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据NCBI上已发表的序列设计引物,通过RT—PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到MHCⅡβ基因,将其克隆至pMD18-T载体上,经酶切分析及测序鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌BL21中诱导表达。蛋白纯化后,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,经1:100倍稀释后用于Westernblot分析。结果表明:克隆得到了鸭MHCⅡβ链基因,大小为798bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为92%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度达95%。制备的鼠抗鸭MHCⅡβ多克隆抗体,经酶联免疫吸附实验(ELISA)与免疫印迹法(Westernblot)证实抗体的效价高、特异性强,为深入研究鸭MHCⅡ奠定了基础。 相似文献
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根据合子阻滞因子1(zygotearrest 1,ZAR1)基因GenBank的DNA序列(DQ231443,gi:83727928)设计2对引物,用直接测序和PCR-SSCP相结合的方法,进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测,分析该基因在5个品种猪(小梅山、清平、杜洛克、长白和大白)中变异特征及其与产仔数的相关性。测序后在内含子2、3和外显子3中存在6个SNP及在内含子3中存在1处5bp的插入/缺失变异。在5个品种猪群中,对外显子3中的第54碱基处C→T突变(Exon3-BstUⅠ)和内含子3中的5个碱基插入/缺失的变异(Intron3-TspRⅠ)进行了PCR-RFLP检测,并与产仔数进行了关联分析,结果表明,Exon3-BstUⅠ多态对杜洛克母猪第1胎和2胎总产仔数产生显著(P<0.05)影响,对经产母猪总产仔数产生极显著(P<0.01)影响,对经产母猪的产活仔数影响极显著(P<0.01),携带CC基因型母猪的产仔数均高于TT基因型的;Intron3-TspRⅠ多态对杜洛克母猪第1胎和经产胎次总产仔数和产活仔数有显著(P<0.05)影响,NN基因型高于MN和MM基因型的产仔数。 相似文献
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以广东温氏集团培育的黄羽肉鸡种蛋胚胎为研究对象,并以与人和小鼠胚胎发育相关的胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor type II receptor,IGF2R)基因为候选基因,进行了SNP位点的筛选和多态性的检测,探讨了IGF2R的变异对胚胎死亡的影响。在IGF2R第34外显子中发现2个SNP位点,对具有AlwNⅠ酶切位点的SNP位点进行了PCR-RFLP检测,分析了胚胎IGF2R的SNP位点PCR-RFLPs基因型在死亡和正常发育胚胎中分布特征。经2χ检验,鸡基因IGF2R第34外显子AlwNⅠ-RFLP基因型在死亡和正常发育胚胎中存在显著差异,在死亡的胚胎中基因型AT的频率(0.326)显著地高于正常发育胚胎的频率(0.077)。 相似文献
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鸡卵细胞卵黄生成受体基因(ovr)SNPs检测及其与蛋用性状的关联分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以6个鸡(Gallus gallus)品种混交群体390个个体为研究材料,采用PCR-SSCP、PCR-RF-SSCP及测序的方法进行鸡卵细胞卵黄生成受体(occyte vitellogenesis receptor,ovr)基因内含子单核苷酸多态性(SNPs)位点筛选,并与鸡群蛋用性状进行关联分析.结果表明,在鸡ovr基因中发现内含子2T3967G,内含子7C8099T和A8296G,内含子9A8839T和G9084A共5个突变位点;其中内含子2HinfⅠ突变位点与开产日龄和蛋壳厚度相关极显著(P<0.01),与产蛋量、蛋重和蛋黄比例相关显著(P<0.05);3种基因型中订个体在开产日龄、平均产蛋量、蛋重、蛋黄比例等方面都优于其它基因型个体.研究结果证实了ovr基因对鸡的产蛋性能和蛋品质性状有重要的影响. 相似文献
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鸡快慢羽分子鉴定方法的建立及其应用 总被引:1,自引:1,他引:0
利用找到的鸡快羽和慢羽基因,采用双重PCR方法建立了一种高效的鸡快、慢羽分子鉴定方法,在快慢羽自别雌雄鸡群体当中验证表明准确率达100%。采用该方法和经典表型鉴定方法对同一群鸡进行快慢羽判定,结果发现,除表型鉴定为微长型的个体与分子鉴定结果符合率为94.1%外,其它羽型符合率均达100%。对该鸡群快、慢羽个体早期生长速度比较研究发现,除出壳重差异不显著、第1周差异显著(P0.05),在其后各周,快、慢羽个体间体重差异均极显著(P0.01)。 相似文献
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畜禽微卫星的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
1微卫星及其研究简史微卫星(Microsatellitte)DNA(以下简称微卫星)是以1—6hP的核着酸序列(称为核心序列,COreSequence)为基本单位,呈串联重复状散在分布于整个基因组中的一种高度重复序列,又称简单串联重复(STR,SimpleTandenlRepeat)或简单序列重复(SSR,SimpleSequenceRepeat),它J一泛存在于真核生物及部分原核生物的基因组中,是多拷贝均匀分布的,就某一微卫星而言,其重复数是可变的,这构成了微卫星多态性的基础。有关微卫星的报道始见于1974年,Skinner等[”1在研究寄生蟹的卫星DNA时发现了一类简单串联重… 相似文献
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肉鸭经济性状的主基因指数分析 总被引:1,自引:0,他引:1
肉鸭经济性状的主基因指数分析龚炎长,罗清尧,师守坤(中国农业大学动物科技学院北京100094)前言主效基因(Majorgene)是指对数量性状(经济性状)有较大影响的单个基因(相对于微效基因),但这只是一个较为模糊的概述,较为深刻的理解是Morton... 相似文献