牛病毒性腹泻病病毒Changchun184株E2基因的克隆及在大肠杆中的高效表达

根据GenBank已发表的多个BVDV-1序列的比较分析结果设计引物,应用RT-PCR及套式PCR克隆得到包含Changchun184(CC-184)株E2基因的片段F2/R2,克隆、测序分析结果表明该片段大小为1391bp,软件分析结果表明CC-184株E2基因长度为1122bp(GenBank accession number:AF526380).通过基因操作构建得到表达完整E2蛋白和去除E2蛋白C-端疏水区的重组质粒pET28a-BE2和pET28a-BE2m,转化大肠杆菌并诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测结果表明重组菌能表达目的蛋白,其表达量分别占菌体总蛋白的6.25%和35.7%.Western blot分析结果正实表达蛋白为CC-184株E2蛋白.     

猪瘟母源抗体在仔猪体内持续时间的研究

仔猪吮吸免疫猪瘟疫苗母猪的初乳后,监测母源抗体在仔猪体内的消长规律,以探索仔猪猪瘟疫苗最佳首免日龄.试验选择3个场共12头母猪,产前136～140天进行猪瘟兔化弱毒(细胞苗)疫苗接种,4毫升/头.通过猪瘟抗体酶联免疫吸附试验(竞争性ELISA)检测其所产仔猪7、14、21、28、35和42日龄时血清中抗体水平.结果发现,3个猪场试验仔猪母源抗体下降幅度不一,甲场第28天降到最低,丙场第21天降到最低,之后其抗体水平均出现升高现象.但3个猪场之间不同日龄仔猪抗体水平差异较大.     

无规定动物疫病区建设思路

试点先行、整体推进，无规定动物疫病区建设成就必将为我国养殖业健康发展保驾护航。     

马尔堡病毒核蛋白的原核表达及纯化

目的以原核表达的方式获得了马尔堡病毒的核蛋白,并纯化。方法将马尔堡病毒核蛋白基因亚克隆到原核表达质粒pET-28(a)中,构建重组表达质粒pET-28(a)-M-NP,并将重组质粒用热休克方法转化BL21(DE3)感受态细菌,用IPTG诱导蛋白表达后,以SDS-PAGE分析表达形式及表达量,并利用His-Band Ni+柱纯化。结果成功构建重组表达质粒pET-28(a)-M-NP,以1.0mmol/L终浓度的IPTG在37℃诱导表达5h后,破菌沉淀中有目的蛋白表达。结论成功表达并纯化了马尔堡病毒的核蛋白,为后续研究奠定了基础。     

流行性乙型脑炎病原生态学的研究概况

流行性乙型脑炎也称日本脑炎(简称乙型脑炎或乙脑),是由日本脑炎病毒(JEV)经媒介蚊虫传播的严重的人兽共患病.JEV能侵害人的中枢神经系统,引起病毒性脑炎,具有很高的病死率.JEV的宿主种类众多且自然分布广泛,为了有效地预防乙脑疫情的发生,有必要开展乙脑的病原生态学研究.论文就乙型脑炎的病原学特征、地理分布、自然宿主、...     

甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定

构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性.人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因.将扩增的基...     

某猪场“僵猪”致病原因分析

为分析某猪场出现"僵猪"的可能原因,对该猪场的11头"僵猪"采集血液样品,用RT-PCR方法检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),用PCR方法检测猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)。结果11份样品的CSFV、PRRSV及PRV检测均为阴性,PCV-2经套式PCR检测均为阳性。对11份样品分离血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PCV-2血清抗体,结果均为阳性。随后又对与11头"僵猪"同舍的部分健康猪进行了上述4种病毒的RT-PCR及PCR检测,结果均为阴性。由此推测PCV-2极有可能是该猪场形成"僵猪"的主要因素之一。     

猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测

本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^1范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10拷贝/μL的病毒核酸,与本实验室建立的RT-套式PCR（RT-nPCR）具有相近的敏感性,二者对152份不同样品检测符合率达94.7%。应用本方法对人工感染10^6TCID50猪瘟石门强毒的猪只感染后0-14 d全血中猪瘟病毒RNA进行了定量检测,揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化,证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性。此外发现,在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3-4 d可从其全血中检出病毒RNA。     

甲型流感病毒H1N1感染猪和其他动物的回顾

甲型流感病毒在哺乳动物和禽类中存在广泛感染谱,通常野生水禽被认为是甲型流感病毒主要的自然贮存宿主。2009年5月2日,首例新甲型H1N1病例确诊于加拿大一个猪场,公共卫生学调查表明病原是由人传播到猪的。随后新甲型H1N1感染火鸡、猫、犬、水貂和一些野生动物相继被报道,病毒从人传播到动物在后续病例得到更多证实。此病毒最初被命名为＂猪流感H1N1＂,虽然后来被正名为新甲型H1N1,但仍导致全球范围内猪肉产品消费锐减,生猪养殖业深受影响。至今,新甲型H1N1已平息,总结新甲型H1N1感染猪及其他动物感染谱,不但对正确认识流感病毒传播特点、为类似突发疫病防控提供经验,而且也使我们更重视流感病毒易感动物监测,避免使猪再次蒙冤,对保护养猪业健康发展有一定的价值。     

日本脑炎病毒NS3基因截短表达及其在神经细胞定位研究

根据GenBank发表的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因序列,合成用于克隆编码病毒NS3蛋白C端的基因片段(955~1857 bp)的引物。从感染JEV的细胞样品中,采用RT-PCR扩增出大小约900 bp的目的片段,插入到pET-28a(+)表达载体,诱导表达出NS3C蛋白。将该重组蛋白免疫小鼠制备NS3C抗血清,通过间接免疫荧光和Western blot验证,该抗血清能特异识别JEV感染Vero细胞中的NS3蛋白。使用该抗血清研究了JEV在神经细胞内的亚定位,发现NS3主要定位于JEV感染的神经细胞的胞浆中,并在细胞核周围分布明显。