为76.8%、72.8%、72.5%、69.9%、67.3%,表明PGC基因在长期的进化中较为保守.PGC基因由9个外显子和8个内含子组成,内含子剪切位点符合GT-AG规则,在第7含子中发现(GACA)6、(CA)6类型的微卫星序列,第8内含子中发现(TG)5类型的微卫星序列.采用锚定PCR方法获得了PGC 5'侧翼区长1 924 bp的序列,启动子区域位于-40～+10 bp,包含TATA盒以及GATA-1、CdxA、Hand1/E47、AP-1、Nkx-2、S8、FOX J2等转录因子的结合位点.结果为进一步研究该基因的表达、功能及其转录调控特征奠定了分子基础.     

中华鳖同工酶的组织特异性研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶水平电泳和激光扫描法,研究了中华鳖ＬＤＨ、ＭＤＨ、ＥＳＴ、ＳＯＤ、ＩＤＨ、α－ＧＰＤＨ、Ｇ－６－ＰＨＤ同工酶在肌肉,肝脏,肾,心,脾,精巢,卵巢等组织器官中的表达,并对其遗传位点进行了分析。在研究的７种同工酶中,除ＭＤＨ在各组织中表型一致外,其他同工酶均有明显的组织特异性。     

池塘溶氧昼夜变化对鳜葡萄糖代谢和血糖含量的影响

为探究池塘溶氧昼夜变化对鳜(Siniperca chuatsi)葡萄糖代谢和血糖含量的影响,本研究分别在17:00 (T1)、23:00 (T2)、次日07:00 (T3)、11:00 (T4)、17:00 (T5)共5个连续时间点采样并测定分析,比较了鳜池塘常氧组(>5 mg/L)与昼夜溶氧变化组葡萄糖代谢相关指标的时序差异。结果显示,1 d中,池塘溶氧经历常氧与低氧的周期性变化,T3时,池塘溶氧最低,平均为0.93 mg/L;T5时,池塘溶氧最高,平均为10.58 mg/L。T3和T4时,血浆中葡萄糖显著降低,乳酸含量显著升高;肝脏中肝糖原含量下降,乳酸含量显著升高,ATP含量显著降低;肝脏有氧代谢柠檬酸合酶(CS)活性显著降低,无氧代谢酶乳酸脱氢酶(LDH)活性显著升高;糖酵解酶中己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)活性显著升高,糖原分解酶糖原磷酸化酶(GP)活性无显著变化;hk、pfk、pk、ldh-a和gp基因表达量显著上升,cs表达量显著下降,葡萄糖转运蛋白glut2表达量无显著变化。研究表明,鳜养殖池塘中,溶氧存在昼夜周期性交替变化,溶氧水平的下降会引起鳜葡萄糖代谢发生变化,由有氧代谢转变为无氧代谢而导致能量利用方式发生变化。     

中华绒螯蟹长江种群与辽河种群-龄阶段的成活率与生长性能比较

采用完全随机区组设计,对中华绒螯蟹长江种群与辽河种群在一龄阶段的成活率和生长性能进行了比较试验。对两种群群各生长月份的体重、壳长和壳宽等数据进行线性模型方差分析。结果表明：（１）长江种群与辽河种群的成活率和增重率差异不显著（Ｐ〉０．０５）。（２）长江种群与辽河种群各月份生长差异不显著（Ｐ〉０．０５）,月份间的生长差异均极显著（Ｐ〈０．０１）;两种群雄性月平均体重均高于雌性,但差异不显著（Ｐ〉０．０５）。（３）两种群个体生长差异明显,变异系数达４０以上,长江种群的系数高于辽河种群,但差异不显著（Ｐ〉０．０５）。     

中国少鳞鳜不同地理群体遗传变异的AFLP分析

少鳞鳜为东亚特有淡水鱼类,为了解中国少鳞鳜种内不同地理群体的遗传特征,利用AFLP技术对长江、钱塘江、西江、南渡江4个群体共65尾样品的遗传变异进行了分析。10对引物共检测条带1131条,多态性条带603条,平均多态比例为53.32%;而长江、钱塘江、西江、南渡江群体内的多态位点比例、平均基因多样性和Shannon指数均较低。群体间的遗传距离以大陆3群体间较近(0.098～0.189),南渡江群体与其他群体较远(0.507～0.568)。分子方差分析(AMOVA)表明群体间存在极显著的差异(FST = 0.972)。NJ聚类关系显示4群体分为两支,一支为大陆群体;一支为南渡江群体。群体内遗传多样性较低可能与中国少鳞鳜为溪涧性鱼类,群体数量不大,基因库贫乏有关,而群体间缺乏基因交流以及遗传漂变导致了不同地理群体间产生了极显著的遗传分化     

鳜(♀)×斑鳜(♂)杂种F_1的形态特征与微卫星分析

2006-2008年,在浙江湖州开展了鳜(Siniperca chautsi)与斑鳜(Siniperca scherzeri)的种间杂交试验,并成功获得了鳜(♀)×斑鳜(♂)杂种F1。通过对杂种F1与其亲本的形态差异比较和微卫星标记分析,探讨了杂种F1的性状变异和遗传特征。结果表明:(1)7个可数性状中,杂种F1的背鳍条、腹鳍条和胸鳍条数与父母本一致,臀鳍条、鳃耙数与母本基本一致,侧线鳞、幽门盲囊数目介于父、母本之间;10个可量性状的平均杂种指数为39.08,显示杂种F1的可量性状略偏向母本;框架参数和可量性状的聚类分析、判别分析和主成份分析表明,杂种F1的体型介于父、母本之间,略倾向于母本,主要表现在躯干部和尾部的差异。(2)5对微卫星引物分析表明,杂种F1的等位基因均来源于双亲,杂交子代的遗传符合孟德尔遗传规律,属两性融合生殖,是真正意义上的杂交种。     

鳜(♀)×斑鳜(♂)杂种F_1的形态特征与微卫星分析

2006-2008年,在浙江湖州开展了鳜(Siniperca chautsi)与斑鳜(Siniperca scherzeri)的种间杂交试验,并成功获得了鳜(♀)×斑鳜(♂)杂种F1。通过对杂种F1与其亲本的形态差异比较和微卫星标记分析,探讨了杂种F1的性状变异和遗传特征。结果表明:(1)7个可数性状中,杂种F1的背鳍条、腹鳍条和胸鳍条数与父母本一致,臀鳍条、鳃耙数与母本基本一致,侧线鳞、幽门盲囊数目介于父、母本之间;10个可量性状的平均杂种指数为39.08,显示杂种F1的可量性状略偏向母本;框架参数和可量性状的聚类分析、判别分析和主成份分析表明,杂种F1的体型介于父、母本之间,略倾向于母本,主要表现在躯干部和尾部的差异。(2)5对微卫星引物分析表明,杂种F1的等位基因均来源于双亲,杂交子代的遗传符合孟德尔遗传规律,属两性融合生殖,是真正意义上的杂交种。     

尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂杂交后代的遗传分离分析

应用微卫星标记对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)♀×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)♂杂交后代(F1、F2)的遗传分离情况进行了初步研究.在86对微卫星引物中,筛选出21对在尼罗罗非鱼和萨罗罗非鱼中存在差异等位基因的特异性引物,共检测出59个等位基因,包含32个尼罗罗非鱼和24个萨罗罗非鱼特异等位基因.F1观测杂合度(Ho=0.998)大于 F2(Ho=0.739), F2有效等位基因数(Ne=2.48)、平均多态信息含量(PIC=0.497)与 F1的(Ne=2.45、PIC=0.489)相似.F1中所有位点均表现为尼罗罗非鱼与萨罗罗非鱼杂合基因型.F2中位点等位基因分离情况各异,通过卡方检验,有18个位点符合孟德尔遗传(P>0.05),2个位点GM145、UNH003表现为偏离孟德尔遗传(P<0.05),1个位点GM276不分离.在18个孟德尔遗传位点中, F2中尼罗罗非鱼特异等位基因频率为48.3%,萨罗罗非鱼特异等位基因频率为47.7%;基因型出现F1型、尼罗罗非鱼型、萨罗罗非鱼型的比例分别为58.2%、19.9%、21.9%.结果表明, F2较好地继承了F1的遗传杂合性,但也存在一定程度的分离.     

不同盐、碱度下3品系尼罗罗非鱼幼鱼网箱养殖的生长比较

以慢性驯化后的上海、山东、河北品系尼岁岁非鱼（Oreochromis niloticus）幼鱼为试验材料,比较它们在盐度组（0、15和20）、碳酸氢钠（NaHCO3）碱度组（1 g·L^-1、2 g·L^-1和3 g·L^-1）以及盐碱混合组（15,1 g·L^-1;15,2 g·L^-1;15,3 g·L^-1;20,1 g·L^-1;20,2 g·L^-1和20,3 g·L^-1）条件下网箱养殖成活率和日均增重率差异.62d试验结果表明,上海、山东、河北品系尼罗罗非鱼幼鱼在不同盐度、碱度、盐碱混合处理组中的成活率差异不显著（P＞0.05）,而日均增重率的差异显著（P＜0.05）.随着盐度、碱度增加,尼罗罗非鱼生长速度大体呈下降趋势;盐碱混合组生长速度较单盐、单碱组减慢.还发现不同品系尼罗罗非鱼在不同盐碱梯度下表现出不同的相对生长优势.研究结果为尼罗罗非鱼适宜养殖的盐碱范围确定、品系筛选提供了重要的基础资料.     

鳜三种生长抑素cDNA全长克隆、组织表达及其在脑中定位分析

利用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了鳜脑中3种生长抑素前体(preprosomatostatin,PSSⅠ、PSSⅡ和PSSⅢ)cDNA全长序列。结果显示,鳜PSSⅠcDNA全长647 bp,含开放阅读框369 bp,共编码122个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽,C端SS-14在脊椎动物中非常保守;PSSⅡcDNA全长655 bp,开放阅读框387 bp,编码128个氨基酸,前25个氨基酸为信号肽,C端带有[Tyr7,Gly10]SS-14;PSSⅢcDNA全长823 bp,开放阅读框333 bp,共编码110个氨基酸,前21个氨基酸为信号肽,C端带有[Pro2]SS-14。利用RT-PCR检测了鳜PSS mRNA的组织表达特征,3种PSS mRNA均在脑中表达,PSSⅠmRNA在其他组织中未检测到表达,PSSⅡmRNA在食道和胃中大量表达,PSSⅢmRNA在肾和性腺中大量表达。推测3种PSS除一致参与神经调控外,PSSⅡ还可参与消化作用调控,PSSⅢ参与调控生殖作用。脑组织原位杂交分析表明,PSSⅠmRNA在下丘脑和延脑中表达,PSSⅡmRNA在下丘脑中表达,PSSⅢmRNA在下丘脑、视觉盖、延脑和脊髓中表达。3种PSS均在下丘脑中表达,表明它们可能参与腺垂体激素分泌的调节;在其他脑区存在表达差异,推测它们还可作为神经递质或调节因子,发挥不同的生物学效应。