卵泡刺激素剂量依赖性表达基因的筛选

为开发能高效检测卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)制品生物活性的新方法,选取猪卵泡颗粒细胞,利用转录组测序技术对比FSH处理组(40 m IU/m L)和空白对照组细胞中基因的表达情况,分析并获得大量受FSH调控的候选基因,运用荧光定量聚合酶链式反应验证FSH处理后显著上调的基因,并进一步利用FSH浓度梯度(0、20、40、60、80、100 m IU/m L)处理卵泡颗粒细胞。结果显示,基因OLR1、LHCGR、SCARA5和S100A12的表达量呈现FSH浓度依赖性升高。在3倍递增的FSH浓度梯度(0、1、3、9、27、81、243、729 m IU/m L)下观察各基因表达量的变化,发现在0~243 m IU/m L的FSH浓度范围内,LHCGR基因的表达量与FSH浓度呈高度线性相关(R2=0.982)。因此,可通过检测FSH刺激条件下细胞中LHCGR基因的表达量,来评估FSH制品的生物学效价。     

鸡卵清蛋白基因调控序列的克隆与载体构建

卵清蛋白（ovalbumin）基因在鸡基因组中只有一对等位基因,却能每天合成分泌多达2 g的蛋白,占据卵白蛋白质的50%以上,是外源基因载体表达调控构件的首选。该研究从输卵管特异性启动子方面着手,通过对卵清蛋白基因启动子的筛选优化,找出启动子增强因子的位置以及组织特异性区域。将卵清蛋白基因上游-922～-2 073和-2 801～-3 100区域平均分成12个长度约为150 bp的序列,分别插入到-921～+38序列的上游,成功构建12个系列表达载体,为进一步筛选短缩版优化启动子提供材料;卵清蛋白基因第一内含子区域截断成300 bp左右的迷你内含子序列,成功构建8个迷你内含子系列载体,为筛选优化的迷你内含子提供必要的材料;成功分离鸡输卵管上皮细胞并优化电转染条件,通过荧光素酶活性检测初步筛选出具有最强活性重组质粒pGL4 UP 1412和内含子重组质粒pGL4 mini intron 3,同时推断出若干包含增强子序列区域。     

可溶性硅对甘薯苗期黑斑病抗性的影响

为了明确硅对甘薯苗期黑斑病抗性的影响,以胜利百号(Triumph 100)薯苗为材料,用不同浓度的硅酸盐溶液预处理5 d后接种甘薯黑斑病菌,每24 h调查薯苗的发病情况.结果表明,硅能够延长甘薯黑斑病的潜伏期,显著降低发病率与病情指数,减轻其对薯苗的危害,提高甘薯苗期对黑斑病的抗性.     

小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.     

口蹄疫基因工程疫苗不同佐剂水相配比优化研究

[目的]选择一种适合口蹄疫基因工程疫苗生产的佐剂。[方法 ]通过ISA 206和ISA201 VG油佐剂乳化后物理性状检验,参照现有口蹄疫灭活疫苗乳化工艺,选用ISA 206和ISA201 VG油佐剂,分别用4.6:5.4、1:1、5.4:4.6的水相和油相比例进行乳化,制备疫苗,于2~8℃保存15个月,分别于第3、6、9、12、15个月取样,进行疫苗物理性状检验。[结果 ]ISA201VG佐剂疫苗物理性状好于ISA 206油佐剂;疫苗水相和油相最佳配制比例为1:1;疫苗的外观、剂型、稳定性和黏度均符合产品的质量要求。[结论 ]ISA201VG佐剂可以作为口蹄疫基因工程疫苗佐剂使用。     

我国主要牧区牧业生产效率及影响因素研究——基于DEA-CLAD的两阶段模型

为了解我国牧区牧业生产增长潜力,利用标准化的220个主要牧区牧场数据构建DEA模型和Tobit、CLAD模型,对牧业生产效率及政府培训、合作社、土地流转、气候带、经营方式等影响因素进行了研究。结果表明:1)我国牧区牧业生产技术效率和规模效率总体偏低,提升空间大,在不同气候带和经营模式下分布差异显著;2)经条件矩检验和LM统计量检验发现,传统Tobit模型扰动项的正态性和同方差性假设在一般情况下难以满足,选用CLAD模型分析影响因素更稳健;3)参加政府培训与合作社,优化从业人员年龄结构,提升从业人员学历、专业化程度、远行距离,有助于生产效率的提高。     

食品货架期预测研究进展与趋势

作为食品领域的重要研究方向,货架期预测已成为国内外研究的热点问题。在整理和总结现有相关研究文献的基础上,阐述了食品货架期预测的研究机理,梳理了相关研究思路与方法;对当前研究中采用的5种方法(基于化学动力学的方法、基于微生物生长动力学的方法、BP神经网络方法、威布尔危险值分析方法和Q10模型等基于温度的方法)进行了比较分析;对应用于肉类、水产品、果蔬等不同类别食品并取得良好预测效果的品质指标及所采用的模型方法进行了总结和分析。最后分析了食品货架期预测研究的现状,并展望了发展趋势。     

小反刍兽疫病毒N基因部分片段克隆表达及鉴定

根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,在此基础上设计2对特异引物分别对N1、N5基因扩增和对N1和N5基因进行搭桥PCR连接,经测序分析后将N1-N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,构建pET-32a-N1-N5质粒。将pET-32a-N1-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达,将纯化重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明,所表达蛋白以可溶性形式表达并具有能与PPRV阳性标准血清发生特异性反应,为建立快速检测小反当兽疫病毒抗体水平诊断方法奠定基础。     

独立学院英语四级通过率的重要性及辅导员作用路径探析

英语四级是多数本科院校要求的授位条件之一,是本科生成功求职的重要条件之一,也正逐渐成为研究生报考的门槛.独立学院本科生四级通过率将影响毕业授位率、就业率和升学率.辅导员负责学生管理和日常事务,应把学生英语四级通过率放在至关重要的位置.高校提高四级通过率不能只靠学生努力,还依靠辅导员的帮助和督促.辅导员应从教室到宿舍,从...     

非蛋白氮在反刍家畜饲料豆粕减量替代中的潜力

反刍动物由于其独特的瘤胃功能,可以利用部分非蛋白氮（NPN）,这是行业共识,但目前NPN推广使用中存在一些问题,致使实际使用量与潜在需求量相去甚远。我国反刍家畜饲用尿素年需求量在120万t以上,可替代535万t豆粕,相当于5487.2万亩耕地面积的大豆产出。因此,采取综合措施将NPN作为一种常规饲料原料应用于反刍家畜生产中,可成为饲料豆粕减量替代方案提效开源的有益补充。