一株抑草真菌发酵液中的抑草成分分析

为了鉴定从桉树根际筛选到的微生物的抑草潜力和抑草成分,以桉树根际土壤中筛选到的一株真菌为材料,利用生物测试验证菌株发酵液的抑草潜力,利用GC-MS对菌株发酵液抑草成分进行验证。结果表明,不同浓度菌株发酵液对稗草的根长、株高和干重都有显著的抑制作用,对稗草根长抑制率最大为稀释50倍时,抑制率为7.55%;对稗草株高和干重抑制率最高为原液,抑制率分别为56.53%和25.46%。GC-MS鉴定共检测到86个物质,含氮化合物最多,占59.10%,其次为羧酸及酯类化合物,占19.26%。抑草物质生物测试结果表明,邻香豆酸、柠檬醛和胡椒碱在低浓度时对莴苣的根长和株高都有很强的抑制作用。表明该菌株能够产生多种化感物质的结构类似物,使得菌株发酵液具有很强的抑草作用,具有开发为微生物除草剂的潜力。     

多杀性巴氏杆菌中recN基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达，并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列（登录号：CP003313.1）设计1对引物，通过PCR扩增获得目的基因片段，构建pET-28a（+）-recN重组质粒并转化E.coliDH5α感受态细胞，提取质粒进行酶切鉴定，将鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明，试验成功克隆了大小约为1 677 bp的recN基因序列，通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94 ku，主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析，recN蛋白的分子式为C₂₇₃₅H₄₄₂₈N₇₈₆O₈₅₅S₁₆，消光系数为24 785，不稳定系数为43.99，属于不稳定蛋白；理论等电点（pI）为5.62，为酸性蛋白；总平均亲水性为-0.316，与试验表达的包涵体蛋白性质相同，即同为疏水性蛋白；recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30 h，在酵母（体内）中的半衰期>20 h，在大肠杆菌（体内）中的半衰期>10 h；二级结构主要以α-螺旋（64.87%）及无规则卷曲（21.00%）为主；经疏水性分析，预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。     

猪多杀性巴氏杆菌病的诊断与防治

猪多杀性巴氏杆菌病常表现为动物机体传染性肺炎,严重时更会导致全身出血性败血症。本病多继发于某些传染病后,有时也呈地方性流行,可在不同种属动物间相互交叉传染,对我国养殖业造成不可估量的经济损失。本文从病原学、流行病学、发病机理、临床特点等方面入手,提出一些诊断与防治措施,以期为临床生产实践提供参考。     

杀线虫苏云金芽胞杆菌NBIN-863高含量悬浮剂的研制

目前我国微生物农药原药生产技术已达到甚至超过发达国家水平,但制剂技术却存在较大差距,主要体现在剂型结构不合理、制剂质量差、农药助剂种类及品种少、剂型加工工艺总体水平还比较落后等方面。苏云金芽胞杆菌（Bt）等功能微生物产品的市场容量及应用效果与剂型是密切相关的。为了明确新型生物杀线剂NBIN-863的最佳施用剂型,特开展此试验。通过对防腐剂、分散剂、悬浮剂等不同助剂的选择,研制了一种高含量Bt悬浮剂（5.2×10⁹～7.9×10⁹CFU/mL）。配方优化试验表明,在Bt发酵液中加入0.4%防腐剂山梨酸钾、1.0%分散剂硅酸镁铝、4.0%悬浮剂木质素磺酸钙,用盐酸调节pH至4.5,54℃热储前芽胞数最高为7.9×10⁹ CFU/mL,对秀丽隐杆线虫活性最高,LC₅₀为2.83 mg/L,对黄瓜根结线虫田间防效达68.64%。综合各指标,尤其是对秀丽隐杆线虫的半致死浓度,杀线虫NBIN-863悬浮剂（7.9×10⁹ CFU/mL）效果最好,不仅流动性好,而且耐贮藏,是防治作物根结线虫病的理想药剂。     

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用

根椐Gen Bank公布的兔多杀性巴氏杆菌16S r RNA和支气管败血波氏杆菌fim N基因序列,设计两对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中的兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌核酸为模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的258bp和449bp的特异性片段,而对其他4种兔病原菌的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,对兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的最低核酸检出限分别均为1pg。通过对78份临床病料检测,将建立的双重PCR技术和单项PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的同时检测和鉴别诊断。     

猪源多杀性巴氏杆菌的病原流行病学及其毒力特性

2009-2013年间,采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从河南及其周边省份1 914份有肺炎等症状猪的肺脏等病料组织中分离鉴定出142株多杀性巴氏杆菌(总分离率为7.4%),其中A型69株,占48.6%;D型70株,占49.3%;3株不能定型;没有发现B、E和F型。2009-2013年间,多杀性巴氏杆菌不同年份的分离率为6.0%~10.6%,其中2012年显著偏高(P0.01)。另外发现其分离率具有明显的季节性,其中6和12月份最高。多杀性巴氏杆菌最常见的共感染菌依次是链球菌(50.5%)、副猪嗜血杆菌(41.1%)、大肠杆菌(29.5%)、支气管败血波氏杆菌(14.7%)和沙门菌(10.5%)。小鼠毒力试验结果表明,多杀性巴氏杆菌血清A型菌株毒力普遍较强,而D型毒力普遍较弱。但是,A型菌株也有毒力较弱的菌株,另外,在D型菌株中发现了一株毒力很弱的菌株PM-18,其LD50在4.8×107 CFU以上,该菌株是否能作为天然弱毒疫苗菌株值得进一步研究。     

贵州某野生动物园长臂猿流感病毒、支原体及巴氏杆菌混合感染的诊治

为弄清贵州某野生动物园长臂猿死亡的原因,本试验采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检诊断和RT-PCR检测确诊等方法,对该野生动物园发病长臂猿进行了诊断。试验结果显示,流行病学调查、剖检病理初步诊断该野生动物园长臂猿疑似流感病毒、支原体和细菌混合感染,RT-PCR/PCR检测确诊发病长臂猿为流感病毒、支原体混合感染,细菌分离培养、生化特性鉴定和动物致病性试验确诊为多杀性巴氏杆菌感染。结果表明造成该野生动物园长臂猿发病死亡的原因为流感病毒、支原体和多杀性巴氏杆菌混合感染。根据诊断及药敏试验结果,制定出了免疫预防及治疗措施。     

牛巴氏杆菌病的鉴别诊断与防治

牛巴氏杆菌也称之为牛出血性败血症,是因为受到了多杀性巴氏杆菌的影响而出现的一种疾病,该疾病存在传染性,一般为散发。患病的牛只身体的组织、体液、粪便等处均可以检测到巴氏杆菌,通过消化道和呼吸道又可以继续进行传播。牛只在寒冷、潮湿、缺乏营养等环境条件下具有较高的发病率,造成了养殖场的经济损失。1临床症状在患牛死亡之前,其眼结膜出现了充血症状,呼吸急促,运动失调,死亡后可见其肛门和口鼻有流血