犬瘟热病毒CDV-PS株致病力及基因进化分析

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起急性、热性、高度接触性传染病,貂、狐、貉、犬、熊猫、虎等动物易感。本试验研究了犬瘟热CDVPS株对犬的致病力。结果发现,试验犬于病毒接种后的19 d死亡;脏器剖检肺部有出血斑,肝脏肿大,肠系膜充血,膀胱壁变厚;组织切片脾脏淋巴细胞浸润,肺气肿,脑组织神经细胞自噬现象;构建犬瘟热病毒H基因遗传发育树,CDV-PS株分类于Asia-1型分支,与目前我国主要的犬瘟热病毒流行株类型一致。本研究对犬瘟热病毒CDV-PS株感染犬的临床症状、脏器剖检、组织病理变化以及病毒体内分布和H基因特征进行了详细研究,为更好地预防和控制犬瘟热提供基础。     

二乙烯亚胺对水貂肠炎细小病毒灭活效果的研究

为研究二乙烯亚胺(BEI)对水貂肠炎细小病毒的灭活效果,采用BEI终浓度为0.003mol/L、0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005mol/L,灭活温度为30℃,灭活时间为24h、48h、72h条件下,对水貂肠炎细小病毒进行灭活试验。通过F81细胞传代观察细胞病变和血凝试验检测灭活效果;用水貂检验BEI灭活水貂肠炎细小病毒所制疫苗的安全性,通过检测接种水貂的血凝抑制抗体,评价BEI灭活细小病毒所制疫苗的免疫效果,同时与甲醛灭活的疫苗进行免疫效果比较。结果表明,BEI终浓度0.002mol/L、30℃24h是灭活水貂肠炎细小病毒的适宜参数,BEI灭活工艺制备的水貂肠炎细小病毒灭活疫苗具有良好的安全性,BEI灭活工艺与甲醛灭活工艺的免疫抗体水平差异不显著(P0.05)。本研究为水貂肠炎细小病毒灭活工艺的研究提供了理论依据。     

C、D型貂源铜绿假单胞菌的生物学特性鉴定及免疫效果评价

从辽宁和黑龙江2个水貂养殖场死亡水貂肺中分离出13株铜绿假单胞菌,血清型鉴定分别为C型和D型,命名为PK13-C和H2F-D。为了解其作为疫苗株的免疫效果,测定了其运动能力、绿脓菌素生成能力、生长曲线、毒力、免疫原性及耐药性。结果表明,PK13-C对小鼠和水貂的毒力分别为7.5×106CFU和7×105CFU,泳动能力及群集运动能力较强,抽动能力较弱,生物被膜形成能力中等;H2F-D对小鼠和水貂的毒力分别为2.05×107CFU和2.2×106CFU,泳动能力较弱,但群集运动及抽动能力较强,生物被膜形成能力较弱。二者对本血清型菌株的免疫保护率均为100%,对异种血清型菌株的保护率为80%~90%。2个株菌均可产生绿脓菌素。生长曲线显示2个菌株于4h进入对数生长期,于18h左右进入平稳期。药敏试验结果表明,2个株菌对氯霉素、复方新诺明、氨苄西林/舒巴坦耐药。     

狐狸流产奇异变形杆菌的分离鉴定及特征分析

为明确引起狐狸流产的主要原因,确定主要病原体并提出有效防控措施,试验收集了河北地区多个流产狐狸的脾脏和卵巢,利用细菌分离培养、形态观察、药敏试验、16S rRNA基因测序和序列分析及同源性比对等方法对引起狐狸流产的病原体进行分离鉴定,分析其耐药性,筛选有效治疗药物;同时对病原菌的致病力进行检测。结果显示,从流产狐狸病变的脾脏和卵巢中分离到了1株单一的革兰氏阴性菌,命名为FOX-abortion-Hebei。药敏试验结果显示,该菌对头孢哌酮等11类药物敏感,而对妥布霉素等5类抗菌药物中度敏感。动物试验结果显示,该菌株具有较强的致病性,攻毒小鼠和狐狸后均可引起动物死亡。16S rRNA测序和同源性分析结果显示,分离到的革兰氏阴性菌为奇异变形杆菌（Proteus mirabilis,PM）,与已公布序列的同源性为93.6%~99.9%;系统进化树结果显示,该菌与埃及分离到的菌株（AUMC B-199）亲缘关系最近。本研究明确了狐狸流产主要是由奇异变形杆菌感染所致,也是首次在流产狐狸中分离到该菌,且能引起严重的繁殖障碍,需在狐狸养殖中加以防控。     

羊布鲁菌体内诱导基因的筛选与初步鉴定

本研究利用体内诱导表达抗原技术(IVIAT)来筛选和鉴定羊布鲁菌特异的体内诱导抗原,为筛选新的毒力分子,诊断靶标、疫苗候选抗原和药物靶点提供科学依据。通过收集临床上羊布鲁菌阳性血清,吸附后作为探针,构建羊布鲁菌16M基因组表达文库,进行体内诱导抗原的筛选,同时利用RT-PCR验证筛选得到的基因,对筛选得到的基因进行测序比对及生物信息学分析。结果显示:利用临床上感染布鲁菌的羊阳性血清作为探针,通过体内诱导抗原技术成功地从羊布鲁菌的基因组中筛选得到了14个体内诱导表达的基因。这些基因主要参与布鲁菌的糖代谢、tRNA修饰、离子转运和跨膜运输等生物过程,这些分子有的已经被证实是布鲁菌的药物靶点和毒力分子,有的可能与布鲁菌的毒力和免疫相关,可以作为疫苗候选抗原和诊断标识。体内诱导抗原技术(IVIAT)成功地应用到布鲁菌候选抗原和诊断标识的筛选和鉴定研究中,利用该技术成功获得14个体内诱导基因,这些基因将为布鲁菌疫苗的研制和诊断产品的研发提供候选抗原和诊断标识。     

猫泛白细胞减少症疫苗的研究进展

猫泛白细胞减少症是一种由猫泛白细胞减少症病毒引起的,猫科动物常见的接触性传染病,临床发病率和死亡率均较高,疫苗免疫接种是预防和控制该病最经济、最直接的措施.然而,国内几无商业化宠物疫苗,特别是猫用疫苗,国外疫苗进口困难,亟需开发新型宠物用高效疫苗.对国内外猫泛白细胞减少症疫苗现状及不同类型疫苗(灭活疫苗、减毒活疫苗等)...     

水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗（CDV3-CL株,悬浮培养）安全性评价

为考察新研制的水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV3-CL株,悬浮培养)的安全性,分别以一次单剂量(1头份)、单剂量重复和一次超剂量(10头份)接种动物,对疫苗进行全方位安全性评价,试验动物涉及水貂幼崽、育成水貂以及妊娠水貂等,重点观察注射动物的体温、食欲,生产性能是否发生改变、注射部位是否出现炎症反应以及实验动物接种部位组织病变等,连续观察15d,结果发现,实验动物没有发生炎症反应,动物体温变化也处于正常范围内,证明疫苗是安全的,从而为疫苗的推广奠定基础。     

水貂犬瘟热活疫苗与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗制备及其联合免疫效果研究

制备了水貂犬瘟热活疫苗(以下简称犬瘟活疫苗)与水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(以下简称肠炎灭活苗)各3批,通过半成品及成品检验结果显示,生产的2种疫苗合格且生产工艺稳定。通过采用肠炎灭活苗稀释犬瘟活疫苗,实现2种疫苗联合(简称联合疫苗)后,体外接种Vero细胞,采用专用稀释液稀释的犬瘟活疫苗作对照,在25℃存放条件下,5 h内两者的犬瘟热病毒含量无明显差异,表明该方法对犬瘟热病毒的存活无明显影响。将联合疫苗免疫水貂10只,犬瘟活疫苗、肠炎灭活苗分别免疫10只水貂作为单苗对照组,免疫后21 d采血,测定3组的抗体水平,联合疫苗组的犬瘟热病毒中和抗体和细小病毒HI抗体分别与对应单苗的抗体水平无明显差异,表明联合疫苗具有与单苗相当的免疫效力。该研究为进一步研发水貂犬瘟活疫苗与肠炎灭活苗联苗奠定了基础。     

水貂奇异变形杆菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列分析

从辽宁某貂场发病水貂中分离到1株致病菌,命名为PMSD株,通过形态学观察和生化试验等常规鉴定发现符合奇异变形杆菌特性,进一步经VITEK 2Compact 30全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定该株细菌为奇异变形杆菌。药敏试验结果显示PMSD株对氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物等敏感,而对β-内酰胺类药物和磺胺类药物等不敏感。以细菌16SrRNA基因为模板应用通用引物进行PCR扩增,得到PMSD株的16SrRNA基因序列,长约1 504bp,提交到GenBank中,登录号:KM229530。将该序列与GenBank中序列进行BLAST比对,结果发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达99%以上。选取其中前20株作为参考序列,运用生物学软件构建系统发育树并进行同源性比对,结果表明,分离菌PMSD株与20个代表菌株的同源性为98.9%~99.7%,其中与BB2000株、HI4320株、B1株和FCC141株同源性最高,为99.7%。本研究为预防和控制奇异变形杆菌引起的水貂疾病奠定了一定的基础。