多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒

根据猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)3种病原体的基因保守序列，分别设计了与CSFV的E2基因、PPV的VP2基因和PRV的gⅡ基因序列互补的3对引物。用这3对引物对人为混合的样品中的PPV和PRV的DNA模板及CSFV反转录后的cDNA模板进行多重PCR扩增和多重PCR反应奈件的优化，结果同时得到3务与试验设计相符的288bp(CSFV)、575bp(PPV)700bp(PRV)特异性条带；敏感性检测结果表明，该多重PCR可以检测到14．5ng／L的CSFV、27．1pg／L的PPV、31．4ng／L的PRV的核酸模板。     

狂犬病病毒SRV9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析

根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列，设计并合成了一对引物，从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA，通过RT-PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列，测序结果显示，其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28b( )中，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyss，于30℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达，大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析，在分子量约为56kDa处出现一新的蛋白带。和预期的目的蛋白分子量相符，Western-blotting检测表明，表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应，出现单一反应带，扫描分析显示，表达产物占菌体总蛋白的23%，包涵体分离，纯化后，纯度达89%，上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。     

三种PCR方法诊断猪伪狂犬病的比较研究

针对伪狂犬病毒gD基因的不同片段设计三对引物，分别进行PCR扩增用于猪伪狂犬病的诊断，扩增的三个片段的长度分别为262bp、217pb以及1203bp的全基因。通过比较发现，这三种PCB诊断方法均具有很高的特异性和敏感性，值扩增gD基因内部262bp的PCR诊断方法种具有突出优点，其退火与延伸合成一步，其操作可于1h内完成，敏感性更高，更适于猪伪狂犬病的快速诊断。     

应用多重PCR检测人工感染鸡呼吸道疾病的研究

本文报道了IBV，NDV，ILTV，MG人工感染4周龄SPF鸡和非免疫鸡后，用多重PCR检测试验鸡的咽喉棉拭子和器官组织样品，并与传统的病原分离鉴定，血清学方法进行比较，多重PCR无论是对单一感染病原，还是对两种以上混合感染病原，其敏感性和检测速度都优于传统的鉴别诊断方法，具有较高的实用价值，可以直接应用于临床检测，服务于生产。     

进口肉骨粉及动物饲料中牛源性成分的PCR—微孔板杂交检测方法

疯牛病（Mad－Cow Disease）即牛海绵状脑病（Bovine Spongiform Encephalopathy，BSE），已被证实与人的克雅氏病（Creutzfeldt Jakob Disease,CJD）有直接关联。人如果食用感染了疯牛病病原的牛肉，就会患上克雅氏病，造成永久性的脑部损伤，脑组织形成海绵状空洞，导致精神错乱、痴呆，最终死亡。已经报道发现疯牛病的国家有英国、爱尔兰、意大利、葡萄牙、瑞士、法国、西班牙、德国和比利时等，疯牛病已经成为当今世界食品安全的重大威胁。到目前为止，尚未发现疯牛病的病原。肉骨粉是牲畜屠宰后其毛纤维、皮革、角质、骨骼、脏…     

PCR技术在禽病诊断中应用的研究进展

聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR),又称体外基因扩增技术,是80年代中期由Mullis.发明的一种新的分子生物学技术,与传统的检测方法如生物化学、细菌学、病毒学和血清学方法等相比较,PCR方法具有特异性和敏感性高、操作简便、快速高效等特点,而且应用广泛。在病原方面,它既可作病原体的检测,也可同时进行不同病原或同一病原不同株的检测。特别适合难以培养的病毒和细菌的检测。经过近20年的发展,目前已开发出多种PCR技术,以适应不同试验需要,现综述PCR技术在禽病诊断中的应用。1PCR原理PCR是由三个基本反应组成的反复循…     

用PCR技术检测动物产品中沙门氏菌的研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌，结果表明，对各种不同血清型的沙门氏菌和已知被该菌污染的鱼粉和动物产品的肉汤培养物均检出阳性，而其他的枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌，大肠艾希氏杆菌、缓慢爱德华氏菌和嗜水气单胞菌等非沙门氏菌类，均为阴性。证明本方法特异性高且有灵敏、快速等特点，适用于口岸检疫进出境动物产品快速、准确验放的需要。     

安徽省鸡常见病毒性肿瘤病的检测与调查

应用已建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术对源自安徽省5个不同地区的46个鸡群的肿瘤病、抑制病疑似病、死鸡305羽进行检测。结果表明,马立克氏病的阳性率为39．34%(120/305),禽网状内皮组织增生征阳性率为8．52%(26/305),禽白血病阳性率为2．624%(8/305)；另对17群未进行MD免疫的肉鸡进行随机抽样检测,其中5个鸡群检测出马立克氏病病毒强毒,阳性率为29．41%(5/17),阳性群的平均检出率为24 %。     

鸭瘟病毒的PCR检测及其产物分析

根据基因库中已有的鸭瘟 Ul6的序列 ,合成一对引物 ,对 3株鸭瘟病毒进行 PCR扩增 ,均扩增出大小约 42 0 bp的特异性片段。进行测序 ,结果表明 3个毒株扩增后的片段均为 42 1bp。经重复实验后确定最佳反应条件 ,按该条件对两例临床病料进行检测 ,结果均出现大小约为 42 0 bp的特异片段。PCR产物与 L ake Andes株的相关序列比较 ,广东毒株与 L ake Andes株同源性较高     

南方、爪哇和花生根结线虫的快速灵敏的PCR鉴定方法

为了研制南方、爪哇和花生根结线虫快速灵敏的检测和鉴定方法，分别分离了4个南方根结线虫和3个爪哇根结线虫特异性的随机扩增多态性DNA(RAPD)片段。在这些RAPD标记DNA序列的基础上，设计了多对SCARPCR引物，并用源于国内外的南方、爪哇、花生、北方和象耳豆根结线虫群体验证其扩增特异性和灵敏度。最终确定了3对高效扩增的SCAR引物，