牡蛎疱疹病毒结构蛋白真核表达系统构建及多聚化特性研究

牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡,成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用HEK293t细胞,构建OsHV-1主要核衣壳蛋白（ORF104和ORF33）的真核表达系统,并对ORF104和ORF33潜在相互作用进行检测。实验首先通过特异性PCR扩增技术得到orf 104和orf 33的基因序列,根据其编码蛋白的理化性质、跨膜区与三维结构等生物信息学分析结果,选择pCDNA3.1构建两种基因的重组表达质粒。重组质粒经大肠杆菌扩增、提取后,利用转染试剂Lipo8000?将pCDNA3.1-orf 104与pCDNA3.1-orf 33分别单独或共转染至人胚肾细胞(HEK293t)。然后,将转染后的细胞培养18 h后裂解收集蛋白。最后利用蛋白免疫印迹检测(Western Blot,WB)与负染电镜检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示,实验成功构建了OsHV-1衣壳蛋白ORF104和ORF33的重组表达质粒载体,通过真核细胞表达得到大小约为135与35 ku的目的蛋白。研究表明,表达质粒可在真核表达系统中实现蛋白单独转染与共转染,共转染蛋白间可能存在相互作用的趋势并形成多聚体,其中,ORF33自身即可形成分子量不同的多聚体。本研究首次利用真核表达系统开展OsHV-1关键结构蛋白的表达,为进一步开展该病毒结构蛋白功能与互作,以及病毒入侵机制研究奠定基础。     

GPV感染扰动雏鹅系统互作网络的研究

为了解GPV(Goose parvovirus)侵染的病理学致病机理,探究GPV感染扰动雏鹅动态代谢网络平衡系统,对GPV感染雏鹅血液中的蛋白质、代谢酶活性及其同工酶结构和功能等进行生化分析。结果显示,GPV感染雏鹅的血液中,蛋白酶、Est、POD、SOD、ALP、ADH、Amy、CAT、GPT、LDH活性分别提高约41%/63%,30%/53%,50%/14%,36%/73%,156%/142%,1005%/22%,36%/26%,13%/51%,60%/244%,289%/139%;Ig G、IgM含量分别降低约50%,40%;蛋白质含量增长约50%,GPV感染雏鹅的血浆Est、SOD、ADH、Amy同工酶分别新增2,2,1,3条酶谱带,Est同工酶消减2条慢区谱带;血细胞Est、POD、SOD、Amy同工酶分别新增1,2,1,2条酶谱带;血液中CAT、LDH、GPT、ALP同工酶分别出现7,1,3,3条酶带变异,血细胞CAT、ADH同工酶分别缺少快区和慢、快区酶带,ALP同工酶在血浆与血细胞方面分别缺少慢区和快区酶带。同时显示重链59 kDa蛋白带是CK组IgM/G的共同特征,感染组Ig G还缺失258,36 kDa蛋白带;血浆与血细胞分别新增加131,86,43,33 kDa和144,104,58,53 kDa蛋白。血浆消减1条慢区酶蛋白,血细胞增加2条慢区酶蛋白。提示GPV感染应激与寄主蛋白质、蛋白酶及同工酶基因表达的协同作用,通过独特的扰动宿主动态平衡代谢网络直接或间接调控细胞易感性能。     

Corn proteins solubility changes during extrusion and traditional nixtamalization for tortilla processing: A study using size exclusion chromatography

Changes in the solubility of corn proteins occurring during traditional nixtamalization and extrusion processes used to produce tortillas were studied using size exclusion chromatography, SDS-PAGE and the Dumas method to measure 50% propanol-insoluble protein. Size exclusion chromatography (HPL-SEC) studies furthered the understanding of protein solubility changes during both processes. Extrusion caused more protein aggregation in tortilla intermediate and final products than traditional nixtamalization. Mixing during extrusion and in the intermediate step of masa production in the traditional nixtamalization process was critical in reducing protein solubility. Baking tortillas also considerably reduced the protein solubility for the traditional nixtamalization process. Baking produced aggregation that could not be disrupted with a reducing agent.     

不同种污泥胞外聚合物的提取方法与组成特征

针对废水生物处理系统中各类污泥的功能与结构特点,比较了常用胞外聚合物(EPS)提取方法的效能优劣,并从反应器溶解氧条件、微生物营养类型和污泥空间形态等方面对不同种污泥的EPS组成特征进行了分析,重点强调了EPS组分在培养全自养脱氮颗粒污泥等特殊微生物聚集体中的重要作用。     

人居和荒漠草原生态条件下小花棘豆叶片蛋白质表达谱分析

利用双向电泳技术,对比两种生境下(A地为公园,B地为荒漠草原)小花棘豆的蛋白质差异表达谱,选取其中的差异蛋白点进行MADLI-TOF-MS鉴定,获得的PMF数据经Mascot软件在NCBI NR数据库上检索分析后确认蛋白种类,结果表明:相对A地,B地小花棘豆光合作用相关调控酶类表达下调,而光合作用结构蛋白如叶绿素球蛋白表达上调;B地小花棘豆光合速率下降,可能是受光合调控酶表达下调的影响;B地ATP合成相关蛋白的表达上调,说明在干旱、高盐、氮磷含量偏低的环境下生长可能需要消耗更多能量.另外,B地小花棘豆中发现一些与胁迫相关蛋白出现上调或者特异性表达,这些蛋白的表达可能跟小花棘豆能够适应逆境有着密切的关系.     

Wheat (Triticum aestivum L.) grain proteome response to elevated [CO2] varies between genotypes

The impact of rising carbon dioxide concentration ([CO₂]) in the atmosphere on wheat grain protein concentration and proteome was investigated in this study. Wheat genotypes (H45, SB003, SB062 and Yitpi) were grown in the Australian Grains Free-Air CO₂ Enrichment (AGFACE) facility, Horsham, Victoria, Australia under ambient [CO₂] (a[CO₂], 391 μmol mol⁻¹) and elevated [CO₂] (e[CO₂], 550 ± 20 μmol mol⁻¹). Grain yield and grain protein concentration were measured. Global grain proteome comparison was carried out using stable isotope dimethyl labelling followed by liquid chromatography - mass spectrometry (LC-MS/MS). Grain yield was significantly increased at e[CO₂], whereas protein concentration was significantly decreased and responses varied between genotypes. Proteome-wide analysis revealed that protein composition was also altered under e[CO₂]. Grain protein concentration and composition of SB003 was very responsive to e[CO₂]. Mainly storage proteins were decreased at e[CO₂] and the responses varied between genotypes. These findings suggest that e[CO₂] may have a major impact on grain protein quality and thus bread quality and human and animal nutrition. Further, these findings suggest that [CO₂] insensitive cultivars can be identified for grain quality improvement under changing climate.     

鸡减蛋综合症（EDS_（76））病毒的研究Ⅱ．GC~2株蛋白性质的研究

ＧＣ２株提纯后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析得到１３条多肽，分子量范围从１１２０００～１８０００道尔顿，ＧＣ２株抗原与标准株比较为同一抗原性．     

妊娠青山羊蛋白质需要的研究

用前列腺素处理28只5.5月龄的青山羊母羊,使之同期发情,自然交配后分为自由和限制采食两组,进行饲养试验、屠宰试验、内源氮测定试验、消化代谢试验,以研究妊娠青山羊的蛋白质需要。试验结果表明,青山羊妊娠期前三个月,内源性尿氮(Endogenous urine nitrogen,EUN)为0.105 gN/kgW~(0.75)/d,代谢性粪氮(Metabolic fecal nitrogen,MFN)为0.159 gN/kgW~(0.75)/d;妊娠期最后两个月,EUN 为0.460 gN/kgW~(0.75)/d,MFN 为0.055 gN/kgW~(0.75)/d。胚胎、胎盘和胎水中蛋白质沉积量及沉积速度和胚胎、妊娠物增重及增重速度均符合指数曲线。妊娠青山羊的蛋白质需要 Y=0.63W~(0.75)+0.58X_1+0.72X_2,其中:Y—妊娠青山羊粗蛋白每日需要量(g):W~(0.75)—代谢体重(kg);X_1—母体本身增重(g);X_2—妊娠物增重(g)。     

体外消化过程中蛋白质品质与寡肽释放的研究

应用胃蛋白酶 胰酶两步体外消化法测定 6种豆饼 (粕 )、3种鱼粉、菜籽饼、玉米蛋白粉、肉粉、蚕蛹、酪蛋白等 1 4种蛋白质饲料的寡肽释放量 ,并研究了它们与蛋白质质量和氨基酸组成间的关系。结果表明 :酪蛋白、鱼粉、豆饼 (粕 )的寡肽释放量最高 ,贮藏的鱼粉及加热、贮藏过的豆粕、饼寡肽释放量降低 ;寡肽释放量与饲料赖氨酸、有效赖氨酸、异亮氨酸呈正相关 (r =0 .86～ 0 .93,P <0 .0 1 )。鱼粉、豆饼、蚕蛹、菜子饼寡肽平均链长在 5～ 6之间 ,新鲜豆粕、酪蛋白、玉米蛋白粉链长为 7.5、8.4、1 1 .4 ,大分子肽含量较高 ;植物饲料的寡肽中非必需氨基酸 (NEAA)占总氨基酸的 5 0 %～ 70 % ,必需氨基酸 (EAA)相对较低 ;动物性饲料NEAA比例仅略高于EAA。所有饲料释放的FAA不到总氨基酸的 1 % ,其中主要是EAA ,饲料中含有效碱性氨基酸的真蛋白与饲料总真蛋白的比值 (CBBG/TP)与寡肽和FAA的释放量呈显著线性相关 (r=0 .92和 0 .87) ,寡肽释放量和CBBG/TP均较好地反映了蛋白质质量。     

改良羽毛蛋白营养价值的初步研究

采用仲恺农业技术学院鸡场饲养的来航鸡（Leghom）羽毛制成改良羽毛蛋白粉进行动物营养代谢实验，结果显示经过改良的羽毛蛋白的表观消化率达到90％左右．进食改良羽毛蛋白质饲料大鼠组与进食酪蛋白饲料大鼠组的蛋白质功效比值和饲料利用率无显著差异；而与进食加糖基础饲料大鼠组比较，上述两项指标差异非常显著．解剖观察进食改良羽毛蛋白饲料的大鼠内脏未见中毒现象，初步认为经过改良的羽毛蛋白质是一种质量优良和安全的蛋白质．