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河流型水牛热休克蛋白70的原核表达及其对精液抗冻性的影响 总被引:2,自引:2,他引:0
试验旨在克隆河流型水牛热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因的CDS区序列,构建HSP70原核表达载体,诱导表达HSP70融合蛋白,进一步研究HSP70蛋白对水牛精液抗冻性的影响。以摩拉水牛精子基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增HSP70基因CDS区序列,将PCR产物与pET30a质粒连接构建重组原核表达质粒,诱导表达HSP70融合蛋白,将获得的表达蛋白作为稀释液组分添加到水牛精液中制作冷冻精液并评定其活力。结果显示,试验成功扩增获得HSP70基因CDS区长为2 155bp的片段;SDS-PAGE及Western blotting分析显示,在70ku处出现一条明显条带,且表达产物可与相应的抗体发生反应;对添加有HSP70蛋白的水牛冷冻精液活力评定结果显示,终浓度为2、4、8mg/mL的HSP70能提高冷冻精液活力,且8mg/mL HSP70组冻精活力最高,但各组间差异均不显著(P0.05)。综上所述,本试验成功表达了水牛HSP70蛋白,获得了高纯度、有活性的HSP70融合蛋白,外源添加HSP70蛋白可提高水牛冷冻精液的活力,为进一步研究水牛HSP70蛋白的抗冻性保护机理奠定了理论基础。 相似文献
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一氧化氮(NO)在体内是一种自由基气体,早期研究人员发现活化的巨噬细胞可以产生NO2^-/NO3^-,其生物学效应是在关于内皮依赖性血管舒张作用的研究中发现的。一氧化氮在机体内由诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)或结构型一氧化氮合成酶(nNOS)与底物(L—Argininc/L-Arg)作用生成,不同的合成酶所产生的NO也具有不同的生理功能, 相似文献
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正我国南方水稻产区开展水牛冷冻精液人工授精[1]技术工作已有三十多年历史。多年来,水牛冷冻精液人工授精的杂交改良面逐渐扩大,配种头数增多,受胎率有所提高,取得了显著效果。但配种受胎率高低悬殊太大,牧场、牛群集中的示范小区和养殖户,配种受胎率高达75%以上,而在分散饲养的情况下,受胎率一直在35%~40%之间徘徊。从而导致一些饲养户对冷冻精液人工授精技术持怀疑态度。那么,是何种原因导致受胎率这么低呢?笔者认为,牛冷冻精液人工授精[1]是一项技术性很强的工作,容不得半点粗心大意。从采精 相似文献
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本实验旨在探究锰苯甲酸卟啉(MnTBAP)对猪精液冷冻保存的影响,从而筛选出适用于猪精液冷冻的MnTBAP浓度。实验一共分为6组:新鲜组、冷冻对照组、不同浓度MnTBAP组(在冷冻液I中添加50、100、150、200μmol/LMnTBAP),对冷冻后猪精子动力学参数以及活率进行检测,从而筛选出适用于猪精子冷冻的最佳MnTBAP浓度。实验二共分成3组:新鲜组、冷冻对照组、最佳MnTBAP浓度组,对冷冻后猪精子质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数(DFI)、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)进行检测。结果表明:与其他浓度的MnTBAP组相比,100μmol/L MnTBAP对动力学参数以及活力改善最显著;与冷冻对照组相比,100μmol/L MnTBAP组猪精子质膜完整率、顶体完整率、MMP和抗氧化酶显著升高,DFI、ROS显著降低。综上所述,在冷冻液稀释中添加MnTBAP可以改善猪精液冷冻后的质量,且最适添加浓度是100μmol/L。 相似文献
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一氧化氮(NO)在体内是一种自由基气体,早期研究人员发现活化的巨噬细胞可以产生NO2-/NO3-,其生物学效应是在关于内皮依赖性血管舒张作用的研究中发现的. 相似文献
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