AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统对Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VPl基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白功能及建立Asia Ⅰ型FMDV血清学诊断方法奠定基础.采用PCR方法从pGEM-T-Easy-Asia Ⅰ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BaeHTA-VPl再转入DH10Bae感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Baemid-VPl,然后转染Sf9昆虫细胞.PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Baemid-VP1,SDS-PAGE和West-ern-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白.将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出Asia Ⅰ型口蹄疫病毒阳性血清.Asia Ⅰ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础.     

提高河蟹育苗中Z1变Z2阶段成活率的技术措施

江苏省赣榆县在今年的河蟹育苗过程中，多数单位在Ｚ_1变Z_2阶段特别困难。许多育苗场Z_1变Z_2过程中几乎全军覆没；有的Ｚ_1变Z_2则需６～７天，变态后的Ｚ_2体质很差，以致育出的蟹苗成活率极低。据笔者观察，这一情况并非Ｚ_1期间投好饵，用药控制就能解决问题的。笔者在育苗过程中经过多次实践，总结出一套提高Ｚ_1变Z_2成活率的技术措施，现介绍如下： 一、严格挑选即将挂笼的抱卵蟹 １．排幼亲蟹的选择：挂笼的抱卵蟹需经严格挑选，选择胚胎颜色为灰色的，而呈红色的胚胎为死胚胎，应舍弃。附肢残缺太多的抱卵亲蟹易流产不可选用。…     

EM原露在无公害水产品养殖方面的成功范例

EM原露是由８０多种有益微生物组成的活菌制剂，在水产养殖上既可用作水质净化、改良剂，保持水质稳定，又可作为饵料拌合剂，增强养殖品种的免疫力，促进养殖品种的健康生长，提高产量和效益。另一方面，使用EM原露还可有效减少有害生态的药物的使用量，减少有害药物在水产品中的残留，实施生态养殖，生产无公害水产品。本文仅介绍EM原露在河蟹幼蟹培育和对虾养殖方面的两个范例。一、河蟹幼蟹培育试验１．条件与方法试验点选择在赣榆县青口镇幼蟹培育场。（１）培育池２个，规格４０m×８m，池深１m，上覆盖塑料大棚，配备充氧机、升温…     

猪繁殖与呼吸综合征诊断技术研究进展

1991年，荷兰中央兽医研究所Wensvoort博士用原代猪肺泡巨噬细胞（PAM）首次分离到猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），并命名为Lelystad病毒（PRRSV欧洲型代表株）。次年，美国科学家Collins和Benfield等用CL2621细胞也分离到一株PRRSV并命名为VR-2332（PRRSV美洲型代表株）。PRRSV属于尼多病毒目（Nidovirales）、动脉炎病毒科（Arteriviridae）、动脉炎病毒属（Arterivims）成员。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失.为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份.在各省不同时期样品中均有阳性样品检出.通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸.     

AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFastBacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP 1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。     

猪伪狂犬病病毒XIN-W株gD和gE基因的克隆及序列分析

根据已发表的PRVgD、gE基因序列 ,设计合成了两对引物 ,对猪伪狂犬病病毒XIN W株相关的毒力基因gD、gE序列进行测定和分析。经PCR扩增分别得到了全长为 12 0 9bp,1 743bp的gD、gE全基因序列 ,将它们克隆到pGEM T Easy载体中 ,并转化JM1 0 9,挑取阳性菌落的质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,与其他参考毒株的gD、gE基因进行比较。结果表明 ,XIN W株与其它毒株相比 ,gD、gE基因核苷酸序列的同源性分别为 97.9%～99.3 % ,98.0 %～ 98.7% ;氨基酸序列的同源性分别为 97.0 %～ 99.3 % ,97.1 %～ 98.1 %。不同的PRV毒株间gD、gE基因在核苷酸水平和氨基酸水平高度保守。遗传进化树显示 ,XIN W株和国内其它毒株起源相同 ,属同一进化分支     

对虾

产自北方海域的对虾,过去是以对为单位出售的,久而久之,民间就称它为对虾。南方海域还有长毛对虾,墨吉对虾,班节对虾等6—7个品种。墨吉对虾和班节对虾,只适于温暖水域。班节对虾的个体最大。对虾肉味鲜美,色泽也美,营养价值很高。据分析:虾肉含蛋白质20.6％,脂肪仅0.7％,并含有多种维生素及人体必须的微量元素,是高级滋补食品。对手足搐搦、阳萎、乳疮、皮肤溃痒、神经衰弱等都有疗效。一般对虾为一年生,少数雌虾生命周期有     

河蟹育苗中Z1变态难的原因分析及应对措施

赣榆县在今年的河蟹育苗过程中，多数单位Ｚ变Ｚ２特别困难，许多育苗场在Ｚ１变Ｚ２过程中几乎全军覆没；有的Ｚ１变Ｚ２则需６～７天，变态后的Ｚ体质很差，以致育出的蟹苗成活率极低。据笔者观察，这一情况并非Ｚ１期间投好饵、用药控制就能解决问题的。笔者在育苗过程中经过多次实践，总结出一种促进Ｚ１变Ｚ２较成功的方法，现介绍如下。一、条件与方法一严格挑选即将挂笼的抱卵蟹１．挂笼的抱卵蟹需经严格挑选，选择胚胎颜色为灰白色的，因呈红色的胚胎为死胚胎，应舍弃。附肢残缺太多的抱卵亲蟹易流产不可选用。购买别人提好温的…     

猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株HUB2株全基因组序列分析

从湖北省暴发猪"高热病"的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),并命名为HUB2株.根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RTPCR扩增,获得PRRSV HUB2株全基因组cDNA序列.测序结果表明PRRSV HUB2株基因组全长15 320 bp(不包括PolyA尾).分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.6%和50.3%.说明HUB2属于美洲型毒株.与VR-2332相比,HUB2株非结构蛋白(Nsp2)存在2处不连续的缺失(共缺失30个氨基酸),其缺失位点位于推定氨基酸序列的第481位和532～560位.此次新出现的强毒株全基因组序列特性的揭示为科学防治猪高致病性蓝耳病奠定了理论基础.