鸡贮精腺上皮细胞的分离及原代培养

试验旨在探讨稳定可靠的贮精腺上皮细胞分离及原代培养方法,为研究鸡贮精机理提供细胞模型。以鸡输卵管的子宫阴道交接部组织样为材料,采用酶消化法和组织块培养法分离培养母鸡贮精腺上皮细胞,观察母鸡贮精腺上皮细胞的培养情况,比较不同细胞培养方法获得贮精腺上皮细胞的生长情况。结果表明,用胶原酶或胰酶单独消化母鸡子宫阴道交接部组织,经100目过滤后获得的贮精腺上皮细胞24 h后可贴壁,但48～72 h后细胞死亡;用胶原酶Ⅺ(0.01 g/mL)与胰酶(0.25%)先后消化母鸡子宫阴道交接部组织后再经100目过滤获得的贮精腺上皮细胞贴壁性良好,24～48 h细胞出现明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,开始死亡;用组织块培养法7 d可获得鸡贮精腺上皮原代细胞,该细胞可传2～3代;用组织块培养法获得的细胞进行免疫组化试验,发现细胞表达贮精腺差异表达基因编码的NXPH1蛋白,该蛋白在培养细胞内的表达符合其分泌蛋白特性,表明组织块培养法所获细胞可用于后续研究。综上,用组织块培养法获得的鸡贮精腺上皮细胞可为研究母鸡贮精腺机制提供细胞模型。     

鸡碳酸酐酶4的生物信息学分析

为进一步研究和探索碳酸酐酶4(CAⅣ)的结构和功能,采用生物信息学软件预测并分析鸡CAⅣ的理化性质、结构特征和功能域。结果表明,鸡CAⅣ由316个氨基酸构成,是亲水性较强的膜结合蛋白,二级结构上α螺旋和β折叠较多,且抗原表位丰富,存在信号肽,有可能是细胞膜成分之一。CAⅣ蛋白有多个丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点及3个酪氨酸磷酸化位点,并且第165位的天冬酰胺可能为糖基化位点。进化分析发现,鸡CAⅣ与火鸡的氨基酸序列相似性最高,其后依次是珍珠鸡、鹌鹑、大雁和绿头鸭,这些物种在进化的过程中关系密切,也说明鸡CAⅣ在生物进化过程中的序列保守性较强。     

山羊β-防御素表达载体的构建及产物的活性鉴定

对山羊GBD-1进行载体构建,转到毕赤酵母中高效表达并对表达产物的生物学活性进行鉴定,为进一步研究防御素抗菌机理打下基础。根据GenBank中山羊β-防御素的CDS区序列,设计含有特殊酶切位点的引物扩增到目的片段,将该片段克隆到真核表达载体pPICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA/GBD-1,电转化到毕赤酵母中进行诱导表达。测序结果表明扩增的目的片段为114 bp,编码38个氨基酸,经Tricine-SDS-PAGE电泳验证在4.3 KD处有目的蛋白;作抑菌实验发现,重组蛋白对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果。山羊防御素成功地在毕赤酵母中诱导表达,为进一步研究GBD-1的蛋白纯化以及抗菌机理打下基础,并为利用基因工程方法生产防御素提供理论依据。     

反刍动物PRNP基因进化机制研究

PRNP基因编码朊蛋白,若朊蛋白异常折叠并在宿主体内蓄积则可导致绵羊和山羊瘙痒病,对肉羊产业造成巨大经济损失.同时,羊群还可感染疯牛病且不表现明显的临床症状,从而增加了该病沿食物链侵染人类的风险.鉴于此,清除瘙痒病的育种计划在欧美国家已经持续近300年,但目前仍然收效甚微.可能原因是PRNP基因是动物固有的基因,只在动物生命晚期才表现明显的不良适应性,此时动物基本上已经繁殖后代,该基因已经传代并扩散.研究PRNP进化模式可为抗病育种提供理论参考.本研究采用最大似然函数方法分析PRNP基因的进化驱动力.利用PAML中部分嵌套模型结合SLAC/FEL/REL三个模型共同确认PRNP基因受正选择驱动的是编码98和100氨基酸的位点,而编码136和171的位点为中性进化,154为强烈的漂变选择.这在一定程度上可解释目前针对136、154和171位点的瘙痒病育种计划对清除该病作用不明显的原因.     

鸭毛囊中ASIP基因片段的克隆及组织表达分析

根据GenBank发表的鸡刺鼠信号蛋白(ASIP)基因序列的同源保守区域,设计了1对特异性引物。以番鸭、高邮鸭和英系北京鸭(即樱桃谷鸭)毛囊RNA为模板,经扩增、测序及拼接得到的部分mRNA序列均为编码序列,共308bp,对应编码102个氨基酸。与已发表的原鸡和鹌鹑的ASIP对应的mRNA核苷酸序列进行比对,番鸭、高邮鸭和英系北京鸭的同源性均在92.53%以上,相应编码的氨基酸序列同源性均高于92.16%。高邮鸭与英系北京鸭核苷酸,氨基酸序列一致,同源性为100%。半定量PCR结果显示,番鸭ASIP基因表达具有较高的普遍性,在皮肤组织(毛囊和皮肤)和中枢神经系统(下丘脑)及其他非皮肤中均有表达。皮肤和毛囊的表达差异不显著(P>0.05),下丘脑中的ASIP基因相对表达量最高,极显著高于皮肤中ASIP基因的表达量(P<0.01),而与毛囊中的差异不显著(P>0.05)。     

三元杂交猪多性状综合生产性能研究

测定杜长大[杜洛克×(长白×大约克)],汉长大[汉普夏×(长白×大约克)],大杜长[大约克×(杜洛克×长白)],长大二[长白×(大约克×二花脸)]等4个三元杂交组合的日增重、料重比、屠宰性能和肉质性能,估测其综合生产性能.结果表明杜长大的综合生产性能最好.     

猪RYR1基因对繁殖性能的影响

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了大约克和大长（大约克×长白）母猪的ＲＹＲ１基因。它具有ＮＮ、Ｎｎ、ｎｎ３种基因型,其频率分别为０．７９、０．１６和０．０５;Ｎ和ｎ的基因频率分别为０．８８和０．１２。该基因处于非遗传平衡状态。携ｎ等位基因可降低母猪的产仔数和仔猪成活率,对繁殖性能有不良的遗传效应,有必要从母猪群中清除该等位基因。     

猪卵泡抑制素主动免疫对山羊生殖的影响

抑制素是由动物的性腺分泌的一种糖蛋白,主要生理作用是反馈性抑制ＦＳＨ的合成和分泌。用抑制素对动物进行主动免疫,产生抑制素抗体中和内源性抑制素,从而削弱或解除它对ＦＳＨ分泌的抑制作用,引起动物排卵数增加,可能达到多产的目的。这种方法不仅与在生产和实验中广泛应用的促性腺激素处理一样可以提高动物的排卵率,而且可以弥补促性腺激素处理个体反应不一的缺陷,同时还能提高处理后几个胎次的产仔数,这在畜牧生产中有重要的应用价值。为此,本实验制备猪卵泡抑制素,并用它免疫山羊,探讨它用于提高家畜繁殖力的方法和可能性。1　材料…     

牦牛乳蛋白基因杂合度与泌乳性能的关系

测定了 2 0 9头牦牛的产奶量、乳脂率、乳蛋白含量、乳糖和乳蛋白组分的相对含量等泌乳性状 ,并对每一个体分别进行 6个乳蛋白基因座的基因分型。结果表明 ,该牦牛群体平均基因杂合度为 0 1794 ,牦牛乳蛋白个体基因杂合度在0～ 0 5内 ,多数个体的基因杂合度比较低。在该群体中 ,随着个体基因杂合度的增加 ,产奶量、乳脂和α乳清蛋白 3个泌乳性状值显著增加 (P <0 0 5 )。当个体基因杂合度为 0 3333时 ,产奶量最高 ( 2 79 4 5 83kg) ,约比全群均值高出 13%( 2 4 7 12 90kg)。当个体基因杂合度为 0 5 0 0 0时 ,乳脂率最高 ( 6 5 4 83% ) ,约比全群均值 ( 5 7785 % )高出 13%。当个体基因杂合度为 0 5 0 0 0时 ,α 乳清蛋白含量最高 ( 18 10 80 % ) ,约比全群均值高出 12 %。提示用一定的选配措施增加基因杂合度可以提高牦牛的泌乳性能     

新扬州鸡公鸡体型结构和精液品质的测定分析

测定了32只40周龄新扬州鸡公鸡体型结构和精液品质,结果表明公鸡体重、体斜长、胸宽、胸围和胸骨长等5个性状间呈显著正相关（P＜0．05）,精液量与有效精子数之间呈显著正相关（P＜0．01）。公鸡体型结构和精液品质间的通径分析表明,胸围和胫长是决定精液浓度的重要因子,其中胸围对精液的直接效应为0．46,胫长对精液浓度的效应为－0．54。