VP2蛋白Cys-402、Cys-214对猪细小病毒VLPs影响的初步研究

试验以猪细小病毒VP2 Cys-402(A)、Cys-214(B) 定点突变体为基础,将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠,通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响,旨在寻找利于外源基因插入的病毒样颗粒内部位点.电镜和小白鼠核酸免疫试验结果表明:Cys-214对病毒样颗粒的组装和免疫原性的发挥是必需的,其突变后不能促使VP2形成病毒样颗粒,更不能在免疫后的小白鼠血清中监测出相应抗体的存在;而Cys-402的突变并不干扰病毒样颗粒的形成和免疫原性的发挥.由此可以推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点.     

猪伪狂犬病病毒gD基因的生物信息学分析

自测12条PRV不同毒株的gD全序列连同GeneBank中登录的9条gD基因全序列共21条基因序列,使用生物软件对它们的基因序列的同源性、突变区域的定位、遗传进化关系、酶切位点的差异、密码子偏爱性,氨基酸序列的同源性、蛋白质亲水性、抗原表位分析、三级结构预测等生物信息学的内容进行预测和分析.结果表明:PRV-gD基因的开放阅读框的核苷酸长度在1 197～1 215 nt之间,氨基酸长度在399～405个之间,核酸同源性在97.3%～100%之间,氨基酸的同源性在89.8%～98.8%之间,在核酸820～837位有个高变重复区,不同毒株基因均对GC极为偏爱.在遗传进化关系上将我国PRV流行分为四川、华北、东南3个区域.毒株间基因内酶切位点、蛋白质亲水性、抗原表位和蛋白质高级结构预测等内容的分析结果十分相似,说明PRV-gD基因具有很高的保守性.     

几例鸡黄曲霉毒素中毒的诊治

黄曲霉毒素中毒是一种因采食了被黄曲霉毒素污染的饲料，以全身出血、消化功能紊乱、腹腔积液和神经症状为临诊特征的中毒病。鸡黄曲霉毒素中毒的发生主要是因鸡群采食了发霉变质的饲料，如玉米、豆类、麦类、配合饲料、农副产品等。任何品种、任何年龄的鸡都易感，发病急、病程短（约1周）、死亡率高。近年来，该病在中宁县一些养鸡场时有发生，造成的经济损失较大。笔者对诊治的几例鸡黄曲霉毒素中毒进行了综述，具体如下。     

兔巴氏杆菌的分离鉴定及其16S rDNA序列分析

兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌(Pm)引起的一种急性、传染性疾病,以败血症和出血性炎症为主要特征,因此又被称为兔出血性败血症[1]。该病的病原为多杀性巴氏杆菌,为革兰阴性、两端钝圆、细小、卵圆形的短杆菌,大小为(1～1.5)μm×(0.25～     

联合肌注猪IL2真核质粒对PPV VP2-PCV2 ORF2核酸疫苗免疫效果的影响

将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL2和pCI-ORF2-VP2质粒联合肌注免疫小鼠,相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立pCI-ORF2-VP2、pCI空载体、猪细小灭活苗、圆环亚单位苗对照,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体的滴度。结果显示,pCI-ORF2-VP2在PK15细胞中能正常表达,联合免疫组在第28天能够检测到PPV和PCV2抗体,第21~42天诱导淋巴细胞转化和CD4+、CD8+细胞的数量高于或显著高于pCI-ORF2-VP2质粒组。结果表明,猪IL2质粒联合肌注可以提高VP2/ORF2核酸疫苗的免疫效果。     

融合表达猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因真核质粒的构建及对小鼠的免疫原性

用PCR法扩增出猪圆环病毒2型的Rep蛋白基因（933bp）和Cap蛋白基因（705bp）,将其定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1（＋）的多克隆位点上,构建真核表达质粒pcDNA-ORF1-ORF2。将构建好的重组质粒pcD-NA-ORF1-ORF2按100μg/只腿部肌肉注射BALB/c小白鼠,同时设pcDNA-ORF1、pcDNA-ORF2、pcDNA3.1-（＋）、PCV2全毒疫苗和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第0、7、14、21、28、42天用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖效应,用ELISA法检测小鼠的抗体水平;并于首免后第0、7、14、21、28天测定脾淋巴细胞中各细胞亚群的比例,对该核酸疫苗的免疫原性进行初步评价。结果显示,重组质粒能诱导鼠体产生较强的细胞免疫和体液免疫,并从免疫后第7天起所测各组数据均显著高于（P〈0.05）或极显著高于（P〈0.01）其他试验组。结果表明,将ORF1和ORF2基因共同用于PCV2核酸疫苗的研发具有很好的前景,为研究新型猪圆环病毒疫苗奠定了基础。     

H3N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)四川分离株(A/Swine/Sichuan/01/2006)的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET32-NS1.将该质粒转化进大肠杆菌RosettaTM,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE电泳表明融合的NS1蛋白得到了大量的表达,该融合蛋白的相对分子质量约为43 500.Western-blotting结果显示该蛋白能与阳性血清发生特异性反应具有很好的免疫反应原性.结果表明,所建立的ELISA方法与几种常见猪群传染病病原无交叉反应,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可进一步优化应用于临床SIV的检测.     

一株猪源化脓隐秘杆菌的分离与鉴定

四川内江某猪场发生疾病,病猪的肝、肺出现化脓性结节,脾出血性肿大,无菌采集病猪的病变组织进行细菌分离,得到1株革兰氏阳性菌,形态多样,呈球状、杆状或棒状,单在或成丛排列,该菌在TSA平板上生长缓慢。经细菌分离培养、16S rDNA鉴定、动物致病性试验等,结果显示该株分离菌为致病性化脓隐秘杆菌。药敏试验显示,该分离菌对头孢呋肟、氨苄西林、卡那霉素、四环素、氟苯尼考等药物有不同程度的敏感性,对于指导临床用药具有积极的意义。     

副猪嗜血杆菌四川株的分离鉴定与耐药性分析

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,Hps）引起的猪的多发性浆膜炎和关节炎,主要临床症状为呼吸困难、咳嗽、发烧、被毛粗乱,发病后期可见关节肿大、跛行等症状;部分血清型可导致脑膜炎,引起共济失调。病理剖检可见胸膜炎、渗出性心包炎、纤维素性肺炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎,同时伴有胸腔积液、腹腔积液、关节积液等。该病于1910年由Glasser首次发现,因此又被称为猪革拉瑟病（G1asser’s disease）。     

四川省部分地区猪场猪伪狂犬病野毒感染的血清流行病学调查

伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种高度接触性传染病,猪感染伪狂犬病毒可导致种猪繁殖障碍,仔猪发生腹泻、生长发育受阻、神经症状等,同时伪狂犬病病毒也是引起猪呼吸道病综合征的重要原发性病原之一。感染伪狂犬病病毒后可引起种猪繁殖障碍、产弱仔,新生仔猪出现共济失调、抽搐以及突然死亡;在生长肥育猪群中,