绵羊精原干细胞移植受体内源性生殖细胞的消除研究

试验拟建立绵羊精原干细胞移植受体内源性生殖细胞的消除技术.将8只5月龄小尾寒羊公羊随机分为4组,各组第2次处理后3周,公羊睾丸活体采样,石蜡切片、HE染色验证处理效果.结果表明,白消安处理公羊可以完全消除内源性精原干细胞和其他生殖细胞.LHRH、LH疫苗处理的公羊,只能使部分精子发生丧失和生殖细胞消除.白消安是精原干细胞移植受体绵羊内源性生殖细胞最有效的消除技术.     

菏泽市农机合作社活跃在机械入库保养第一线

秋季作业结束后，根据山东省菏泽市农机部门统一安排部署，全市农机专业合作社及时转变工作重心，积极抽调技术人员投入到机械入库保养工作中，目前各项工作进展顺利。     

地方动态

北京开展补贴机具检查和观摩活动11月23～25日,北京市农业局组织全市9个郊区县农机管理部门开展了补贴机具检查和观摩交流活动。此次活动的目的是,对2011年各区县补贴机具到位情况和使用情况进行检查,同时通过观摩交流使各区县相互了解北京市补贴机具的发展方向和补贴重点,为2012年农机具购置补贴工作打好基础。     

菏泽机手驾机“闯关东”收获颇丰

昔日山东人徒步＂闯关东＂创造了中国致富神话,今菏泽市农机手驾驶玉米联合收获机＂闯关东＂依然再获丰收。8月23日,菏泽市牡丹区部分农机手在建业农机专业合作社社长何建业的带领下,赴吉林省农安市、白城市、松原市、黑龙江省肇远、大庆、沈阳郊区、内蒙古齐齐哈尔市、保康等市,     

徐淮山羊H-FABP基因克隆、表达产物亚细胞定位的研究及转基因小鼠的制备

旨在克隆徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的cDNA,探讨其生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白对该基因亚细胞水平的表达定位,探究该基因在异种生物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性。采用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆徐淮山羊H-FABP基因cDNA,进行生物信息学分析,构建其融合表达载体pEGFP-H-FABP。脂质体(LTX)介导基因转染山羊成纤维细胞(GEF),48h后进行荧光检测,RT-PCR检测mRNA在细胞内的表达。利用睾丸注射将目的基因转入小鼠体内,在DNA和蛋白水平上检测目的基因的表达情况。结果,徐淮山羊H-FABP基因完整编码区(CDS)大小为402bp,编码133个氨基酸,GenBank登录号为AY466498.1。徐淮山羊H-FABP序列与人、鸡、褐家鼠、奶牛、野猪、驴及斑马鱼相应编码区同源性为89%、76%、85%、84%、93%、91%、70%,氨基酸序列同源性为90%、79%、88%、97%、95%、94%、72%。成功构建融合表达载体pEGFP-H-FABP,目的基因在mRNA水平上成功表达。目的蛋白定位于细胞质中,与在线预测结果相同(无信号肽,定位于细胞质中)。通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内实现暂态表达和持续性表达。本研究成功克隆了徐淮山羊H-FABP基因cDNA,而且H-FABP基因在进化过程中是保守的。该蛋白无信号肽,在单细胞水平上可表达于细胞质中,在小鼠体内也可以成功表达。     

转GFP基因核移植牛胚胎的研究

试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白(GFP)-新霉抗性(neo)双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚.研究了体外成熟培养液中添加EGF(表皮生长因子)对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果.结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高.但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著(P＞0.05);mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎.     

锌指核酸酶及其应用研究进展

锌指核酸酶由锌指和非限制性切割酶两部分组成,锌指能特异性结合基因组双链DNA,非限制性切割酶能造成染色体上双链DNA的断裂,通过机体的修复机制可以使目的基因突变或外源基因插入,进而应用于转基因动物的制备.综述了锌指、切割酶及采用锌指核酸酶制备转基因动物的研究进展,主要包括锌指的发现、结构及与DNA结合时的碱基分布和结合方式,锌指的筛选和设计方法;切割酶的研究进展包括FokⅠ的发现及切割特点,基因修饰后的异源二聚体切割特异性等.     

一种快速、无毒的植物DNA微量抽提方法

植物DNA的抽提是植物分子生物学研究最基本的实验,所提取DNA质量的好坏直接影响着分子操作.以往所用的DNA提取方法大多需要用酚、氯仿和巯基乙醇等试剂,而这些试剂均对人体有毒,必须在通风柜中操作.而且酚、氯仿等试剂对DNA有很强的损伤作用,影响所提DNA的完整性,也影响研究结果.为此,经过长期实践,我们探索出一种快速微量植物DNA抽提方法,该方法不用酚和氯仿等试剂,对人体无毒害作用,步骤少,无需在通风柜中操作,简单易行.所提DNA纯度和得率高,适合酶切和PCR操作.     

基因枪转化技术在动物转基因中应用的研究进展

基因枪转化技术无论在动物还是植物方面都产生了巨大的影响,因粒子介导的转基因方法简单、安全、高效,而越来越被人们所重视。研究结果表明,该转化技术不仅能够用于组织、细胞、器官,甚至可用于一些较难转染的靶目标,同时还可用于体内和体外信息的转换。目前手提式基因枪已广泛应用于皮肤、组织、各种细胞或内脏器官的转染,应用最广的领域是基因治疗,主要包括基因免疫和抑制肿瘤生长。近几年,基因枪技术发展迅速,应用范围越来越广,已经取得了丰硕的成果。作者主要叙述了基因枪转化的基本原理及近年来人们对基因枪转化技术条件的改进,同时就基因枪在动物转基因中的应用和一些主要的研究成果作了阐述,主要包括利用基因枪基因免疫、基因治疗、自杀基因治疗癌症、胚胎转基因、各种动物细胞和器官组织转基因等,并对基因枪技术在动物上应用的优势和不足进行了一些分析,最后展望了基因枪转化技术在动物中的应用前景。