小鼠中年期和老年期睾丸组织转录组分析

为丰富小鼠睾丸组织转录组研究领域的基础数据,对中年期(180日龄)和老年期(360日龄)小鼠睾丸组织进行转录组测序分析,在中、老年期分别获得25 187 980个和28 840 576个可用Reads,比对到参考基因组上的Reads分别有18 861 721和22 355 657个,占总读数的74.88%和77.51%,并检测到中、老年期小鼠睾丸组织中分别有17 770和18 073个基因表达。以中年期为对照,老年期睾丸组织中下调基因122个,上调基因185个,其中可清楚注释的基因共285个。GO分析发现285个差异表达被归纳到生物过程、细胞组分与分子功能3个大类的25个小类,主要涉及膜、氧化还原过程、转运蛋白活性、生殖发育及衰老等。KEGG分析发现差异表达基因涉及139个信号通路,主要代谢通路为信号转导、脂代谢、碳水化合物代谢、内分泌系统和神经系统等生物学机制。差异表达基因中RPKM1的有57个,其所涉及信号通路主要为脂代谢、固醇类激素生成、TNF信号通路、补体系统、胰岛素和溶酶体等。     

镉对泥鳅肝脏及其过氧化氢酶的影响

通过生物毒性试验,探讨镉对泥鳅肝脏的损伤和过氧化氢酶活性的影响。采用静水养殖法,设置0.05、0.5、5.0mg/L三个浓度Cd2+的染毒组和一个对照组,分别在2、4、6、8、10d取泥鳅肝组织测定过氧化氢酶活性,同时制作石蜡组织切片。结果显示,随着染毒浓度的增加和同一浓度处理时间的延长,肝细胞出现肿胀、破裂,细胞核出现浓缩、溶解,甚至消失;同时,过氧化氢酶活性检测发现,肝组织中过氧化氢酶的催化能力越来越弱,说明Cd2+对过氧化氢酶活性的抑制作用越来越大。综合分析表明泥鳅对Cd2+反应较为灵敏,当Cd2+浓度达到0.5mg/L时,泥鳅的肝脏出现了损伤,随着染毒浓度的增加,损伤越严重。     

豆类丝核菌次级代谢产物的急性毒性与致突变性试验

通过经口急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验和精子畸形试验对豆类丝核菌次级代谢产物的急性毒性和致突变性进行了研究.结果表明,以该代谢产物中苦马豆素的量计算,小鼠经口急性毒性试验的LD50为226.46mg/kg,LD50的95%可信限为158.49～323.59mg/kg,是治疗肿瘤剂量的14～84倍,属于实际低毒级药物.微核试验和精子畸形试验的各试验组与阴性对照组比较差异均不显著(P＞0.05),说明豆类丝核菌次级代谢产物无明显致突变性;各试验组之间比较差异均不显著(P＞0.05),说明微核的形成和精子畸形的形成与受试物无量效关系.结论:豆类丝核菌次级代谢产物是一种较安全的抗肿瘤药物.     

宁强矮马生长激素基因（GH）的遗传变异分析

 【目的】通过分析不同动物和中国几个地方马种生长激素基因序列,为宁强矮马起源和矮化形成机制的研究提供分子水平的试验依据。【方法】通过PCR扩增宁强矮马生长激素基因并进行测序,用DNAMAN软件对不同动物的生长激素基因序列进行比对分析。【结果】马品种间29个位点发生遗传变异,编码区11个位点发现遗传多态现象。以蒙古马生长激素氨基酸序列为标准,宁强矮马仅在1 765位点的变异导致氨基酸发生改变。以生长激素的mRNA序列为基本数据进行聚类分析,宁强矮马和德保马67的同源性为100%,与百色马的同源性为99.8%,与蒙古马的同源性为99.7%。【结论】马属动物生长基因序列与猪和狗的同源性较高,宁强矮马1 765位的G→A可能影响到宁强矮马的生长发育。     

宁强矮马微卫星遗传多样性研究

采用8个微卫星标记对12匹宁强矮马的遗传多样性进行了分析,结果表明,在6个微卫星位点上存在遗传多态性,COR059有8个等位基因,ICA40有5个等位基因,AHT040有8个等位基因,UM016有9个等住基因,UM002有6个等位基因,TKY21有5个等位基因,各位点平均有效等住基因数4.93、平均多肽信息含量为0.743、平均杂合度0.78,数据表明宁强矮马保持了较为纯净的原始基因库,对宁强矮马这一濒危物种进行资源评价、保护和开发if,0用研究提供了分子水平的理论依据。     

维生素C对镉导致鲫红细胞微核的干预作用

为探究维生素C对镉导致鲫（ Carassius auratus）红细胞微核的干预作用,用0.5 mg/L的镉溶液单一染毒作对照组,设置0.5 mg/L的镉溶液分别添加1、2、3 g/L的维生素C（ VC）三组作为实验组。在染毒后的第5、10、15、20天分别取鲫尾部血液制作血涂片,镜检并统计红细胞微核率。结果显示：0.5 mg/L的镉溶液单一染毒对照组,镉诱发鲫红细胞产生微核率与时间呈现线性关系,回归函数为： y＝0.1587 x＋2.5167（ R2＝0.9357）;实验组随着VC浓度增加和处理时间的延长,微核率降低,其中以0.5 mg/L Cd2＋＋3 g/L VC组处理20 d的微核率最低,微核率为仅为0.26‰,与处理20 d的对照组相比,微核抑制率达到95.62％。 T检验分析表明, VC对镉导致鲫鱼红细胞微核干预作用极显著（ t＞t0.01）,干预作用在试验中呈现出随VC浓度增加干预作用增强的趋势。实验表明, VC对镉导致鲫红细胞微核率升高的现象有明显的干预作用。     

镉对鲫鱼和泥鳅外周红细胞微核的诱导效应

采用静水养殖法,将鲫鱼和泥鳅分别暴露于浓度为0.08、1.72、6.48 mg/L的Cd2+溶液中,于染毒后的7、14 d对所有染毒组和对照组鱼进行尾静脉采血制片,油镜观察,研究在不同作用时间和不同浓度下,Cd2+对鲫鱼和泥鳅外周血红细胞微核的影响.结果表明,Cd2+可诱导鲫鱼和泥鳅红细胞产生微核,并在一定条件下存在剂量-效应和时间-效应关系.     

海栖热袍菌耐热葡聚糖内切酶EG12B基因的克隆表达及酶学特性分析

为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性,运用基因工程手段将成熟肽EG12B基因克隆至原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组表达质粒pET28-EG12B。转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经重组菌发酵培养及IPTG诱导表达,实现了EG12B在大肠杆菌系统中的胞内高效表达,表达量约占全细胞总蛋白的36%。通过细胞超声破碎、镍离子亲和层析以及热处理分离纯化,获得了电泳纯重组酶EG12B。酶学特性分析表明,该重组酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为5.2,在70℃下保温1 h,酶活力基本维持不变。表明葡聚糖内切酶EG12B具有优越的耐热性和良好的热稳定性,为进一步作为饲料添加剂用于纤维素饲料关键技术的开发和畜产品品质的提升奠定了理论基础。     

H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白的原核表达

血凝素(hemagglutinin,HA)是禽流感病毒的主要抗原之一,原核表达HA是该抗原特性研究和疫苗制备的关键。利用分子生物学方法构建H5N1亚型的禽流感病毒HA基因原核表达载体,转化至大肠埃希菌Rosetta菌株,用不同IPTG浓度和时间诱导HA表达,检测蛋白表达量,分析不同诱导条件对HA表达效率的影响,以确定最佳诱导条件。重组表达载体pET32a-HA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定,获得预期大小的DNA片段,说明HA基因成功插入质粒pET32a。Western blot检测结果表明,IPTG诱导重组菌株成功表达HA蛋白,当诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为6h时,HA蛋白表达量最高。研究结果为HA抗原制备及禽流感疫苗的研究奠定基础。     

豆类丝核菌次级代谢产物的遗传毒性与致突变作用

通过小鼠骨髓染色体畸变试验、睾丸染色体畸变试验及鼠伤寒沙门氏菌回复试验考察豆类丝核菌次级代谢产物的遗传毒性与致突变性。结果显示,豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠骨髓染色体及睾丸染色体均无致畸变作用;Ames试验结果显示在本次试验的各个浓度下无论是加入活化系统(S-9混合液)还是不加,回变菌落数均未大于自然回变菌落的2倍,而各阳性对照组均显示强烈的诱变作用,表明,本次试验剂量和条件下,豆类丝核菌次级代谢产物未见遗传毒性和致突变作用。