α-甘露糖苷酶法测定家兔血清中苦马豆素含量

试验旨在建立以α-甘露糖苷酶法测定家兔血清中苦马豆素(SW)浓度的方法。SW对α-甘露糖苷酶活性的抑制程度与其浓度呈线性相关。以对硝基苯基-α-D-甘露糖苷为底物,通过分光光度法(405 nm)检测α-甘露糖苷酶水解产生的对硝基酚吸光度,从而间接测定样品中SW浓度。结果显示:在0.107～1.730 mg/mL SW浓度范围内线性关系良好,加标平均回收率100.64%,RSD=2.743%(n=8)。试验期家兔血清SW含量随饲喂时间的延长而增高。该方法准确度较高、精密度较好、操作简便快速、特异性较好,可作为SW的微量定量检测方法。     

小花棘豆中毒对和田羊脑组织α-甘露糖苷酶的影响

探讨小花棘豆中毒对和田羊脑组织α-甘露糖苷酶(AMA)的影响,进一步揭示小花棘豆的毒性作用机理。将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验组每日分别按每千克体质量10 g和20 g的剂量饲喂小花棘豆,饲喂至典型中毒症状出现为止。试验第35天屠宰后每组采集试验羊的全脑,检测和田羊不同脑区AMA活性及表达的变化。结果显示和田羊脑组织中高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶体α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表达,但各试验组表达转录水平与对照组差异显著,试验Ⅰ组和田羊各脑区的AMA2的表达均与对照组差异不显著(P0.05),试验Ⅱ组和田羊小脑AMA2的表达显著低于对照(P0.05),其余脑区AMA2的表达均与对照组差异不显著(P0.05);试验Ⅱ组和田羊小脑和丘脑AMA1的表达极显著低于对照(P0.01),大脑AMA1的表达显著低于对照(P﹤0.05);试验Ⅰ组和田羊小脑AMA1的表达显著低于对照(P0.05),其余脑区AMA1的表达均与对照组差异不显著(P0.05)。结果表明不同剂量小花棘豆均可降低和田羊脑组织AMA活性及其mRNA表达量,小脑、大脑和丘脑是其主要作用的靶区,小花棘豆毒性成分可通过影响AMA活性导致和田羊发生中毒反应。     

小花棘豆生物碱体内抗菌活性研究

[目的]研究小花棘豆总生物碱的体内抗菌活性.[方法]分别腹腔注射和皮肤感染金黄色葡萄球菌及化脓链球菌建立小鼠感染模型,皮肤感染组以皮肤细胞修复和炎性细胞浸润为评价指标,腹腔注射组以小鼠存活率为评价指标,观察不同剂量小花棘豆生物碱对感染小鼠的治疗作用.并对正常小鼠灌胃小花棘豆生物碱,观察7d内的毒性反应.[结果]小花棘豆生物碱具有较好的抗菌活性.其保护金黄色葡萄球菌和化脓链球菌感染小鼠的ED50分别为10.38和14.51 mg/kg,小花棘豆生物碱对正常小鼠的LD50为1 644.3 mg/kg,对金黄色葡萄球菌和化脓链球菌的化疗指数分别为158.4和113.3;皮肤感染组小花棘豆生物碱的治愈率高于对照组.[结论]小花棘豆生物碱对金黄色葡萄球菌和化脓链球菌具有较强的抗菌作用,具有一定的应用前景.     

新疆小花棘豆总黄酮提取工艺的研究

[目的]研究新疆小花棘豆总黄酮的提取工艺条件.[方法]以小花棘豆总黄酮的含量为指标,以芦丁为对照品,比较超声波协助提取法、热回流提取法和振荡浸提法三种方法,再采用正交设计对影响小花棘豆提取工艺的溶剂浓度、料液比、超声时间三个因素进行优化筛选.[结果]超声波协助提取法的得率最高,提取的最佳工艺条件为100;甲醇,料液比1∶15,超声时间90 min.[结论]超声波协助提取法效果最好,总黄酮得率最高,通过优选得到的工艺简便、稳定可行.     

C型肉毒梭菌肉毒毒素的抗原性分析

[目的]通过对分离纯化的C型肉毒毒素抗原性分析,提供快速鉴定动物因C型肉毒梭菌中毒的理论基础.[方法]对分离纯化的C型肉毒梭菌的肉毒毒素灭活后通过SDS - PAGE测定浓度,确定浓度后与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,免疫结束后采家兔血液并分离血清.[结果]将不同稀释倍数的肉毒毒素经SDS -PAGE电泳分离后,转移至HybondNC膜,家兔三免后提取的血清作为一抗,用二抗进行Western blotting检测,大约在98.0和53.0 kDa处出现特异反应带;抗原与抗体在琼脂凝胶上结合时,会形成清晰的沉淀带.[结论]分离纯化的C型肉毒毒素,经免疫后家兔可见:C型肉毒毒素具有免疫原性和反应原性,抗体的效价为1∶8.     

南疆地区小花棘豆化学成分的初步研究

采用植物化学成分系统预试法,对采自新疆南疆的小花棘豆(Oxytropis glabra)所含化学成分进行了分析.结果表明,南疆地区小花棘豆样品中含有生物碱、黄酮类化合物、酚类化合物、鞣质、氨基酸、多肤、蛋白质、有机酸、还原糖或多糖、甾体或三菇类化合物、皂苷、挥发油等,不含有强心苷、内醋、香豆素、蒽醌类、脂肪族硝基化合物及氰苷.     

苦马豆素人工抗原的合成及其免疫原性的研究

本实验用溴乙酸制备的活性酯与苦马豆素（SW）反应得到季铵盐,与牛血清白蛋白（BSA）偶联后,产物经透析、冻干后呈白色片状结晶。通过化学检验,制备的结晶为SW—BSA人工抗原,经SDS—PAGE电泳分析,分子量为29．0Kda,平均每个牛血清蛋白分子上结合47个季铵盐分子。将SW—BSA免疫小鼠后,采用间接ELISA实验检测血清抗体效价,结果表明合成的人工抗原具有较好的免疫原性,为动物小花棘豆中毒的防治奠定了基础。     

苦马豆素人工抗原免疫家兔的安全性试验

【目的】试验通过分析苦马豆素人工抗原SW-BSA免疫家兔时对其机体肝功、肾功的影响,进行安全性评价。【方法】将18只家兔随机分为对照组(6只)、免疫Ⅰ组(6只)、免疫Ⅱ组(6只),免疫组依次进行首免和加强免疫,每次免疫前进行采血,分析血清谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、d-甘露糖苷酶(AMA)、肌酐(CRE)活性的变化,同时检测免疫组尿液和血液中有无苦马豆素,并观察家兔组织器官的形态学变化。【结果】免疫组与对照组的血清GOT、GPT、AKP、LDH、AMA、CRE差异均不显著(P>0.05),尿液和血液中均未检查出苦马豆素,镜检未见到家兔器官出现中毒现象。【结论】合成的人工抗原SW-BSA对家兔具有较好的安全性。     

淡水鱼虾华支睾吸虫囊蚴感染情况调查

采集吉林省白城地区镇赉县周边6个鱼塘的各种鱼类,用直接压片镜检法和人工消化法分别对采集回来的麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况进行统计调查,结果表明,感染率最高、感染强度最大的鱼塘是四方坨六分场。随即对四方坨六分场鱼塘中各种鱼类华支睾吸虫囊蚴感染情况也采用同样方法进行调查,结果显示,感染率最高的是麦穗鱼、银飘鱼、尖头鱥,均为100%;其次是细鳞鱼,为80%;其他种类的鱼虾均未检测到有华支睾吸虫囊蚴寄生。     

小花棘豆中毒对和田羊血液学指标的影响

将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组每天分别按10 g/kg和20 g/kg的剂量饲喂小花棘豆干粉,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒前及攻毒后每隔7 d采血1次,检测和田羊血液学指标的变化。结果显示,与正常对照相比,试验组和田羊血液中嗜酸性粒细胞百分比（EOS%）、嗜碱性粒细胞百分比（BASO%）、淋巴细胞百分比（LYM%）、红细胞数密度（RBC）、红细胞压积（HCT）、血红蛋白（HGB）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白质量（MCH）、血小板数密度（PLT）、血小板平均体积（MPV）和血小板压积（PCT）下降;白细胞数密度（WBC）、单核细胞百分比（MONO%）、嗜中性粒细胞百分比（NEU%）和红细胞分布宽度（RDW）升高,部分组间差异显著或极显著（P<0.05或P<0.01）;平均红细胞血红蛋白质量浓度（MCHC）和血小板平均分布宽度（PDW）与对照差异不显著（P>0.05）。中毒羊淋巴细胞出现空泡和蓝黑色颗粒,红细胞大小不均和异形改变。结果表明,小花棘豆中毒对和田羊血液学指标有显著影响,可引起羊贫血及机体免疫力下降。