间接免疫荧光方法快速检测番鸭呼肠孤病毒病

本研究应用具有免疫荧光特性的抗番鸭呼肠孤病毒病单克隆抗体(MDRV 237-11)建立了检测番鸭呼肠孤病毒病抗原的间接免疫荧光(Mab-IFA)方法。结果显示人工感染MDRVMW9710株病毒后发病和死亡番鸭组织切片均可检出阳性病灶;且组织匀浆经尿囊腔途径接种12日龄番鸭胚,取死亡胚心制作冰冻切片进行IFA鉴定呈阳性结果。表明该方法特异性好、可用于快速检测番鸭呼肠孤病毒病。     

猪肺炎支原体168株特异性单抗的制备及鉴定

将猪肺炎支原体168株全菌蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,3次亚克隆后,获得了4株针对168株全菌蛋白的单抗,分别将其命名为2F5、2G7、4F5、5E9。Western-blot检测结果表明,2G7、4F5与猪肺炎支原体具有特异性反应条带,不与猪鼻支原体、大肠杆菌反应。亚型鉴定结果表明,两株特异性单抗(2G7、4F5)的亚型属IgG1,轻链为κ型,2F5、5E9亚型属IgG2a,轻链为κ型。间接免疫荧光结果表明,4株单抗均与猪肺炎支原体168株有特异性荧光反应,特异性单抗的获得为猪肺炎支原体的检测及机理研究奠定基础。     

鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究

【目的】探讨鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法（IFA）对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数（WBC）、红细胞总数（RBC）、血小板总数（PLT）和总蛋白（TP）、血红蛋白（HGB）含量及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。     

非洲猪瘟病毒特异性抗体检测研究进展

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)会引发猪的急性、烈性、高度传染性疾病,因其病程短、传播迅速、死亡率高,严重影响中国养猪业健康发展。目前市场上仍缺乏有效的疫苗,因此ASFV抗体检测技术也可以作为ASFV诊断的参考方法。开发快速简便的抗体检测技术,对于大规模的流行病学调查和无症状感染/康复猪的筛查尤为重要。本文系统总结了现有ASFV抗体检测技术和最新研究进展,阐述ASFV特异性抗体检测意义和ASFV特异性抗体检测样本类型,重点考察了ASFV特异性抗体检测常用的靶标以及检测靶标的筛选及其应用,比较了ASFV抗体检测的主要检测方法,明确了ASFV抗体检测的改进方向,并指出即时、即地、精准、快速以及自动化将是未来ASFV抗体检测技术的发展趋势。     

利用荧光定量RT-PCR法与间接免疫荧光法比较测定猪瘟兔化弱毒病毒含量

利用荧光定量RT-PCR技术与间接免疫荧光技术(IFA)对12份猪瘟兔化弱毒(ST细胞毒)病毒含量与毒价进行了测定,并与兔体反应热法测定结果进行了比较分析。结果显示:12份猪瘟兔化弱毒(ST细胞毒)可根据兔体感染量分为4组,各组间荧光定量RT-PCR法与IFA法测得的病毒含量间差异极显著(P<0.01);3种方法的检测结果间呈显著正相关性(γ>0.9)。研究结果提示:可用荧光定量RT-PCR技术结合IFA替代传统的兔体反应热法,高通量、快速、准确地测定猪瘟兔化弱毒病毒含量,其有助于简化疫苗检验工作并提高准确度。     

犬细小病毒病酶标快速诊断试验盒的比较诊断研究与应用

<正>关于犬细小病毒的诊断,国内外报道的方法很多,如一般临床检查法、白细胞分类和计数法、电镜和免疫电镜检查法、血清学检查法等,血清学诊断法又包括血凝和血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验对流免疫试验、中和试验等。这些诊断方法中有些虽然简便,但特异性不强,诊断的标准率不高;而有些方法虽然诊断准确率高,但由于设备条件所限,无法在基层宠物临床上应用。     

蛋清样品的反应时间和加入量对禽白血病抗原检测结果的影响

目前,控制禽白血病的主要方法是通过病原的检测,淘汰阳性鸡,净化种群。虽然已建立了检测ALV的多种方法,如琼脂扩散试验(AGP)、补体结合试验(COFAL)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)等,其中最为理想的检测方法是ELISA法,它具有敏感性高、简便快捷、适用于大规模检测的特点。IDEXX FlockChek禽白血病抗原检测试剂盒能高效的检测到蛋清中的ALV抗原,在种群净化中得到了广泛应用。与其他常规血清学检测方法所用的样品不同,IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒使用的样品是蛋清和泄殖腔拭子,而且…     

传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的真核表达及免疫原性检测

为了探讨S1基因在DNA免疫防制传染性支气管炎(IB)中的免疫原性，将IBV Z株S1基因插入到真核表达栽体pcDNA3．1／V5-His-TOPO中，构建了真核表达质粒pcDNAIBVZS。在脂质体作用下将pcDNAIBVZS转染CEF细胞，用间接免疫荧光试验检测，在CEF细胞中可见有大量S1蛋白表达。将重组质粒以100μg／只的剂量肌注免疫SPF雏鸡，经问接ELISA试验检测二免前后的血清，结果显示，pcDNAIBVZS基因可在SPF鸡体内诱导相应抗体的产生，具有特定的免疫原性。     

含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24～48h293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westemblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.     

柑橘溃疡病菌免疫荧光和生物学检测技术研究

本研究通过对7个不同柑橘品种的离体叶片接种及致病性观察筛选出了柑橘溃疡病菌敏感寄主材料，并建立了柑橘溃疡病菌的生物学检测方法；还初次尝试建立了一种简便易行的柑橘溃疡病菌免疫荧光快速鉴定方法。柑橘离体叶片接种实验结果表明：福本、红肉脐橙、纽荷尔和枳壳对柑橘溃疡病菌表现出一定的感病性，而粗柠檬和邓肯葡萄柚未表现出明显感病迹象，反而出现了坏死性应激反应。免疫荧光试验结果显示：浓度为10^3cfu／mL的菌液在30℃下用BSA封闭2h，30℃下抗体结合1h，荧光抗体浓度为4μg,／mL，室温放置40min后镜检，就可以在荧光显微镜下清晰地看到绿色的柑橘溃疡病菌体，而用该方法检测不到水稻白叶枯病菌。用免疫荧光抗体检测柑橘溃疡病菌操作简便，仅需一台荧光显微镜，整个检测过程仅需要4h。