PCR法克隆紫穗槐4-香豆酸:CoA连接酶全长cDNA

4 香豆酸 :CoA连接酶 (4CL)是木质素生物合成过程中重要的酶 .该文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法直接获得了紫穗槐 4CLAcDNA全长序列 ,避免了复杂的构建、筛选cDNA文库的过程 .先用简并PCR得到了 4CLA1片段 ,又据此片段设计反向嵌套引物 ,用RACE方法获得未知的 5′和 3′端序列 .所获得的全长 4CLAcDNA ,编码 5 40个氨基酸 .氨基酸序列同源性分析表明4CLA是典型的 4CL蛋白 ,含有预计的AMP binding位点、催化反应区和保守的Cys .     

SAMDC基因对一串红侧枝发育的影响

以一串红35及35-1为试验材料,采用实时荧光定量PCR技术,研究了S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因在35及35-1不同发育时期、不同部位的表达情况。结果表明:幼苗期腋芽未形成和腋芽形成后35中SAMDC基因的相对表达量均低于35-1;营养生长期35的茎节、根尖及侧枝顶芽中SAMDC的表达量均高于35-1,且差异显著。试验表明,SAMDC在一串红幼苗顶芽中相对表达量高,可促进植株细胞分裂分化形成侧芽;营养生长期SAMDC相对表达量低,可促进分支和枝条伸长生长。     

菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据PMWa V-3外壳蛋白基因的保守区域设计特异性引物和探针,通过优化PMWa V-3实时荧光定量PCR检测体系,构建以重组质粒为标准品的标准曲线,建立起PMWa V-3实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能特异性地检测PMWa V-3,且灵敏度是普通RTPCR的10倍;该方法重复性良好,组间和组内变异系数均小于1.73。【结论】建立的实时荧光定量PCR方法是一种快速、简便、可信度高的PMWa V-3定量检测方法。     

牛蒡上发生的根结线虫种类鉴定

2007～2009年,对我国牛蒡主产区的牛蒡及其根际土壤中的植物寄生线虫进行调查研究,发现根结线虫危害最为严重。根据根结线虫的形态学特征和分子生物学检测方法对其进行鉴定,结果表明,我国牛蒡主产区根结线虫种类为北方根结线虫(Meloidogyne hapla)。     

普通杏品种SSR遗传多样性分析

利用来自杏、桃和扁桃的25对SSR多态性引物对66个普通杏品种进行了PCR扩增及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,共检测出284个等位位点,每对引物的等位位点数在3～17之间,平均为11．36。通过NTSYS软件计算得到的Dice相似性系数为0．083～0．987,平均值为0．370,     

土壤微生物总 DNA 提取及其 PCR 优化

采用3种不同土壤微生物总 DNA 提取方法对广东省乐昌杨东山十二度水自然保护区的样地土壤进行比较研究,进一步通过 PCR 扩增,研究牛血清白蛋白(BSA)对整个 PCR 扩增过程的影响。结果表明：试剂盒提取法相对于其他两种提取方法更加方便有效,当土壤样品量比较大时,直接提取法是最经济有效的方法;而在土壤微生物的 PCR 扩增实验中,加入2μl 的 BSA,可以有效地抑制腐殖酸等对后续 PCR 扩增的影响。     

杉木单染色体的显微分离及体外扩增

染色体微分离及体外扩增是传统细胞生物学和现代分子生物学相结合而发展起来的一项新技术.自1981年Scalenghe等[1]首次在果蝇唾腺染色体上取得成功后,该技术很快在人及动物分子遗传学研究中得到广泛应用,并取得很多重要的结果.     

mRNA差异显示技术及其在植物抗寒基因研究中的应用

mRNA差异显示技术自1992年建立以来，成为分子生物学领域的一个研究热点，并在许多领域得到了广泛应用。本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理，其存在的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服、cDNA片段克隆测序及完整基因的筛选。此外，对其在植物抗寒基因研究中的应用作了简要介绍。     

酿酒酵母菌诱导SBD-1 mRNA表达的研究

为了探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1,SBD-1)表达的调节作用。建立绵羊瘤胃上皮细胞培养体系作为体外试验模型,用不同浓度酿酒酵母菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞刺激2 h后分别进行不同时间的诱导培养,然后利用实时荧光定量PCR技术(RT-q PCR)研究接受刺激后瘤胃上皮细胞中SBD-1 mRNA表达的差异。结果表明,在各时间组内,SBD-1 mRNA的表达量随着菌液浓度的增加均呈先升高后降低的趋势,当菌液浓度为5.2×107CFU/m L时表达量均达到最大,并与对照组和其他浓度组相比差异极显著(P﹤0.01)。当菌液浓度一定时,SBD-1 mRNA的表达量先是随着诱导培养时间的延长而呈上升趋势,诱导培养时间为12 h时SBD-1 mRNA表达量达到峰值,之后呈下降趋势。因此,当浓度为5.2×107CFU/m L的菌液诱导瘤胃上皮细胞12 h时,SBD-1基因的表达量达到最高,且与此浓度下其他时间组的表达量相比差异极显著(P﹤0.01)。本试验结果表明,酿酒酵母菌能够诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且浓度为5.2×107CFU/m L的菌液诱导瘤胃上皮细胞12 h时,SBD-1的表达量达到最高。     

荷斯坦奶牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC诊断方法的建立及应用

为有效检测荷斯坦奶牛瓜氨酸血症,采用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立方法。制备纯合突变、野生型的基因模板,优化PCR反应体系,制备异源双链体系,建立DHPLC检测方法,确定最佳的检测条件。对262个血液样本用建立的方法进行检测,发现4个杂合子个体,并通过了测序验证。结果显示,建立的PCR-DHPLC的方法与测序检测结果一致,表明所建立的PCR-DHPLC方法可以用于检测瓜氨酸血症。PCR-DHPLC是一种高通量、准确性高、特异性好的检测方法。