鳗弧菌灭活疫苗对牙鲆免疫效果的研究

制备鳗弧菌福尔马林灭活的全细胞疫苗，腹腔注射接种牙鲆，50d后进行第2次免疫。利用自制的兔抗鱼血清的抗血清通过ELISA实验检测了受免鱼特异性免疫应答水平，并通过攻毒实验，测定了疫苗对牙鲆的免疫保护率。结果表明，各免疫组血清抗体效价的最高值分别达1：512、1：2048、1：1024；各组受免鱼对人工攻毒均具有保护作用。用鳗弧菌攻毒后，免疫保护率分别达81．25％、87、50％、93．75％，而且发现受免鱼对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)也表现了一定的交叉保护性，免疫保护率分别为46．15％、53．85％、53．85％。     

大花蕙兰授粉后子房cDNA差异表达片段序列分析

 应用mRNA差异显示(DDRT-PCR) 方法比较分析了大花蕙兰(Cymbidium hybridium ) 授粉后2 d与未授粉子房的基因表达差异。结果分离到了7个在授粉后子房中特异表达的cDNA片段, 分别命名为CDD-313, CDD-272, CDD-265, CDD-243, CDD-193, CDD-218,CDD-470。在GenBank中进行同源性比较发现前4个没有同源序列与之匹配; 后3个片段推导的氨基酸序列分别与ABC型transporter, GTPase和40S核糖体蛋白质S3 (RPS3) 有高度同源性。反向Northern杂交进一步证实它们存在, 并在授粉子房中高度表达。其中, 最为有意义的是CDD-470, 其推定的氨基酸与参与细胞生长分化的植物源多功能蛋白RPS3高度同源性, 进而推测其与RPS3有相似的功能, 可能与兰花子房发育有关, 这为解释花发育分子机制提供了新资料。     

羊驼核糖体蛋白S5(RPS5)基因与绒毛生长发育的研究

利用southern blotting技术从羊驼皮肤cDNA文库中筛选出核糖体蛋白S5(RPS5)基因,对该基因进行测序,通过对羊驼RPS5基因的序列结构特点及编码氨基酸与其它哺乳动物的进行比较分析,从而发现羊驼RPS5基因的特性;并对序列进行生物信息学分析,确定基因发挥功能的特殊结构域,进而对羊驼RPS5基因的功能进行分析研究,为以后的相关研究奠定基础。     

嗜水气单胞菌温敏胞外蛋白酶活性片段的表达和对小鼠的免疫试验

为确定嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)J-1株温敏胞外蛋白酶EprJ1的表达产物是否具有酶活性和抗原性及测定对小鼠的相对保护率,根据eprJ1基因ORF阅读框的序列设计1对引物,扩增出不含信号肽序列的EprJ1成熟蛋白结构基因(850bp),经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切后连接pET-32a( ),转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21。在30℃经IPTG诱导后,重组菌冻融液在脱脂奶平板上经28℃和24h孵育检测有透明溶蛋白圈出现,经56℃和30min处理后则无。纯化的重组蛋白免疫小鼠后,用1.0×107cfu的AhJ-1(50LD50)腹腔注射攻击小鼠,重组蛋白对小鼠的相对保护率可达60%。免疫印迹显示,AhJ-1胞外产物的抗血清可以识别该融合蛋白,但AhJ-1的热稳定胞外蛋白酶ECPase54抗血清不能识别该融合蛋白。重组蛋白分子量约53.2kD,有温敏蛋白酶活性和抗原性。     

黄芪多糖佐剂对大菱鲆五联疫苗免疫增效作用

用福尔马林灭活哈维氏弧菌、鳗弧菌、迟钝爱德华氏菌、大菱鲆弧菌和溶藻胶弧菌制备成五联灭活疫苗,添加黄芪多糖作为佐剂。分别用添加黄芪多糖佐剂组和无佐剂组对大菱鲆进行腹腔注射,在第7、14、21、28、35、42、56天采取血样并检测抗体效价、溶菌酶活力和SOD活力,第56天进行人工攻毒实验,测定免疫保护力。结果表明,黄芪多糖佐剂组(免疫组2)和无佐剂组(免疫组1)两组的溶菌酶活力和SOD活力都在第28天达到最高值,且黄芪多糖佐剂组显著高于无佐剂组(P<0.05)。两个免疫组抗体效价也都在第28天达到最大值,但黄芪多糖佐剂组要显著高于无佐剂组(P<0.05),其中免疫组2的哈维氏弧菌、鳗弧菌、迟钝爱德华氏菌、大菱鲆弧菌和溶藻胶弧菌的抗体效价分别为27.25、26.75、28.5、28.75、26.25,免疫组1分别为26、25.75、26.75、27.5、25。用上述5种细菌分别进行人工攻毒实验,结果表明,免疫组2的免疫保护力依次为50.0%、50.0%、71.4%、62.5%、44.4%;免疫组1的免疫保护力依次为37.5%、30.0%、42.9%、50.0%、33.3%。实验结果证明,五联疫苗对大菱鲆具有免疫作用,而且添加黄芪多糖佐剂组的免疫效果显著好于无佐剂组。     

溶藻弧菌疫苗对牙鲆免疫效果的研究

利用福尔马林灭活法制备了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)疫苗,腹腔注射接种牙鲆(Paralichthys olivaceus),在以牙鲆血清为抗原制备兔抗鱼血清多克隆抗体的基础上,采用ELISA方法检测了接种疫苗后鱼血清中特异性抗体的变化;此外通过攻毒实验测定了疫苗对牙鲆的保护率。ELISA检测结果表明在接种疫苗后第7d抗体效价为1:64,在免疫后第7~8周达到最高抗体效价1:2048;攻毒实验结果显示受免鱼对溶藻弧菌的免疫保护率为73.3%,且溶藻弧菌疫苗对鳗弧菌(Vibrio anguillarium)、副溶血弧菌(Vibrio prarhaemolyticus)也具有一定的免疫保护性,其免疫保护率分别为56.25%、64.71%。     

核糖体蛋白S5(RPS5)基因研究进展

核糖体蛋白S5(ribosomal protein S5,RPS5)是真核生物核糖体的重要组成部分,目前对RPS5功能的研究主要侧重于以下几方面:RPS5的晶体结构及其在核糖体结构上的分布特点;RPS5与蛋白质的翻译;RPS5具有DNA连接蛋白Ⅱ的功能;RPS5具有转录延伸因子3(EF-3)的功能;RPS5与物种进化;RPS5突变体的研究。本文对RPS5基因的研究概况及功能进行综述。     

迟钝爱德华氏菌外膜蛋白基因工程表达产物的免疫原性

构建迟钝爱德华氏菌外膜蛋白重组表达载体后,表达纯化获得分子质量约53ku的外膜蛋白。将100尾日本鳗鲡均分为2组,分别腹腔注射牛血清白蛋白(BSA,0.5mg/mL)和迟钝爱德华氏菌外膜蛋白(Omp,0.5mg/mL)0.2mL/尾。于免疫后第7、14和28天采集鳗鲡血液、粘液、肝脏和肾脏,测定各时间点的补体活性、溶菌酶活性、全血细胞转化水平和血清抗体效价。结果发现,外膜蛋白组鳗鲡的补体活性于免疫后第7天极显著高于对照组;其抗体效价于第14天和第28天显著或极显著高于对照组。免疫后第28天以迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和创伤弧菌(1.0×107 cfu)腹腔注射感染鳗鲡。结果发现,外膜蛋白组鳗鲡对迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和创伤弧菌的相对免疫保护率分别为71.4%、50.0%和12.5%。表明鳗鲡注射迟钝爱德华氏菌基因工程表达外膜后显著提高了其对迟钝爱德华氏菌感染的抵抗力,对嗜水气单胞菌的感染也有明显的交叉保护效果,但对创伤弧菌的交叉保护效果较弱。     

鳗弧菌三价灭活疫苗的长期免疫保护效果

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是一种能感染多种鱼类的条件致病菌,引起高致死率出血性败血病,流行于我国海水养殖环境,造成极大的经济损失。为此,本研究以鳗弧菌O1、O2和O3血清型菌株为抗原,制备了鳗弧菌三价灭活疫苗,以腹腔注射途径对健康大菱鲆(Scophthalmus maximus)(80.2±4.7)g进行一次免疫,在一次免疫后60 d以同等剂量和途径进行二次免疫。对一免组进行150 d的观测,结果显示,大菱鲆血清的3种抗原的特异抗体水平在免疫后14 d显著升高(P0.05),免疫后28 d达到最大值1∶320,免疫后28~150 d稳定在1∶106.7~1∶320,在免疫后14~150 d血清抗体效价均显著高于对照组(P0.05);相对免疫保护率(RPS)的检测结果显示,免疫后7 d大菱鲆抵抗鳗弧菌3种血清型病原感染的RPS分别为43.8%、38.9%和16.7%,免疫后28 d RPS均达最大值100%,免疫后28~120 d的RPS值保持在70%~100%,免疫后150 d的RPS值为35%~100%。对二免大菱鲆观测了90 d,二免后3~60 d的大菱鲆血清抗体水平显著高于同期一免的大菱鲆(P0.05),二免后60~90 d抗体水平下降,与同期一免鱼无显著差异(P0.05);二免大菱鲆的RPS值均高于70%,高于同期一免大菱鲆。上述结果显示,以鳗弧菌三价灭活疫苗一次免疫大菱鲆,抗体持续期不少于150 d,有效免疫保护期(RPS70%)不少于120 d;二次免疫大菱鲆,抗体持续期和有效免疫保护期(RPS70%)均不少于150 d。空白组最终体重略高于免疫组,但2组的特定生长率(SGR)无明显差异,说明三价疫苗对大菱鲆生长没有影响。     

沙棘叶总黄酮对1～21日龄爱拔益加肉鸡蛋白质利用率的影响

本试验旨在研究添加不同剂量的沙棘叶总黄酮对1～21日龄爱拔益加(AA)肉鸡蛋白质利用率的影响.选取240只1日龄AA肉鸡,单因素随机分为4组.对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加0.025%、0.050%和0.100%沙棘叶总黄酮的饲粮.饲养试验时间为21d.结果表明,与对照组相比,0.025%和0.050%沙棘叶总黄酮组蛋白质表观消化率分别显著提高了19.43%(P<0.05)和19.29%(P<0.05).0.025%和0.100%沙棘叶总黄酮组与对照组相比,胸肌率分别显著提高了26.95%和17.42%(P<0.05),腿肌率分别显著提高了37.20%和21.28%(P<0.05).结果提示,沙棘叶总黄酮可以促进1～21日龄AA肉鸡蛋白质表观消化率和蛋白质的沉积.十二指肠组织蛋白检测结果显示,沙棘叶总黄酮可能通过上调核糖体蛋白12(RPS12)、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和角蛋白10(CK10)的表达,促进肉鸡幼雏对蛋白质的消化吸收,从而提高了1～21日龄肉鸡对饲料中蛋白质的利用率.由此说明添加沙棘叶总黄酮可以通过上调十二指肠RPS12、I-FABP和CK10的表达提高1～21日龄AA肉鸡生长前期蛋白质表观消化率,促进胸肌和腿肌的生长发育.