猪瘟与猪圆环病毒2型混合感染检测方法的建立与初步应用

根据GenBank上发表的猪瘟（classical swine fever virus,CSFV）和猪圆环病毒2型（porcine circovirus type2,PCV2）的核苷酸序列,应用NCBI/Primer-Blast设计合成分别针对CSFV和PCV2的1对特异性引物,建立了分别用于检测CSFV和PCV2的RT-PCR和PCR方法,并对2008年4月～8月采自昆明8个可疑发病猪场的19份病料进行了CSFV和PCV2检测。结果显示,来自3个猪场的4份检测样品为CSFV阳性,猪场的CSFV阳性率为21.05%;来自2个猪场的2份检测样品为PCV2阳性,猪场的PCV2阳性率为10.53%。CSFV和PCV2混合感染率为10.53%。表明所建立的CSFV和PCV2混合感染检测方法具有特异性,可用于CSFV和PCV2混合感染的辅助诊断和流行病学调查,同时也为CSFV和PCV2混合感染的防制提供科学的依据。     

检测猪圆环病毒2型抗体SPA胶体金免疫层析方法的建立

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上,将猪圆环病毒2型（PCV-2） Cap蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测PCV-2抗体的胶体金免疫层析方法。检测阳性样品时,在检测线和质控线处均出现红色条带;检测阴性样品时,仅在质控线处出现红色条带。该方法与ELISA相比,其灵敏度为89.19%,特异性为100%,并且与PCV-1、猪瘟病毒（HCV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）阳性血清无交叉反应。     

猪增生性肠炎检测技术研究进展

综述了猪增生性肠炎在免疫组化、细胞培养、血清学、分子生物学等检测技术方面的研究进展.     

The Recombinant Nonstructural Polyprotein NS1 of Porcine Parvovirus (PPV) as Diagnostic Antigen in ELISA to Differentiate Infected from Vaccinated Pigs

To differentiate pigs infected with porcine parvovirus (PPV) from those vaccinated with inactivated whole-virus vaccine, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on detection of a nonstructural polyprotein 1 (NS1) was developed. A threshold of 0.23 optical density units was established and the assayhad high specificity (100), sensitivity (88), accuracy (90) and positive predictive value (100) using haemagglutination inhibition as the standard method. A reproducibility test revealed that the coefficients of variation of sera within-plates and between-run were less than 10%. The assayshowed no cross-reactivitywith antibodies to porcine reproductive respiratorysyndrome virus, pseudorabies virus, foot and mouth disease virus, Actinobacillus pleuropneumoniae, Toxoplasma or Chlamydia. Sera obtained from pigs infected with PPV reacted with recombinant NS1 protein in the ELISA. Sera from pigs vaccinated with inactivated whole virus did not recognize this protein in the ELISA. In contrast, antibodies against PPV whole virus were present in both PPV-infected and vaccinated animals. Serum conversion against NS1 was first detected 10 days after infection and NS1-specific antibodies were detectable up to half a year post infection. In conclusion, the PPV-NS1 ELISA can differentiate PPV-infected versus inactivated PPV-vaccinated pigs and could be applied in disease diagnosis and surveillance.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株HUB2株全基因组序列分析

从湖北省暴发猪"高热病"的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),并命名为HUB2株.根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RTPCR扩增,获得PRRSV HUB2株全基因组cDNA序列.测序结果表明PRRSV HUB2株基因组全长15 320 bp(不包括PolyA尾).分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.6%和50.3%.说明HUB2属于美洲型毒株.与VR-2332相比,HUB2株非结构蛋白(Nsp2)存在2处不连续的缺失(共缺失30个氨基酸),其缺失位点位于推定氨基酸序列的第481位和532～560位.此次新出现的强毒株全基因组序列特性的揭示为科学防治猪高致病性蓝耳病奠定了理论基础.     

含CpG序列PRRSV ORF5基因真核表达质粒在小鼠的细胞免疫应答

为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5.经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白.免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平.结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白-重组犬1型腺病毒构建及在猪体内免疫特性

本试验根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组GP5蛋白的免疫原性,将PRRSV河北分离株GP5基因的表达盒克隆到犬1型腺病毒的感染性基因组的复制非必需区内,转染MDCK细胞,获得了重组病毒,免疫新生仔猪,分别在免疫后0～12周采集血清,通过ELISA检测证明,猪体同时产生了针对犬1型腺病毒和PRRSVGP5的抗体.说明GP5-重组犬1型腺病毒具有作为蓝耳病疫苗的潜力.     

猪细小病毒NS1基因低温诱导表达及间接ELISA方法的建立

利用PCR技术从猪细小病毒的DNA模板中扩增了NS1的基因片段,将PCR产物克隆至pET32c载体,将构建好的重组质粒pET32c-NS1,转入表达宿主茵BL21中,利用低温诱导表达的方法,避免了包涵体的形成.West-ern-blot结果显示,表达产物有良好的生物活性.纯化后的重组蛋白作为抗原,包被酶标板,建立了检测猪细小病毒特异性抗体的间接ELISA方法.抗原最佳包被质量浓度为2.5 mg/L、血清最佳稀释度为1∶200.表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂用于检测PPV,且能很好的区别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪.     

黄河三角洲地区引种紫花苜蓿的灰色关联度分析与综合评价

以21个紫花苜蓿品种为研究对象,测定并分析不同品种株高、干草产量等生产性能指标和粗蛋白、粗脂肪、酸性洗涤纤维等营养成分指标,采用灰色系统关联度理论进行综合评价。结果表明,苜蓿各品种在第1茬时株高和产量呈极显著差异(p<0.01),苜蓿年产量最高的是中苜5号,其次为中苜3号、耐盐之星、WL 414、赛迪7和3010;从生产性能和营养价值综合考虑,中苜5号、中苜3号、耐盐之星、3010、中苜4号表现突出,为当地建植苜蓿草地的优选品种。     

基于分数阶灰色模型的生鲜电商产品销量预测研究

新型冠状病毒的爆发,使供应链受到了不良影响,蔬菜水果等生鲜商品线下批发零售受阻,生鲜电商却迎来了新一轮的发展.从生鲜消费者角度出发,通过构建分数阶灰色预测模型对生鲜产品的需求量进行预测,并引入甘福园生鲜电商销售数据进行验证,得到柠檬、车厘子、苹果及火龙果4种水果拟合值的平均绝对百分比误差(MAPE)分别为8.61％、7.15％、7.16％、6.81％,其值均小于灰色预测模型和一次指数平滑法,且由该模型得到预测值的平均绝对百分比误差均小于10％,结果表明该模型适用于生鲜电商产品销量预测.