P277多肽的表达、纯化及初步药效学分析

通过PCR方法得到P277多肽基因,插入到含门冬酰胺酶C端第199~326氨基酸残基片段的后面,形成融合蛋白,中间预留酸水解位点,并在P277多肽和融合蛋白之间加入一段碱性序列,构建pET28AnsB-C-KR-P277高效表达载体。克隆的基因在大肠杆菌中高效表达,通过Triton X-100洗涤、乙醇分级沉淀纯化融合蛋白AnsB-C-KR-P277,酸水解后经等电点沉淀去除杂蛋白,再经阴离子交换柱层析,进一步分子筛脱盐,可得到纯化的目的多肽P277。这种多肽生产平台,为多肽生物合成提供了一个很好的方法。纯化后的P277免疫型糖尿病模型动物NOD(non-obese diabetic)小鼠,可明显降低NOD小鼠自发性糖尿病的产生。     

浅谈嗜血杆菌病的诊断与控制

副猪嗜血杆菌病又称纤维素性浆膜炎和关节炎,为革兰氏阴性小杆菌,呈散心性的多发性浆膜炎。近两年来。我国副嗜血杆菌在养猪场引起多发性浆膜和关节炎的报道屡见不鲜,特别是规模化猪场在受到蓝耳病、圆环病等感染之后免疫功能下降时,     

向着我以为可以走的路

“我自已是什么也不怕的,生命是我自己的东西,不妨可以漫步走去,向着我以为可以走的路……”鲁迅先生的这句话,让我感悟到一个成功者所必须具备的心理素质。一个人先天的客观条件并不重要,重要的是如何坦然地     

鱼源山梨醇发酵阳性温和气单胞菌的分离与鉴定

从鲫鱼肠道中分离出1株细菌,暂时编号为SR-1,进行细菌形态学观察、理化特征、16S rDNA序列分析及药敏试验等研究,结果表明SR-1菌株为山梨醇发酵阳性的温和气单胞菌;PCR扩增SR-1菌株的16S rDNA序列为1509 bp;BLAST比对分析结果表明SR-1菌株与温和气单胞菌(Aeromonas sobria)亲缘关系最近,序列同源性为99.87%～100%;药敏试验结果显示SR-1菌株对阿奇霉素、氯霉素、四环素、诺氟沙星、头孢噻肟、头孢克肟等药物敏感。     

HPLC法·酶法和间苯二酚法检测生物制品中唾液酸含量方法学比较

[目的]比较高效液相色谱法(HPLC)、酶法及间苯二酚法测定唾液酸浓度的准确性、灵敏性和线性范围,探讨3种方法的实际应用特点。[方法]建立HPLC、酶法和间苯二酚法测定唾液酸浓度的方法,并分别使用3种方法同时测定同种生物制品中的唾液酸浓度。[结果]HPLC法线性范围为0.3~2 500.0μg/mL,回收率为98.0%~99.2%,日内、日间RSD分别为0.8%~1.4%和1.6%~1.8%。酶法线性范围为0.6~20.0μg/mL,回收率为102.0%~106.5%,日内、日间RSD分别为3.5%~4.2%和4.0%~4.6%。间苯二酚法线性范围为39~1 250μg/mL,回收率为98.2%~100.2%,日内、日间RSD分别为2.9%~3.3%和3.0%~3.5%。[结论]3种方法回收率和精密度差异无显著性,但高效液相色谱法更加简单、便捷、成本低廉、灵敏度高且线性范围较宽,广泛适合生物制品中唾液酸含量测定。     

洛克沙胂暴露对斑马鱼的急性毒性及其组织中HSP70的表达定位

[目的]对洛克沙胂的水生生态安全评价、畜禽粪便管理以及HSP70在斑马鱼应激状态下的保护作用的研究提供科学依据。[方法]以斑马鱼为试验生物,进行洛克沙胂暴露对斑马鱼96 h的急性毒性试验,并对洛克沙胂暴露下斑马鱼组织（鳃、肝脏、性腺）中HSP70的表达定位进行了免疫组织化学初步研究。[结果]洛克沙胂对斑马鱼的急性毒性较低,96 hLC50为249.80 mg/L;在浓度100mg/L洛克沙胂暴露下,HSP70在斑马鱼的鳃、肝脏、性腺3种组织中有特异性表达,主要定位在鳃小片的基底膜、鳃弓和鳃丝上皮细胞及红细胞的胞质中,性腺的基质细胞中,肝脏的静脉血管四周和红细胞胞质中。[结论]洛克沙胂对于斑马鱼的毒性属于低毒范围。     

洛克沙胂在青菜及土壤中的残留特性

通过盆栽试验.利用原子荧光和高效液相色谱法研究了洛克沙胂在青菜及土壤中的残留特性.结果表明,青菜对洛克沙胂有明显的吸收累积现象,在试验期内植株中砷浓度均高于国家规定的蔬菜中砷限量(0.5 mg·kg-1).洛克沙胂在土壤中的消除可按指数模型拟合.相关系数大于0.9,平均半衰期为(20.87±2.16)d.至60d时,除20mg·kg-1剂量组外,各处理组土中的洛克沙胂含量为6.42～22.86 mg·kg-1.     

肉鸡疫病频繁发生的原因分析及防治对策

近年来,我国畜牧产业快速发展,养鸡业已经成为了畜牧业中发展最快的产业链,从小规模的分散养殖,已经逐渐发展为大规模的集约化生产,在很多地区都实现了产供销一体化的服务体系,促进了我国畜牧养殖业的快速发展。然而,由于疫病引起鸡生病和死亡的现象也变得越发严重,尤其是在肉鸡的养殖过程中,疫病频繁发生,给养殖户带来了较大的损失。基于此,本文主要针对肉鸡疫病频繁发生的原因及对策进行简单的分析。     

嗜水气单胞菌粘附素和外膜蛋白A基因克隆与结构预测

采用PCR方法扩增嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）外膜蛋白相关基因,即粘附素（Aha）、外膜蛋白A（OmpA）基因全长序列,进行DNA测序及生物信息学分析。结果表明：Aha基因长1 314 bp,推导编码355 aa,5～24 aa区域为跨膜螺旋,26～355 aa区域为革兰氏阴性菌孔蛋白结构域（PF00267）,Aha蛋白三级结构与模板（PDB：1PHO_A）相似性达28.21%;OmpA基因长1 102 bp,推导编码338 aa,含有OmpA跨膜结构域（PF01389）和OmpA结构域（PF00691）,预测OmpA蛋白抗原表位位于64～69 aa、160～171 aa、244～249 aa、259～274 aa和295～301 aa区域,OmpA蛋白三级结构OmpA跨膜结构域和OmpA结构域与模板（PDB：1BXW_A,PDB：4ERH_A）相似性分别为27.45%和57.58%;进一步采用拉马钱德兰图（Ramachandran plot）检测分析,与Aha、OmpA基因蛋白三级结构预测结果一致。本研究有助于理解嗜水气单胞菌致病的分子机制,为鱼类疾病防治及疫苗应用提供科学参考。     

倒卵叶五加药材的基原鉴定研究

[目的]应用DNA条形码鉴定技术对短柄五加等五加属植物进行研究,以弄清倒卵叶五加和短柄五加的物种关系.[方法]通过对馆藏标本与现地植物形态进行观测,采用通用引物ITS2和psbA-trnH对采自陕甘宁地区的短柄五加等50个样本进行扩增后双向测序,并从GenBank数据库下载了五加属等相关植物的序列,分别通过ITS2 database或其序列注释,获得ITS2和psbA-trnH序列,随后进行BLAST比对鉴定分析;用MEGA 6.06软件对所得序列进行比对,分析变异位点,计算GC含量、种内和种间遗传距离,构建NJ系统发育树.[结果]ITS2和psbA-trnH序列的PCR扩增和测序成功率均为100％;倒卵叶五加和短柄五加的植物形态、ITS2序列和psbA-trnH序列完全相同.ITS2序列:短柄五加和糙叶五加仅有一个碱基的差异,蜀五加与藤五加序列相同;psbA-trnH序列:短柄五加与糙叶五加的差异显著,短柄五加与蜀五加序列相同.[结论]同时使用ITS2、psbA-trnH这2个标记的DNA条形码可以准确鉴别短柄五加等五加属植物;短柄五加与倒卵叶五加为同一种植物.