传染性支气管炎病毒对鸡免疫反应及重组禽β-防御素11和12抗病毒作用的研究

【目的】探究呼吸型传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）对蛋鸡免疫反应的影响及重组禽β-防御素（avian β-defensins,AvBDs）的抗病毒作用。【方法】试验将70只7日龄SPF白来航鸡随机分为2组,每组35只。攻毒组通过滴鼻点眼途径接种呼吸型IBV强毒（CK/CH/LSD/05I）,对照组以相同途径接种等剂量灭菌PBS。定时观察临床症状14 d并记录,在攻毒后12 h、36 h、3 d、7 d和14 d 2组各随机选取5只鸡心脏采血处死,检测血清抗体水平并收集部分气管和肾脏进行组织病理学检测。采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管,提取RNA,运用实时荧光定量PCR方法检测组织中IBV的病毒载量、Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）及信号转导分子、AvBDs基因表达量变化。将重组AvBD11和AvBD12转染鸡胚肾细胞（chicken embryo kidney,CEK）并在病毒感染细胞后6、12、24、36和48 h收取细胞上清和细胞用于提取RNA,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒载量。【结果】感染呼吸型IBV强毒后,鸡出现轻微呼吸道症状,剖检无明显病理变化。在感染14 d后,鸡血清抗体水平转阳且阳性率为100%。实时荧光定量PCR结果显示,对照组均未检测到病毒,攻毒组仅在感染14 d后的气管中检测到病毒且病毒载量低。与对照组相比,攻毒组脾脏中TLR1、TLR5、AvBD9和AvBD12基因表达量在感染后7 d均显著升高（P<0.05）,攻毒组法氏囊中TLR1、TLR2、TLR3、AvBD5和AvBD9基因表达量及气管中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、NF-κB c-Rel、AvBD5、AvBD9、AvBD11和AvBD13基因表达量在感染14 d后均显著升高（P<0.05）。体外抗病毒结果显示,与转染空载体组相比,转染AvBD11的CEK细胞在感染24和48 h后病毒载量显著下调（P<0.05）,细胞上清的病毒载量在感染48 h后显著下调（P<0.05）;转染AvBD12的CEK细胞在感染12和24 h后病毒载量显著下调（P<0.05）,细胞上清的病毒载量在感染12和48 h后显著下调（P<0.05）,说明重组AvBD11和AvBD12在CEK细胞中具有抗IBV活性。【结论】呼吸型IBV强毒感染机体后增强了相关受体的基因表达和信号转导,上调了AvBDs基因表达,加强了机体免疫反应。重组AvBD11和AvBD12具有抗病毒作用,为无抗饲料的配制及研究提供了新思路。     

芦荟大黄素对衰老蛋鸡卵泡氧化应激的缓解作用

旨在提高衰老蛋鸡的产蛋量,蛋鸡腹腔注射10 mg·kg^-1芦荟大黄素,每天1次,连续7 d,研究天然的芦荟大黄素对580日龄(D580)衰老蛋鸡卵巢重量、卵泡数量和体重变化的影响。本试验建立D-gal诱导的衰老卵泡模型,探究芦荟大黄素对卵泡衰老过程中抗氧化能力、细胞凋亡和增殖的影响,然后检测芦荟大黄素对体外衰老卵泡模型中Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和基因表达水平的影响,以及Nrf2激活剂和阻断剂对芦荟大黄素引起的衰老卵泡氧化应激缓解作用的变化。结果表明,芦荟大黄素处理可提高各级卵泡的数量(P < 0.05),其中,大黄卵泡、小黄卵泡、大白卵泡和小白卵泡数量分别提高32.00%、34.62%、50.00%和54.21%。同时,芦荟大黄素处理使D580蛋鸡血清中雌二醇(E₂)和孕酮(P₄)水平分别提高34.14%和680.00%。芦荟大黄素处理还可提高卵泡中雌激素受体(ERα和ERβ)和肝中甘油三酯(triglyceride, TG)的含量(P < 0.05)。D580蛋鸡肝组织中脂肪酸合成相关基因的转录水平显著下调,但芦荟大黄素处理可提升这些基因的转录水平。此外,芦荟大黄素通过提高卵泡抗氧化酶的活性、Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和基因的表达,缓解自然衰老和D-gal诱导的衰老卵泡的氧化应激。芦荟大黄素处理可促进衰老卵泡细胞增殖,抑制其凋亡。综上表明,芦荟大黄素通过激活Nrf2/HO-1信号通路缓解蛋鸡卵泡的氧化应激,提升蛋鸡衰老过程中卵泡雌激素受体基因和肝卵黄生成相关基因的表达量、血清E₂和P₄水平、卵泡抗氧化能力以及肝TG合成能力,从而缓解卵泡衰老。     

培育品系中鸡青胫性状的遗传规律分析及分子基础初探

深受中国消费者青睐的青胫性状受隐性伴性基因或常染色体显性基因控制。为探明培育品系W系青胫性状的遗传规律及分子基础,本研究首先选取W系黑羽青胫与洛岛红黄羽黄胫的成熟公、母鸡(1♂∶5♀)进行正反交试验,然后对后代中青、黄胫母雏各4只的胫部皮肤进行转录组测序分析。结果表明,正交后代有青胫293只(♂172只,♀121只),黄胫51只(♂20只,♀31只); 反交后代有青胫256只(♂156只,♀100只),黄胫73只(♂29只,♀44只),正或反交后代均有两种胫色,且青胫显著多于黄胫,表明W系青胫性状属于常染色体显性遗传。将有胫色分离的杂交组合后代按胫色、羽色统计,青、黄胫个体分别为黑、黄羽,青、黄胫分离比符合1∶1(121∶117),因此青、黄胫性状或黑、黄羽性状可能受1对等位基因控制。雏鸡的胫部皮肤转录组测序分析表明,差异表达基因显著富集于黑色素生成通路(P < 0.01),Mc1r基因和已知参与黑色素合成的基因如Tyr、Tyrp1在青、黄胫皮肤中的表达量存在极显著差异。另外,一些尚无报道参与胫色形成的基因如Wnt16、Wnt3a、Fzd10等也存在极显著差异。青胫性状的形成除涉及显著富集的黑色素生成通路外,还涉及细胞外基质与受体信号、信号传导、细胞骨架与迁移、细胞黏附、鞘脂与糖脂代谢。综合遗传分析与转录组分析,本研究推定培育品系W系中的青胫性状受Mc1r基因控制,呈常染色体显性遗传,青胫性状的形成涉及多个信号通路,这为青胫性状形成机制的阐明奠定了基础。     

不同类型肉鸡线粒体单倍型与遗传起源研究

旨在探讨鸡线粒体D-loop区单倍型特性以及与生长速度的相关性,并分析其遗传起源。选取不同类型肉鸡品种（配套系）6个,测定其生产性能,并对6个群体共计314个个体线粒体D-loop区全长进行测序,分析其单倍型特性;同时与不同红色原鸡亚种进行聚类,分析其母系起源。结果显示,6个群体D-loop区全序列共检测到37个突变位点,构成40种单倍型,分为A、B、C和E 4个单倍型群,其中AA肉鸡、罗斯308、禽雁麻鸡和裕禾1号肉鸡主要为E单倍型,占比分别为85.92%、50.00%、100.00%和70.21%;园丰麻鸡2号和港丰瑶黑麻鸡E单倍型占比相对较低,分别为15.00%和22.39%,园丰麻鸡2号B单倍型含量最高,占比66.67%,港丰瑶黑麻鸡C单倍型含量最高,占比40.30%。相关性分析显示,初生重与E单倍型比例之间呈极显著正相关（P<0.01）,与A、B和C单倍型比例之间均呈负相关;E单倍型比例与公母平均体重约1.8 kg时日龄之间呈显著负相关（P<0.05）,而与公母平均体重约1.8 kg时饲料转化比之间呈极显著负相关（P<0.01）。聚类分析显示,A、B单倍型所有个体均与原鸡滇南亚种聚为一枝;E单倍型所有个体均与原鸡印度亚种聚为一枝;C单倍型所有个体与原鸡印度亚种、滇南亚种、指名亚种以及印尼亚种交叉聚为一类。结果提示,线粒体单倍型与肉鸡生长速度之间相关显著,E单倍型与肉鸡生长速度具有较强的正相关;我国家鸡群体母系起源丰富,但主要起源于原鸡滇南亚种。     

鸡柔嫩艾美耳球虫特异性抗体EtMIC4-N蛋白BAS-ELISA检测方法的建立

为了检测柔嫩艾美耳球虫感染鸡血清中特异性抗体水平,原核表达纯化EtMIC4-N蛋白,采用免疫印迹法确定其反应原性,再以纯化后的蛋白为包被抗原,以生物素标记的羊抗鸡IgG为二抗,以HRP结合链霉亲和素为酶标抗体,建立了检测柔嫩艾美耳球虫抗体的BAS-ELISA方法。经检测,EtMIC4-N蛋白最佳包被浓度为7μg/mL,最适封闭液为1%BSA,最佳血清稀释度为1:80,二抗稀释度为1:100000,酶标抗体稀释度为1:100000,最适显色时间为15min,组内和组间变异系数均小于10%。通过动物感染试验验证,结果表明建立的BAS-ELISA可以用于检测柔嫩艾美耳球虫特异性抗体的检测,并且具有简便,快速,灵敏,成本低等特点。     

Production of Protein Feed from Chicken Manure with Double Strains of Bacteria by Solid State Fermentation

Protein feed are produced from the mixtures of chicken manure and wheat bran with the aspergillus oryzae and geotrichum candidum by solid state fermentation., at the same time, nitrogen source (urea) was added to the culture in the course of the fermentation.The contents of protein and amino nitrogen in the chicken manure feed reach 20.70% and 19.74% and the amino nitrogen in culture change from 56.89% to 95.36%. The feed is very tasty and can replace partial formula feed. The result of feeding pig showed that the average daily gain is increased by 10.83% compared with the control group.     

Characteristics of systemic infection and host responses in chickens experimentally infected with Salmonella enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum

Salmonella enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) is a host-specific pathogen causing systemic infection in poultry, which leads to significant economic losses due to high mortality. However, little is known about the dynamic process of systemic infection and pathogenic characteristics of S. Gallinarum in chickens. In the present study, we developed an oral infection model that reproduces the pathology of S. Gallinarum and clarified the host immune response of the infected chickens. Chickens at 20 days of age orally inoculated at a dose of 10⁸ colony forming unit (CFU) showed typical clinical signs of fowl typhoid and died between 6 and 10 days post infection. The inoculated S. Gallinarum rapidly disseminated to multple organs and the bacterial counts increased in the liver and spleen at 3 days post infection. Pathological changes associated wirh inflammation in the liver and spleen became apparent at 4 days post infection, and increased expression of interferon (IFN)-γ and interleuikin (IL)-12 in the liver and spleen did not observed until 3 days post infection. These results indicate that S. Gallinarum rapidly spread to entire body through intestine, and the low-level of inflammatory responses in the liver during the early stage of infection may contribute to rapid, systemic dissemination of the bacteria. Our infection model and findings will contribute to the better understanding of the pathogenic mechanism of S. Gallinarum, and provide new insights into the prevention and control of fowl typhoid.     

复方中药对感染NIB鸡红细胞免疫功能的影响

为了探明由熟地等组成的复方中药对人工感染NIB雏鸡红细胞免疫功能的影响规律,将雏鸡随机分为5组（空白对照组,攻毒对照组,复方中药低剂量、中剂量、高剂量治疗组）,分别于给药后3、6、9、14、19 d采集血样,测定RBC-CR1花环率与RBC-IC花环率。结果显示,该复方中药可以使人工感染NIB雏鸡RBC-CR1花环率显著回升,并恢复到正常水平;同时使人工感染NIB雏鸡RBC-IC花环率显著升高,然后再恢复到正常水平。该复方中药的作用呈现剂量效应。该复方中药可以提高人工感染NIB雏鸡红细胞的免疫功能。     

京海黄鸡公鸡性行为的观察研究

采用全天观察法,对京海黄鸡公鸡的性行为进行记录,获得京海黄鸡公鸡性行为的过程,总结京海黄鸡公鸡性行为规律,分析京海黄鸡公鸡个体间性行为的差异,并通过检测精液品质,研究京海黄鸡公鸡性行为与精液质量的关系;通过观察晴天与阴天时的性行为,分析不同的天气对京海黄鸡公鸡性行为的影响,结果显示：京海黄鸡性行为个体间差异不大,受天气的影响较为明显。本文通过对京海黄鸡公鸡性行为的观察研究,为进一步提高京海黄鸡公鸡自然交配的授精率和繁殖性能提供一定的科学依据。     

AA鸡胸肌和腿肌中水分含量的差异研究

为了比较AA鸡胸肌和腿肌中水分含量的差异,选取来自江苏省东台市和宿迁市的49日龄AA鸡进行屠宰,测定其胸肌和腿肌中的水分含量。结果表明,2种来源的AA鸡胸肌中的含水量分别为73.70%和73.98%,腿肌中的含水量分别为75.44%和74.56%;2种来源的AA鸡腿肌中的水分含量都极显著地高于胸肌（P〈0.01）。研究结果为AA鸡肉品质标准的制定以及肉品质的改善提供了基础数据。