全文获取类型
收费全文 | 7382篇 |
免费 | 442篇 |
国内免费 | 698篇 |
专业分类
林业 | 215篇 |
农学 | 594篇 |
基础科学 | 142篇 |
474篇 | |
综合类 | 2514篇 |
农作物 | 372篇 |
水产渔业 | 555篇 |
畜牧兽医 | 2582篇 |
园艺 | 217篇 |
植物保护 | 857篇 |
出版年
2024年 | 17篇 |
2023年 | 85篇 |
2022年 | 152篇 |
2021年 | 224篇 |
2020年 | 250篇 |
2019年 | 262篇 |
2018年 | 169篇 |
2017年 | 300篇 |
2016年 | 394篇 |
2015年 | 318篇 |
2014年 | 441篇 |
2013年 | 478篇 |
2012年 | 646篇 |
2011年 | 678篇 |
2010年 | 650篇 |
2009年 | 525篇 |
2008年 | 410篇 |
2007年 | 499篇 |
2006年 | 382篇 |
2005年 | 319篇 |
2004年 | 234篇 |
2003年 | 220篇 |
2002年 | 188篇 |
2001年 | 140篇 |
2000年 | 107篇 |
1999年 | 94篇 |
1998年 | 58篇 |
1997年 | 61篇 |
1996年 | 45篇 |
1995年 | 30篇 |
1994年 | 35篇 |
1993年 | 22篇 |
1992年 | 16篇 |
1991年 | 20篇 |
1990年 | 12篇 |
1989年 | 9篇 |
1988年 | 11篇 |
1987年 | 5篇 |
1986年 | 3篇 |
1985年 | 1篇 |
1984年 | 1篇 |
1982年 | 1篇 |
1981年 | 2篇 |
1980年 | 2篇 |
1978年 | 1篇 |
1956年 | 3篇 |
1955年 | 2篇 |
排序方式: 共有8522条查询结果,搜索用时 15 毫秒
21.
22.
猪肺炎支原体黏附因子基因R1R2区的克隆及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
根据GenBank登录的猪肺炎支原体232株P97基因和J株黏附因子基因设计了1对引物,以我国猪肺炎支原体Z株(强毒株)基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增了该株黏附因子基因的部分序列。经序列分析后,重新设计了1对带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物,并经引物的定点突变,PCR扩增了Z株黏附因子的R1R2区。扩增产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32(a) 中。该重组质粒经酶切鉴定后,将其具有正确阅读框架的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,37℃下经IPTG诱导表达,得到相对分子质量约29000的融合蛋白,表达量约为11%。 相似文献
23.
小鹅瘟PCR诊断方法的建立和初步应用 总被引:11,自引:0,他引:11
根据发表的鹅细小病毒B株VP3基因序列 ,设计合成了 1对寡聚核苷酸引物。以国内分离的小鹅瘟病毒为摸板 ,筛选了 (PCR)最佳反应条件 ,并进行了敏感性、特异性和初步应用试验。结果表明 ,在 4 0 μL体积中 ,PCR最佳系统组成为 2uTaq酶、0 5mol/LdNTP和 2 0 pmol引物 ;最佳反应参数为 96℃变性 4 0s ,5 4℃退火 1min ,72℃延伸 1min ,30个循环。本方法可检出 2 5× 10 -1 5EID50 小鹅瘟病毒 ,并且仅能从小鹅瘟病毒的鹅胚培养物中扩增出与设计值大小相同的 375bp核苷酸片断 ,对照病毒扩增结果为阴性。通过对 6份临床病料的检查 ,2份呈阳性 ,其中 1份来自有典型小鹅瘟症状的雏鹅 ,1份来自无典型小鹅瘟症状的雏鹅。由此说明 ,本试验所建立的诊断小鹅瘟的PCR方法具有潜在的临床应用价值 相似文献
24.
选取水泡性口炎病毒 N基因序列 ,设计 1对引物 ,建立检测水泡性口炎病毒的 RT- PCR方法。对VSV各毒株进行检测 ,结果均为阳性 ,而对反刍动物病毒性疾病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性。结果表明所建立的 RT- PCR技术可用于水泡性口炎的诊断和流行病学调查 相似文献
25.
单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌的比较 总被引:18,自引:1,他引:17
本文对单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌进行了比较。将沙门氏菌与大肠杆菌以不同比例混合后 ,分别用ELISA和PCR法检测 ,在 1∶1 0 0的比例时 ,用这 2种方法均能检测出阳性样品 ;在 1∶1 0 0 0的比例时 ,用ELISA法检测为阴性 ,而用PCR法则能检测出。检测鲜牛奶、龙虾、虾仁、熟食制品等样品 ,2种方法的符合率达 97 6 %。对冻虾仁、人粪便样品的前增菌、选择性增菌、后增菌过程进行同步检测 ,在样品的前增菌液 ,直接ELISA法检测的OD值小于 0 5 ,而PCR法扩增能出现特异条带 ,经国标方法验证为阳性 ,证实PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,而在选择性增菌液和M 肉汤后增菌液中 ,2种方法均能检出阳性样品。 相似文献
26.
JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR的应用研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用 JEV、PRRSV二联 PCR,PPV、PRV二联 PCR以及这 4种病毒 4联 PCR对来自内蒙、广州、广西、天津、北京、吉林病料进行检测 ,共检了 1 4 6份病料。其中 PRRSV阳性 7份 ,PPV阳性 1 2份 ,PRV阳性 2 1份 ,PRV和 PPV混合感染 4份。并对 5份人工接种 JEV小鼠病料检测 ,其中 4份为阳性。随后对部分阳性 PCR扩增产物进行点杂交和核苷酸测序鉴定 ,证实了 PCR扩增准确性。对内蒙 PRRSV阳性扩增带测序结果显示 ,我国流行 PRRSV为美洲型 ,在扩增片段的核苷酸序列上有 3个碱基差异 相似文献
27.
28.
用奶牛乳房炎多联苗 (B)免疫家兔 ,14 d血清中金黄色葡萄球菌抗体效价可达 1∶ 8,2 8d抗体水平明显升高 ,可达 1∶ 32 ,注苗后 35 d攻毒 ,攻毒后 2 d保护率为 93.3% (14 /15 ) ,自然保护率为 2 0 % (1/5 ) ,10 d保护率为 6 6 .6 % (10 /15 ) ,自然保护率为 2 0 % (1/5 ) ;用多联苗 (B)臀部肌肉注射免疫泌乳牛 ,试验期间 4个月内 ,3ml剂量组临床型乳房炎月平均发病率为 11.0 9% ,其对照组为 2 0 .19% ,发病率降低 4 5 .2 9% ,差异极显著 (P<0 .0 1) ;5 m l剂量组月平均发病率为 13.0 1% ,其对照组为 31.36 % ,发病率降低 5 8.5 1% ,差异极显著 (P<0 .0 1) ;3ml剂量组与 5 m l剂量组之间发病率无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;注苗后泌乳牛血清抗体水平可持续 4个月 ,且 30 d时效价水平最高。 相似文献
29.
本文应用聚合酶链反应(PCR)技术从构建的新城疫病毒(NDV)cDNA文库中扩增含编码F糖蛋白前体──Fo酶切位点序列的359bp的F蛋白基因cDNA片段。将此359bpcDNA片段经光敏生物素标记后,即成NDV-cDNA探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出NDV强毒株和疫苗毒株的基因组RNA,而不与IBDv-dsRNA、AIBv-ssRNA、EDS76-dsDNA、MDV-dsDNA,FPV-dsRNA及AILV-dsDNA发生交叉杂交反应。试验结果表明:尽管该探钎含有编码Fo蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把NDV的强、弱毒株区分开。这说明NDV强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对NDV来说具有特异性,这就为NDV的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。 相似文献
30.
Oded Cohen Ozgur Batuman Yoni Moskowits Alexander Rozov Elisha Gootwine Munir Mawassi Moshe Bar-Joseph 《Phytoparasitica》2005,33(2):141-148
Mechanical inoculations with contaminating tools and propagation of infected budwood were considered the main causes for the
omnipresence of multiple viroid species among citrus and other Middle Eastern and Mediterranean fruit trees and grapevines.
However, neither means could explain viroid infections of wild trees — scattered on terrains inaccessible to humans — nor
the finding of similar viroids among graft-incompatible plants. Northern hybridization of RNA extracts made of scrapings from
the surfaces of goat (Capra hircus) horns that were rubbed against etrog (Citrus medica) stems infected with a citrus viroids complex, revealed accumulation of considerable amounts ofCitrus exocortis viroids (CEVd) andHop stunt viroids (HSVd). Experimental transmission of both CEVd and HSVd was obtained by rubbing healthy citrus plants with goat horns that
had been rubbed 24 h earlier on infected etrog stems. These results implicate goats as possible vectors of viroids. Transmissionvia goats could have facilitated the long-range spread of viroids among cultivated and wild plants andvice versa and also among graft-incompatible plants. 相似文献