花生γ-生育酚甲基转移酶基因(γ-TMT)的克隆及序列分析

γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)催化γ-生育酚转变为生物活性最高的α-生育酚,是决定植物中维生素E成分和活性的关键酶。本研究采用电子克隆与PCR相结合的方法获得了花生６个栽培品种(A. hypogaea L.)和花生区组4个二倍体野生种中γ-TMT的全长DNA序列,定名为AhgTMT;从栽培品种丰花2号中获得γ-TMT的cDNA序列,定名为AhrTMT。同一栽培品种的AhgTMT与AhrTMT的序列完全对应,说明该基因无内含子。AhrTMT编码区长1 059 bp,编码352个氨基酸残基的AhTMT蛋白。AhTMT分子量为39.09 kD,等电点6.72,总平均亲水性–0.12;预测的二级结构中α-螺旋占55.40%, β-折叠占10.51%, 无规则卷曲占34.09%;被定位于叶绿体,含有甲基转移酶保守的SAM结构域。AhTMT与已报道植物γ-TMT氨基酸序列的相似性为61.75%~72.80%。栽培品种的AhgTMT与A. ipaensis (BB)、A. batizocoi (BB)、A. duranensis (AA)、A. kuhlmannii (AA) 4个野生种的核苷酸序列同源性分别是100%、99.91%、99.74%、95.63%。     

红曲菌GABA高产菌株的筛选及培养基的研究

[目的]筛选出高产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的红曲菌菌株,并研究其最佳发酵条件。[方法]通过液态发酵,从实验室保藏的23株红曲菌菌株中筛选出GABA产量较高的菌株,研究不同碳源、氮源及Ca2+、Mn2+、乙醇等其他添加成分对其产GABA的影响,并利用正交试验优化发酵培养基的组成。[结果]筛选出GABA产量较高的菌株M-4,发现葡萄糖和谷氨酸单钠盐有利于GABA的产生,且当培养基组成为大米粉3%、葡萄糖4%、谷氨酸单钠盐2%、KH2PO40.15%、MgSO4.7H2O 0.10%时,M-4的GABA产量达474 mg/L,为优化前的4.6倍。[结论]该研究可为开发富含GABA的红曲保健品提供参考。     

60Co-γ射线辐射对大白杜鹃的矮化效应

研究了不同剂量的60Co?γ射线辐射对大白杜鹃生长特性、叶片气孔特征及内源激素含量变化的影响,利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定幼苗内源激素含量。结果表明:60Co?γ射线辐射对大白杜鹃幼苗的生长有不同程度的抑制作用,在20～60Gy范围内,辐射处理的苗高低于对照;辐射后叶片的气孔密度、大小与对照有显著差异,气孔开放面积减小;辐射处理后吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、玉米素核苷(ZR)含量降低,脱落酸(ABA)含量增加,较高水平的ABA含量有利于植株的矮化。     

γ-氨基丁酸及其受体功能的研究与应用现状

γ-氨基丁酸(GABA)是一种功能性非蛋白质氨基酸,是重要的抑制性神经递质。GABA通过与其受体结合从而具有多种功能及调节作用。随着对GABA研究的逐渐深入,其功能已经在各个领域得到了广泛的应用,尤其在食品及畜牧业中,对富含GABA的食品、饲料的开发及在动物生产中的应用已成为国内外研究的热点之一,因此,对GABA的研究具有较广阔的前景。论文从GABA及其受体的生理特性,对认知功能障碍的调节、对疾病的治疗及缓解、对酒精和药物成瘾作用等生理功能及GABA在实际中的应用进行了综述,并提出了今后应重视的问题。     

LPS诱导不同品系雏鸡炎症反应相关基因的差异表达分析

分别以AA+肉仔鸡和海兰褐蛋雏鸡为研究对象,采用大肠杆菌脂多糖(LPS)连续3d腹腔注射11日龄雏鸡,收集血液、肝脏、胸腺、法氏囊、脾脏等组织,利用RT-PCR定量分析炎症反应相关基因akirin2、PPARγ和几种miRNA的转录活性变化。结果表明:在LPS接种肉鸡(AA+肉鸡)的肝脏、法氏囊和脾脏中akirin2基因转录活性均显著下调(P0.01),PPARγ基因在肝脏、法氏囊中转录水平也均显著下调(P0.01);在LPS接种蛋鸡(海兰褐鸡)的胸腺中akirin2基因转录活性显著上调(P0.01),但PPARγ基因在各组织中的转录水平差异均不显著;miR-146a(P0.05)、miR-21(P0.01)和miR-155(P0.01)在2个品系鸡的肝脏中表达均显著下调。研究不同品系鸡LPS诱导下相关基因转录活性的变化关系,对于深入了解不同品系鸡炎症反应分子机制的差异和开发炎症反应早期诊断的分子标记物具有重要的理论和实践意义。     

添加环格列酮对延边黄牛骨骼肌卫星细胞成脂转分化的影响

试验旨在探究过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）激动剂（环格列酮）对延边黄牛骨骼肌卫星细胞成脂转分化的影响。试验分为4组：对照组（CON，不添加环格列酮）、CL组（5 μmol/L环格列酮）、CM组（10 μmol/L环格列酮）和CH组（20 μmol/L环格列酮），利用不同浓度环格列酮处理骨骼肌卫星细胞96 h后，通过油红O染色法和甘油三酯的测定来验证脂滴的形成，并使用实时荧光定量PCR和Western blotting测定基因表达和蛋白质定量的变化来验证脂肪细胞的生成。甘油三酯测定和油红O染色显示，与对照组相比，添加环格列酮后，骨骼肌卫星细胞内有脂滴生成，且脂滴形成量和甘油积累量与环格列酮添加量呈正相关。实时荧光定量PCR和Western blotting结果表明，与对照组相比，环格列酮组显著增加了成脂转录因子PPARγ、CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）和围脂滴蛋白-2（PLIN2）基因的表达，显著下调了成肌相关因子MyoD的表达（P<0.05），且所有蛋白与基因表达趋势保持一致，表明环格列酮可以促进牛骨骼肌卫星细胞向脂肪细胞分化。     

miR-148a-3p靶向PPARγ基因抑制鹅颗粒细胞孕酮的合成

旨在探究miR-148a-3p是否通过靶基因PPARγ调节鹅卵泡颗粒细胞中类固醇激素的合成。本研究选用12只健康的处于产蛋高峰期的天府肉鹅母系母鹅分别用于组织样品采集和颗粒细胞培养。利用qPCR检测miR-148a-3p在鹅不同阶段卵泡颗粒层中的表达;通过MEGA 7软件分析miR-148a-3p在不同物种的保守性,预测miR-148a-3p的靶基因,采用双荧光素酶报告试验验证miR-148a-3p与靶基因的靶标关系;在鹅颗粒细胞中转染miR-148a-3p mimics和inhibitor,qPCR检测miR-148a-3p对靶基因及其下游基因表达水平的影响;同时利用ELISA技术检测激素含量的变化。结果表明,miR-148a-3p在不同物种中高度保守;在鹅卵泡发育过程中,miR-148a-3p的表达量随卵泡直径的增加呈先升高后下降的趋势。在鹅卵泡颗粒细胞体外培养过程中,miR-148a-3p mimics能显著下调3β-HSD的表达（P<0.05）,抑制孕酮的合成（P<0.05）;而miR-148a-3p inhibitor的作用则相反（P<0.05）。生物信息学分析和双荧光素酶报告试验证实,PPARγ为miR-148a-3p的靶基因。在颗粒细胞中,miR-148a-3p mimics能显著降低PPARγ的表达（P<0.05）,而miR-148a-3p inhibitor能显著上调PPARγ的表达（P<0.05）。当干扰PPARγ后,3β-HSD的表达量显著降低（P<0.05）,孕酮的含量也降低。这些结果表明,在鹅等级卵泡颗粒细胞中,miR-148a-3p可靶向结合PPARγ来抑制3β-HSD的表达,从而降低颗粒细胞孕酮的合成。     

高脂饲料对细鳞鱼稚鱼刷状缘膜水解酶发育的影响

试验评价了蛋白质含量为48%时,脂肪含量分别为15%、20%、25%、30%的饲料对开口后20～60 d的细鳞鱼稚鱼肠道水解酶-γ-谷氨酰肽转移酶、碱性磷酸酶活性发育的影响。结果表明,适度的饲料脂肪含量可以提高水解酶活性,并强于生物饵料,促进了肠道对营养物质的消化。饲料脂肪为20%～30%的水平时,水解酶的活性相对较高。     

重组人γ-干扰素基因工程菌发酵工艺优化

研究不同类型培养基、诱导时间、菌体密度和不同补料对rhIFN-γ表达的影响,并运用高密度发酵工艺对rhIFN-γ的产量进行优化,目的蛋白表达量从4 000 mg/L提高到20 000 mg/L以上,发酵产量提高了5倍,大大提高了效率。同时为验证工艺的稳定性,将优化的发酵条件进行连续三批重复发酵实验。结果表明该优化条件具有重复性,表达稳定,维持在40%左右,从而为rhIFN-γ大规模生产奠定了良好的基础。     

乳糖诱导重组鸡γ干扰素基因在大肠杆菌中的表达

本文考察了乳糖代替IPTG诱导鸡γ干扰素(ChIFN-γ)在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。分别对乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式等方面进行了分析,并在最优诱导条件下与IPTG诱导进行比较。结果表明,工程菌在对数生长中后期(OD600为1.5)添加终浓度为2g/L的乳糖诱导7h对蛋白的表达和菌体量最为有利。由于乳糖本身可作为碳源被菌体利用,分批流加乳糖效果优于一次性添加。与IPTG诱导相比,乳糖诱导的蛋白表达量为29.8%,稍低于IPTG的32.3%,诱导后蛋白表达时间也有所滞后,但收获的菌体量则显著高于IPTG诱导,约为1.21倍,显示出了乳糖作为诱导剂的自身的优势。研究结果证明乳糖可以作为诱导剂应用于重组鸡γ干扰素的工业化生产,同时也为其它重组基因工程药物的生产提供了有益的参考和借鉴。