CpG寡核苷酸对鸡Toll样受体15表达量的影响

[目的]研究禽类TLR15受体在CpG-ODN诱导机体天然免疫反应中的作用。[方法]采用实时定量PCR等检测方法,检测CpG-ODN刺激后细胞因子和TLR15表达量的变化情况。[结果]CpG-ODN刺激鸡巨噬细胞后,可显著提高细胞因子和TLR15表达量。[结论]禽类TLR15受体可能参与了CpG-ODN刺激引起的机体天然免疫反应。     

天然免疫与生物安全在未来疫病防控中的重要性——天然免疫与疫病防控新策略

目前．养殖业正在经历新一轮的变革,产业升级是不可逆转的形势,整个行业都倍受疫病压力．将来疫病防控的发展趋势如何7在2013年10月21～25日,由中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会与军事医学院军事兽医研究所主办,的“中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立三十周年庆典、第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会”上众专家院士给出了共同的答案：建立或修复动物机体的天然免疫屏障,减少药物或疫苗的使用量．降低了机体排毒和病毒细菌等传播的可能性,是今后疫病防控的趋势,势必将成为疫病防控的主流趋势．动保行业的转型和变革或将到来。     

口蹄疫病毒抑制NOD2蛋白表达及其抗病毒功能的机制

天然免疫系统在病毒感染早期识别和诱发抗病毒反应中发挥重要作用,宿主模式识别受体(PRRs,如RIG-I、Toll和NOD样等受体)识别病原微生物结构上保守组分病原相关分子模式(PAMPs),进而激活下游级联信号通路,诱导干扰素、细胞因子和促炎性因子等产生,激发抗病毒天然免疫。而病毒通过降解天然免疫信号通路分子或抑制其激活,从而抑制抗病毒应答。口蹄疫病毒(FMDV)通过多种蛋白抑制天然免疫,肖少波团队和杜以军团队鉴定了非结构蛋白Lpro和3Cpro,作为水解酶蛋白,抑制RIG-I通路分子的激活,并阐明其抑制天然免疫的机制;郑海学团队鉴定了结构蛋白VP3和非结构蛋白2B和3A等抑制干扰素产生。     

USP18分子通过Ⅰ型干扰素通路影响猪瘟病毒复制的研究

猪瘟病毒(CSFV)感染无特定病原(SPF)猪后,分离猪外周血单个核细胞进行转录组分析,数据显示病毒感染后泛素特异性蛋白酶18(USP18)基因的转录水平明显上升。为研究USP18分子对CSFV复制的影响及其作用机制,本研究通过构建过表达USP18的细胞系及应用特异性小干扰RNA下调表达USP18的方法,采用荧光定量PCR验证USP18对CSFV增殖的影响,结果显示USP18分子能够促进CSFV的复制;通过检测IFN-β、NF-κB及ISRE的启动子活性及I型干扰素(IFN-I)信号通路的下游分子m RNA的转录水平,采用荧光定量PCR和双荧光酶报答试验分析USP18对IFN-I信号通路的影响,结果显示USP18分子抑制IFN-I信号通路。以上结果表明CSFV通过诱导USP18分子的上调表达,抑制了IFN-I途径,从而逃避天然免疫防御,进而促进自身的复制。本研究为明确CSFV与宿主之间的相互作用及CSFV致病机制提供参考依据和奠定基础。     

斑节对虾C1q结合蛋白(PmC1qBP)的克隆及表达特征分析

Clq结合蛋白(ClqBP)是补体系统中的一种重要成分,它能与游离的补体分子Clq的胶原样区相互作用并启动多种细胞反应,包括增强吞噬作用、促进吞噬细胞对微生物的杀伤、诱导趋化作用,从而增强生物体的免疫性.本实验从构建的斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢组织cDNA文库中筛选并克隆了PmClqBP基因.为研究PmClqBP在斑节对虾中的生物学功能,采用半定量和荧光定量的方法研究比较了PmClqBP基因在雌雄个体不同组织及卵巢不同发育阶段的差异表达情况.结果表明:雌雄个体的PmClqBP基因在性腺、胃、血细胞、肠中表达量存在极显著差异(P＜0.01).同时,PmClqBP在无节幼体和蚤状幼体时表达量低,从糠虾幼体至卵巢发育成熟过程中表达量有所增加并趋于稳定,揭示PmClqBP斑节对虾卵巢发育过程的重要功能基因.应激实验结果表明,经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激6h后PmClqBP在肝胰腺中的表达量极显著上调,提示PmClqBP参与了斑节对虾天然免疫应答,暗示其在斑节对虾先天性免疫调控中发挥着重要的作用.     

猪流行性腹泻病毒感染对猪小肠上皮细胞I型干扰素产生通路的影响

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是严重危害仔猪肠道健康的病原之一.用病毒感染复数(MOI)=1.0的PEDV感染猪小肠上皮细胞,通过间接免疫荧光试验,证实PEDV能在猪小肠上皮细胞中增殖.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测,发现Toll样受体3(TLR3)编码基因、视黄醇诱导基因I/黑色素瘤分化相关基因5(RIG-I/MDA5)的mRNA表达水平分别从感染后2 h、4 h开始显著升高(P<0.05),分别在感染后12 h、24 h达到最高值;线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)编码基因的mRNA相对表达量从感染后6 h开始显著升高(P<0.05),随后基本保持不变.下游接头蛋白质β干扰素TIR结构域衔接蛋白质(TRIF)、肿瘤坏死因子相关因子3(TRAF3)、IκB激酶ε(IKK-ε)和TANK结合激酶1(TBK1)编码基因的mRNA相对表达量在感染后4 h出现显著上升(P<0.05),随后IKK-ε编码基因的mRNA相对表达量在感染后8 h达到最高值,TRIF、TRAF3和TBK1编码基因的mRNA相对表达量均在感染后12 h达到最高值.干扰素调节因子3(IRF3)编码基因的mRNA相对表达量在感染早期无显著变化,在感染后24 h达到最高值(P<0.05).与对照组相比,PEDV感染无法诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)IFN-β编码基因的mRNA相对表达量显著升高,但能有效抑制Poly(I:C)(聚肌胞苷酸)诱导的IFN-β产生.结果表明,PEDV能够在感染早期激活TLRs、RLRs介导的I型IFN产生通路中相关受体及接头蛋白质的基因表达,但最终能抑制干扰素产生,并能在猪小肠上皮细胞中有效增殖.     

植物PTI天然免疫信号转导研究进展

病害是危害农业生产的重要因素之一,植物对于病原菌的抗性依赖于植物的天然免疫(plant innate immunity)系统。因此,对于植物天然免疫的研究将为农作物抗病育种提供重要理论基础。植物天然免疫系统包含彼此相互关联的两个层面,即PTI(PAMP-triggered immunity)和ETI(effector-triggered immunity)。近年来,国内外对于PTI的研究取得了一系列重要进展。PTI是由病原物相关分子模式PAMP(pathogen-associated molecular pattern)所诱发的植物免疫反应。PAMP被位于植物细胞表面的受体识别后,将免疫信号通过胞质类受体激酶BIK1(Botrytis-induced kinase 1)、MAPK级联、CDPK(calcium-dependent protein kinase)等向下游传递,诱导活性氧的爆发、气孔的关闭、免疫基因的表达等,从而抑制病原微生物的生长。免疫信号在传递过程中会在多个层次上被精细调控,以保证合适的反应强度和持续时间。本文从植物免疫受体FLS2及其他免疫受体的发现、免疫信号转导组分的发现以及其生物学功能、参与天然免疫的转录因子、植物免疫反应的负调控及植物天然免疫在抗病育种中的应用等方面综述了近年来植物PTI天然免疫的分子机理和信号转导方面的研究进展。并对该领域的发展提出展望,我们认为农作物天然免疫信号转导和作物与致病真菌互作系统的研究将会是未来研究的重点和主要方向,天然免疫的重要理论与基因编辑技术的结合,必将使作物抗病育种迎来新时代。     

禽类Toll样受体的分子进化与作用机制研究进展

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是先天免疫系统重要的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRR).TLRs通过与病原微生物的病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)相结合,活化相关信号途径,引发抗病原体防御反应、炎症反应以及活化T细胞等免疫效应.目前已经识别了10个禽类Toll样受体,包括与其它脊椎动物在结构上具有高度同源以及作用模式相对保守的TLR1\6\10、2、3、4、5、7和21,以及禽类所特有的chTLR15.本文主要阐述有关禽类Toll样受体的分子进化以及独特的作用方式研究的最新进展.     

RIG-Ⅰ样受体信号传导通路与调控机制研究进展

视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)为RLRs受体家族的成员,是比较关键的细胞质内病原体识别受体,可识别细胞内的单链、双链等RNA病毒成分,被激活的RIG-Ⅰ受体及其CARD在TRIM25的作用下连接泛素链使其寡聚化,通过与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)相互作用,激活MAVS及下游转录因子IRF3和NF-κB,从而诱导Ⅰ型干扰素和炎性因子的表达,最终介导宿主的抗病毒免疫应答。鉴于RIG-Ⅰ持续激活可导致炎性因子对自身细胞的损伤,因此RIG-Ⅰ样受体信号通路受到宿主严格的调控。而某些病毒为逃避宿主细胞的免疫应答,进化出多种机制靶向调节RIG-Ⅰ及MAVS,从而阻断信号通路。论文从RIG-Ⅰ识别病毒机制、激活下游信号传导、宿主细胞对信号传导途径的调控以及病毒逃避机制等方面重点阐述RIG-Ⅰ所介导的天然免疫反应。     

视黄酸诱导基因-Ⅰ在家禽天然免疫应答中作用的研究进展

家禽的天然免疫应答在抵抗病毒感染的过程中起着关键性作用，视黄酸诱导基因-Ⅰ（retinoic acid inducible gene-Ⅰ，RIG-Ⅰ）作为细胞质内一类识别病毒双链RNA的模式识别受体，与天然免疫应答密切相关。它可通过RNA配体结合病原相关分子模式监测细胞质中的病毒RNA，此过程激活了RIG-Ⅰ及下游线粒体抗病毒信号蛋白（MAVS），最终导致干扰素调节因子（IRF3/7）和核因子κB （NF-κB）活化，诱导产生Ⅰ型干扰素等免疫细胞因子，进而使细胞做出相应的抗病毒天然免疫反应。但由于鸡体内缺乏RIG-Ⅰ基因，目前大多将鸭源或鹅源RIG-Ⅰ基因转染鸡成纤维母细胞（DF-1）研究RIG-Ⅰ基因在鸡感染禽类病毒时是否具有免疫功能。文章介绍了RIG-Ⅰ在家禽体内的表达及其介导的抗病毒天然免疫信号通路，并简述了RIG-Ⅰ在家禽体内抗病毒作用的研究概况，为抑制家禽病毒的感染和免疫系统研究，以及研制新型抗病毒疫苗或免疫佐剂等提供参考。