驴生长激素基因的克隆与分析

 【目的】克隆驴生长激素基因DNA和cDNA的全序列,分析其序列和cDNA编码的蛋白序列特征及其在不同物种中的遗传差异。【方法】根据不同物种同一基因序列的同源性比对结果设计引物,应用RT-PCR和PCR 技术克隆基因,用生物信息学方法对获得的DNA和cDNA及推定的氨基酸序列进行分析。【结果】从驴肝组织和血液中分别得到驴GH基因全序列1 928 bp和包括完整的编码区的cDNA序列706 bp,两者序列比对后证明驴GH基因DNA序列由5个外显子和4个内含子组成,编码216个氨基酸的GH前体蛋白,其中包括26个氨基酸的信号肽和190个氨基酸的成熟肽。序列比较结果表明,驴GH基因的序列与马同源性最高,启动子不是哺乳动物的典型TATA盒,而是CATA盒,该基因在进化过程中是保守的。【结论】从驴肝组织和血液中克隆了GH基因DNA和cDNA,DNA序列在1 267位的C→G可能影响到驴和马生长发育的差异,为下一步驴GH基因的表达调控、进化和多态性分析奠定了基础。     

鸡TLR1A基因正选择nsSNP与沙门氏菌易感性的关联性研究

为探究鸡TLR1A基因正选择nsSNP位点与沙门氏菌易感性的关联，挖掘其潜在的功能性位点，本研究利用多种生物信息学方法对ChTLR1A的21个nsSNP位点及基因的选择压力进行综合分析，筛选ChTLR1A正选择nsSNP功能性位点，深入分析其与鸡沙门氏菌易感性之间的相关性。结果显示，rs739087452(I388L)和rs313678806(C815R)在种上及种内均受到正选择作用，且rs739087452(I388L)位点的变异使其蛋白稳定性降低。rs313678806(C815R)与鸡沙门氏菌的易感性显著相关（P<0.001）,C/C基因型为沙门氏菌抵抗型，表明rs313678806(C815R)可能是影响鸡沙门氏菌易感性的重要功能性SNP。本实验结果可为TLR1A基因标记在鸡抗病育种中的利用提供参考依据。     

依据锌指基因内含子序列构建羊、牛种系发生树的研究

为了研究绵羊和山羊的分歧时间,试验采用PCR方法扩增并克隆测定了大尾寒羊、小尾寒羊、鲁北白山羊、波尔山羊Zfy和Zfx基因最后一个内含子部分片段,结合已发表的欧洲牛的相应序列构建了3种反刍动物种系发生树.结果表明:(1)Zfy基因内含子具有独特遗传特征,可应用种属水平以上的分类阶元的种系发生分析,是研究反刍动物系统进化...     

笼养条件下坝上长尾鸡与海兰褐蛋鸡的鸡蛋营养成分和蛋品质比较北大核心CSCD

本试验旨在比较笼养条件下坝上长尾鸡和海兰褐蛋鸡的营养成分和蛋品质。试验随机选取30周龄坝上长尾鸡和海兰褐蛋鸡各180只,每个品种随机分成5个重复,每个重复36只,饲粮和饲养管理程序相同。在35周龄时,每个重复收集鸡蛋36枚,共计360枚。其中120枚检测鸡蛋的氨基酸、脂肪酸、胆固醇、维生素A、维生素B1和维生素B2以及微量元素铁、锌、锰、硒的含量,120枚进行常规营养成分(水分、粗蛋白质、粗脂肪、钙和磷的含量)分析,120枚用于测定蛋品质。结果表明:1)坝上长尾鸡的蛋重、哈氏单位和蛋白比例显著低于海兰褐蛋鸡(P<0.05),坝上长尾鸡的蛋黄比例和蛋形指数显著高于海兰褐蛋鸡(P<0.05)。坝上长尾鸡和海兰褐蛋鸡的蛋黄色泽和蛋壳强度没有显著差异(P>0.05)。2)坝上长尾鸡的鸡蛋中水分和粗蛋白质含量显著低于海兰褐蛋鸡(P<0.05)。坝上长尾鸡的鸡蛋中丝氨酸和脯氨酸含量显著高于海兰褐蛋鸡(P<0.05),坝上长尾鸡和海兰褐蛋鸡的鸡蛋中总氨基酸以及其他氨基酸含量没有显著差异(P>0.05)。3)坝上长尾鸡的鸡蛋中粗脂肪、总脂肪酸、总饱和脂肪酸、总不饱和脂肪酸(包括总单不饱和脂肪酸和总多不饱和脂肪酸)、胆固醇、维生素A和维生素B1含量均显著高于海兰褐鸡蛋(P<0.05)。4)坝上长尾鸡的鸡蛋中钙、磷、锌、铁和锰含量均显著高于海兰褐蛋鸡(P<0.05)。由此可见,坝上长尾鸡的鸡蛋蛋重小、蛋白比例低、蛋黄比例高、水分含量低、脂肪酸(特别是不饱和脂肪酸)含量高,因而在鸡蛋营养成分上优于海兰褐蛋鸡。     

奶牛OLR1 3′UTR A223C多态的生物学信息分析

[目的]探索氧化型低密度脂蛋白受体OLR13′UTR A223C多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制。[方法]用miRanda（1.0）软件装载牛microRNA数据库,预测OLR13′UTR潜在的microRNA。[结果]共预测16个microRNA靶标,OLR13′UTRA223C突变定位于bta-miR-370靶标种子序列的互补区。[结论]由于OLR13′UTRA→C突变导致bta-miR-370靶标的消失,为OLR13′UTR A223C多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制深入研究提供依据。     

猪GDF11基因部分序列的克隆及组织表达分析

为了探讨生长分化因子11(Growth differentiation factor11,GDF11,又名BMP11)在胸腰椎数变异中的作用,本试验克隆了该基因包含外显子2在内的部分编码区,并进一步采用RT-PCR技术对其在猪胚胎和初生仔猪中的表达进行了分析。结果表明,在35d的猪胚胎中,后肢、牙龈、脑、肝脏、肾脏、胸椎、腰椎各组织均有明显的表达,而在前肢、眼、心脏、肺脏中的表达较弱,在颈椎和荐尾椎中没有观察到GDF11的表达。在45d猪胚胎的后肢、脑、眼、胸椎组织中GDF11的表达较强,而在前肢、牙龈、肺脏、肾脏、腰椎和荐尾椎的表达相对较弱,在肝脏中的表达极其微弱。在心脏和颈椎中没有检测到GDF11的表达。在55d的猪胚胎中,前肢、后肢、脑、眼、肝脏、颈椎、胸椎、腰椎组织中有明显的表达,肺脏和肾脏组织中的表达较强,牙龈和荐尾椎中的表达较弱,而在心脏中没有检测到GDF11的表达。3d仔猪的后肢、牙龈、脑、肾脏和腰椎组织中GDF11有明显的表达,脾脏组织的表达量较高,前肢、肝脏、心脏、背腰最长肌和肺脏中的表达相对较弱,在眼、颈椎和荐尾椎中的表达极弱,在胸椎中没有检测到表达。在所检测的不同时期的所有组织中,脑和肾脏组织表达明显地高于其他组织。     

鸡 CVH启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体的构建及鉴定

探索建立一种用绿色荧光蛋白对鸡原始生殖细胞进行标记分离的方法。本研究克隆并测序鸡原始生殖细胞特异表达基因CVH1.6Kb启动子序列。序列分析表明它含有类似于TATA box和CAAT box的元件,在其远端上游区域还有多个GC富含区。将CVH基因启动子亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-1的多克隆位点,成功构建表达载体pCVH-EGFP。重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下分别转染鸡Ⅹ期胚盘细胞和鸡胚成纤维细胞,并于转染后12 h在荧光显微镜下观察转染效果。实验结果显示：在胚盘细胞转染后12 h可观测到绿色荧光表达,转染后24 h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大;在鸡胚成纤维细胞未检测到GFP表达。实验结果说明,由CVH基因启动子控制下的EGFP可在Ⅹ期胚盘细胞特异表达,为利用流式分离技术PGCs标记分离、纯化研究奠定基础。     

依据锌指基因内含子序列构建羊、牛种系发生树的研究

为了研究绵羊和山羊的分歧时间,试验采用PCR方法扩增并克隆测定了大尾寒羊、小尾寒羊、鲁北白山羊、波尔山羊Zfy和Zfx基因最后一个内含子部分片段,结合已发表的欧洲牛的相应序列构建了3种反刍动物种系发生树。结果表明:(1)Zfy基因内含子具有独特遗传特征,可应用种属水平以上的分类阶元的种系发生分析,是研究反刍动物系统进化很有前途的遗传标记;(2)Zfx基因片段可应用于亚科级的分类阶元种系发生分析;(3)依据Zfy基因与Zfx基因的进化速率估算绵羊与山羊的分歧时间分别为200万年、280万年,原则认为Zfy/Zfx基因的最后一个内含子可用于分化时间在200万年以上的系统分化研究。