双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究

试验旨在构建一种更安全有效的新型免疫去势DNA疫苗,通过选取下丘脑-垂体-性腺轴（hypot halamic-pituitary-gonadal axis,HPG）的上游调控基因吻素1（KISS1）和促性腺激素释放激素（GnRH）作为靶标,借助2A肽的自剪切功能,引入平衡致死系统代替抗性基因筛选流程,成功将GnRH和KISS1转入非抗性筛选质粒pVAX-asd中,酶切验证和测序对比验证目的基因的插入方向和序列完全正确。重组质粒转染HeLa细胞,反转录后扩增目的基因结果显示,重组质粒在真核细胞内能够正常转录,保证重组质粒在导入机体后能够正常表达,从而引起特异性免疫反应。将构建成功的质粒转入减毒的猪霍乱沙门氏菌C500中,获得可直接口服免疫的活载体疫苗,酶切和测序结果表明,双表达重组质粒成功导入工程菌中。将活菌疫苗在体外连续传代50次,选取0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究,生长曲线检测结果表明,工程菌在体外连续传代50次的过程中,其生长特性无明显变化,且与减毒猪霍乱沙门氏菌C500的生长特性一致,未因携带质粒发生明显变化;同时将各代菌液扩增沙门氏菌标志基因（invA）和毒力基因（crp）,结果表明多次传代后工程菌仍然具有沙门氏菌的特性,其减毒特性也无变化。各代菌液质粒酶切验证显示,多次传代并不影响质粒的稳定性,重组双表达质粒能够在沙门氏菌C500中维持正常拷贝功能。综上所述,该重组质粒和工程菌疫苗均具有良好的稳定性,可直接应用于动物免疫去势的研究。     

人兽共患寄生虫病候选疫苗分子筛选方法研究进展

人兽共患寄生虫种类多、宿主广泛且危害严重。血吸虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病、旋毛虫病、弓形虫病等是常见的重要人兽共患寄生虫病。人类和家畜饱受寄生虫病的危害,这对公共卫生和畜牧业造成了很大的影响。控制传染源、切断传播途径和保护易感群是控制人兽共患寄生虫病流行的综合防控措施。在综合防控策略中,疫苗的使用是切断循环链、控制乃至消灭人兽共患寄生虫病的理想和有效途径之一。选用高效的抗原筛选方法挖掘潜在的疫苗候选分子是开发疫苗的前提和关键。抗原筛选技术的更新换代使得研究者发掘出了更多新抗原和保护性多肽。现有的抗原筛选方法主要包括传统的粗抗原筛选法、cDNA文库筛选法、蛋白质组学筛选法、生物信息学及多组学技术联合筛选法。很多抗原筛选的方法是伴随寄生虫疫苗研究的发展应运而生的,粗抗原筛选法是基于抗原抗体相互反应的免疫学原理而设计的,此方法筛选的天然抗原可引起机体较强的免疫反应;cDNA文库筛选抗原的优势在于筛选更有针对性,所以候选产物的成分更单一、明确;蛋白质组学筛选法是基于质谱而兴起的一种筛选技术,它既可对未知蛋白组分进行鉴定,还可对鉴定结果进行差异比较,在未知分子的发现和功能特殊的靶分子筛选中发挥着重要作用;随着后基因时代的到来,生物信息学及多组学联合筛选技术使得抗原筛选逐步进入了多维、立体的筛选模式,也使得候选抗原及其表位的功能研究更加深入,这为基因工程疫苗和多肽疫苗候选分子的筛选提供了技术手段。     

Effect of the Immunity Efficacy of IBD Immune Complex Vaccine on ND La Sota Vaccine

1-day-old SPF chickens and commercial Jingfen chickens were vaccinated with IBD immune complex(IC) vaccine, NDV La Sota vaccine were inoculated simultaneously every one week and every two weeks.NDV La Sota immunization alone was as the control group.At the 2nd, 3rd, 4th and 5th week post inoculation, blood samples were taken and the ND HI antibody were tested.Experimental chickens were challenged with high virulent NDV at the 5th week post inoculation, the protective rate of each group was calculated.The results showed the ND HI antibody were not significant different in the combined immunization of IBD IC vaccine priming and NDV La Sota vaccine boost and NDV La Sota vaccine alone immunization (P>0.05).The results indicated that IBD IC vaccine has no immunosuppression on NDV La Sota vaccine in SPF chickens and commercial Jingfen chickens.     

多型FMDV VP1表位嵌入型载体pMG-SLPMultiVP1的构建及其表达产物鉴定

构建出表达载体pMG-SLPMultiVP1,并对其进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒转入到发酵乳杆菌中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和IFAT鉴定。多型FMDV VP1表位嵌入的SLPMultiVP1融合基因成功克隆入穿梭质粒pMG36e中,其表达产物大小约为35ku,部分表达产物位于发酵乳杆菌表面。成功构建了一个乳杆菌嵌入型表达载体pMG-SLPMultiVP1,为以发酵乳杆菌为活菌载体的表位疫苗研究奠定了基础。     

鸡毒支原体研究概况

鸡毒支原体(MG)是对养禽业危害很大的支原体,主要导致禽类慢性呼吸道疾病(CRD),以禽的结膜炎、产蛋率及饲料转换率下降、屠宰率下降等为主要特征。MG可通过垂直和水平传播方式在鸡群中传播,每年给全球家禽产业带来巨大经济损失。随着对MG细胞表面抗原黏附素蛋白(pMGA)和PvpA、GapA的结构与功能研究的深入,K株、TG5株等MG疫苗研究也取得较大进展。由于抗生素的滥用,MG基因中也发生耐药突变,产生了QRDRs等抗药结构,导致MG在耐药性上也出现新的特点。论文主要对国内外MG的疫苗开发、耐药情况和检测技术等进行综述,旨在对家禽MG的综合防控提供借鉴。     

动物诊疗机构人用药品使用现象分析及建议

随着社会经济水平日益提升,越来越多的人饲养宠物作为伴侣,与此同时宠物诊疗机构如春笋般蓬勃发展。然而其在发展中存在诸多问题,尤以使用人用药品问题最为突出。论文从药品使用现状、原因、管理等方面,对动物诊疗机构人用药品使用现象进行分析并提出一些建议,旨在进一步规范动物诊疗机构临床用药,使其良性发展。     

NO/ADMA在布鲁菌侵染小鼠机体过程中的响应特征

本试验旨在研究布鲁菌侵染小鼠过程中一氧化氮(NO)的作用,以及NO和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)在此过程的相互作用关系。以布鲁菌标准疫苗株M5侵染小鼠,首先用小鼠的血清进行虎红平板凝集(RBPT)和试管凝集试验(SAT),再用Griess试剂法和ELISA法测定对照组和侵染组不同组织和血清中的NO和ADMA含量,对小鼠肝脏和脾脏的各个侵染时间段进行CFU计数观察。结果显示,用布鲁菌M5侵染小鼠后,RBPT和SAT在14d时检测到有阳性反应。侵染组和空白对照组NO总含量上变化不大,但侵染组血清中的NO含量随时间出现下降,而肝脾中NO含量随时间出现上升,其他各组织NO含量波动不明显。而ADMA的总趋势与NO相反。CFU计数结果显示,小鼠肝脾内布鲁菌的数量在14d时一直处于增长状态,28d时布鲁菌的数量下降,表明布鲁菌的分裂繁殖和机体NO的含量存在一定的关系。     

Increased humoral antibody response of foot-and-mouth disease virus vaccine in growing pigs pre-treated with poly-γ-glutamic acid

This study was conducted to determine if humoral antibody response of foot-and-mouth disease (FMD) vaccine improved in 8-week-old growing pigs born to well-vaccinated sows pre-treated with 60 mg of poly-γ-glutamic acid (γ-PGA) three days before vaccination. Antibody against FMD virus serotype O was measured 0, 2, 4 and 6 weeks post-vaccination, using a PrioCHECK FMDV type O ELISA kit. The results showed that positive antibody reactions against FMDV serotype O antigen among a component of the vaccine significantly increased in response to pre-injection with γ-PGA.     

Of mice and men: olfactory neuroblastoma among animals and humans

Olfactory neuroblastoma (ONB) is a rare tumour of nasal cavity and paranasal sinuses that arises from the olfactory neuroepithelium and has unpredictable clinical course. As the sense of smell is phylogenetically one of the first senses and olfactory neuroepithelium is evolutionary conserved with striking similarities among different species, we performed an extensive analysis of the literature in order to evaluate the similarities and differences between animals and humans on the clinical, morphological, immunohistochemical, ultrastructural and molecular level. Our analysis revealed that ONB was reported mainly in mammals and showed striking similarities to human ONB. These observations provide rationale for introduction of therapy modalities used in humans into the veterinary medicine. Animal models of neuroblastoma should be considered for the preclinical studies evaluating novel therapies for ONB.