多型FMDV VP1表位嵌入型载体pMG-SLPMultiVP1的构建及其表达产物鉴定

构建出表达载体pMG-SLPMultiVP1,并对其进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒转入到发酵乳杆菌中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和IFAT鉴定。多型FMDV VP1表位嵌入的SLPMultiVP1融合基因成功克隆入穿梭质粒pMG36e中,其表达产物大小约为35ku,部分表达产物位于发酵乳杆菌表面。成功构建了一个乳杆菌嵌入型表达载体pMG-SLPMultiVP1,为以发酵乳杆菌为活菌载体的表位疫苗研究奠定了基础。     

神农架川金丝猴的个体识别

本研究以神农架川金丝猴大龙潭野外人工补食种群为对象,在对30只川金丝猴身体数据多年来的观察和测量基础上,从基础识别(雌雄识别、年龄识别、母子识别和友好关系识别)以及个体识别两个方面提供一种川金丝猴的个体识别方法,对群体的个体进行了命名及区分识别,为其他研究提供基础技术支持或参考,有效解决川金丝猴研究初期个体识别困难的问题。     

内蒙古锡林郭勒盟地区优势蜱种及其基因多样性分析

为了解内蒙古锡林郭勒盟地区的优势蜱种及其存在的基因多态性,应用传统形态学和分子生物学相结合的方法,对该地区14个主要牧区采样点进行蜱虫种型的鉴定和基因多态性分析。通过传统形态学鉴定方法,对蜱虫样品进行显微镜观察以初步确定蜱属。采用聚合酶链式反应(PCR)对蜱虫的16S rRNA基因序列进行扩增,测序后对蜱种进行分子鉴定和基因序列同源性分析,确定蜱种多样性。应用Mega 6.06软件构建系统进化树,与GenBank数据库中已知蜱虫的16S rRNA进行聚类分析,以确定蜱进化的规律。结果显示14个不同地区的蜱虫均属于草原革蜱,为锡林郭勒盟地区的优势蜱种之一,但不同地区的蜱虫之间存在明显的基因多态性。     

一种蜱源性粪产碱杆菌内蒙古株的分离与鉴定

从内蒙古呼伦贝尔地区自然放牧的羊群中采集蜱虫样本,分离出可疑细菌,并采取常规方法和分子生物学方法对其进行种型鉴定。采用高盐普通琼脂培养基从收集的蜱虫体内分离和纯化培养可疑细菌,并进行革兰染色;对纯化的可疑细菌进行生理生化、药物敏感试验及对盐的耐受性鉴定;PCR方法扩增和测序16SrRNA基因序列并应用Mega6.0生物软件绘制出该细菌系统发育进化树。结果显示,分离菌革兰染色呈革兰阴性短杆菌;溶血性试验结果呈现α-溶血;药物敏感试验对头孢类抗生素敏感,对青霉素、两性霉素B耐药;该菌具有运动性并可在含有10%的NaCl的培养基中生长;蔗糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、葡萄糖等糖分解试验、吲哚试验、硝酸盐(还原)试验、明胶液化试验等结果为阴性;脲酶试验、氧化型与发酵型试验、西蒙氏枸橼酸盐试验、氧化酶试验结果为阳性;根据16SrRNA基因绘制的系统发育树可看出,本试验分离株与粪产碱杆菌遗传距离近,处在相同分支。本试验成功分离出1株新的蜱源性粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis),重新命名为Alcaligenes faecalis IMH(简称为A.faecalis IMH),其16S rRNA基因重新注册于GenBank中,注册号为:LC213619.1。本试验为进一步研究该菌的致病性奠定基础。     

呼伦贝尔地区牛体表寄生蜱中羊种布鲁氏菌的分离与鉴定

【目的】阐明牛体表寄生草原革蜱与牛羊布鲁氏菌病的相关性,为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查及防控提供基础数据。【方法】通过传统形态学及分子生物学相结合的方法,对呼伦贝尔地区采集的191只蜱虫进行种型鉴定;以牛体表采集的寄生蜱为材料,应用布鲁氏菌选择性培养基从蜱体内分离可疑细菌;将可疑细菌进行分离培养,菌落的形态学观察,以及革兰氏染色和柯氏染色镜检初步鉴定可疑细菌的种属;经PCR方法扩增布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,并应用MEGA 7.0软件构建系统遗传进化树;运用AMOS-PCR、单项特异性血清凝集试验、染料抑菌和噬菌体裂解试验对分离的可疑菌进行分型鉴定。【结果】该地区优势蜱种被鉴定为草原革蜱,并成功在其体内分离到4株可疑细菌;经革兰氏染色镜检发现该菌属于革兰氏阴性短杆菌,柯氏染色后菌体呈红色短杆菌,并通过PCR方法成功克隆出布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,经过基因序列测序及BLAST比对分析,发现与布鲁氏菌参考序列相似度均在99.0%以上。应用MEGA 7.0软件成功构建遗传进化树,分离菌株序列与布鲁氏菌属的已知序列聚类在同一分支;运用AMOS-PCR和布鲁氏菌常规分型鉴定试验,确定4株分离菌均属于羊种布鲁氏菌。【结论】成功在呼伦贝尔地区牛体表采集的草原革蜱体内分离到4株羊种布鲁氏菌,表明草原革蜱作为吸血节肢动物,可能在不同宿主之间的布病传播过程中发挥重要作用。本论文为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查和防控提供基础数据。