小麦品种无性系变异改良技术研究

针对晋阳345和晋麦73两个定型品种存在抗寒性较差的缺点,对其幼胚愈伤组织进行了4种处理:1、愈伤组织在MD培养基上继代2～3次;2、愈伤组织在紫外灯下约10cm照射2h;3、愈伤组织在低温2℃和常温25℃下交替培养30d;4、愈伤组织在紫外灯下照射2h后,再在低温2℃和常温25℃下交替培养30d。结果表明,4个处理后代R2主要农艺性状的变异率差异显著,且紫外灯照射幼胚愈伤组织的变异率比低温2℃和常温25℃交替处理幼胚愈伤组织高,其后代各种农艺性状的变异范围较大,变异率较高。但后者有利于改良抗寒性较差的定型小麦品种。     

籼稻体细胞胚胎发生特异性蛋白质研究

以籼稻Oryza sativa L.subsp. indica品种“广陆矮4号”幼穗和种子为外植体，在含有2，4-D2.0mg/L的MS培养基上，分别形成胚性和非胚性愈伤组织，建立体细胞胚胎发生实验系统。应用Native/SDS双向凝胶电泳分析，结果表明，非胚性愈伤组织分化培养前后均存在一种分子量为45kD的非胚性蛋白质N1，另一种非胚性蛋白质N2（54kD）仅     

基于多信息融合的疫苗制备中鸡蛋胚体分拣系统

采用多信息融合方法研究疫苗制备中鸡蛋胚体状态的识别与分拣技术。在研究不同状态鸡蛋胚体图像特征、温度衰减和透光度变化情况的基础上,得出活胚图像中血管多、粗且呈放射状,弱胚图像中血管少、细且断裂,死胚图像内部均匀无血管,污染胚图像内部有明显黑块特征;鸡蛋胚体从37.8℃的孵化箱中取出置于25℃室温环境,活胚、弱胚、污染胚、死胚的温度衰减速度依次增大;活胚的透光度随孵化时间增加而逐渐降低,其他胚体透光度变化相对较小。将图像、温度、透光度信息特征融合,建立BP神经网络信息融合模型对鸡蛋胚体状态进行识别。最后,从37.8℃孵化箱中抽取80枚孵化6 d的鸡蛋胚体放置于室温10 min后,采集图像、温度和透光度信息,进行试验验证。结果表明多信息融合系统的识别准确率为96.25%,比单用图像、温度和透光度传感器进行识别的准确率分别提高了6.25%、13.75%和8.75%。     

陆地棉×亚洲棉胚胎在培养条件下的发育研究

离体培养陆地棉与亚洲棉杂种胚珠,并以陆地棉自交为对照。观察结果表明,杂种胚胎表现出明显的生长优势,能顺利地通过胚胎发育的各个时期而达成熟胚。其原因是,胚乳游离核迅速解体,珠心组织也随之解体,而不形成胚乳细胞并使胚囊腔迅速扩展,使杂种胚有足够的营养源,并提供了足够的生长空间。自交胚胎的生育速度远不及杂种胚,发育受抑,尤其是球形胚到心形胚的时期较长。     

Research Progress on Technique of Frozen Embryo Transfer in Sheep

The paper introduced the research progress on the technique of frozen embryo transfer in sheep,illustrated selection of donors and receptors,superovulation,synchronization of estrus,embryo cryopreservation and embryo transplantation. Frozen embryo transfer in sheep is another breakthrough in the high-quality sheep raising,and this technique in China is in its infancy recommendation stage,but it will be comprehensively popularized in the future.     

重组大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及对小鼠胚胎稳定性的影响

为研究大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）对小鼠胚胎稳定性的影响,运用大肠杆菌表达系统制备了具有生物活性的重组大肠杆菌LT,用重组LT通过腹腔注射处理妊娠小鼠,分析了LT对小鼠胚胎稳定性的影响。首先采用PCR方法从产毒大肠杆菌菌株44815基因组中扩增LT的A、B亚基基因,将其插入到pET-20b（＋）原核表达载体pelB信号肽的下游,分别构建成LTA和LTB分泌型表达载体;将载体分别转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,在IPTG的诱导下进行表达,利用Ni-NTA琼脂糖凝胶从细菌周质释放液中提取和纯化重组LTA和LTB蛋白;利用细胞毒性试验检测重组蛋白的生物活性。然后用制备的重组LT注射妊娠6d的小鼠,连续注射3d后,统计小鼠的胚胎存活率。同时用ELISA方法检测小鼠血清中与胚胎稳定性密切相关的Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）及IL-β的表达水平。结果表明,采用分泌性表达策略实现了重组LT在大肠杆菌中的高效分泌表达,LTA和LTB的表达量分别达68、62mg/L。表达的重组LT具有明显的细胞毒性作用;用LT处理妊娠小鼠,胚胎的存活率为32%,明显低于对照组;小鼠血清中Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的含量明显高于对照组（P〈0.01）,分别为对照组的2、3倍。同时细胞因子IL-1β为对照组的2倍（P〈0.01）,而稳定胚胎发育的Th2型细胞因子IL-4、IL-10没有明显变化（P〉0.05）。据此推测,LT可能与大肠杆菌性肠炎引起妊娠家畜流产有关,LT对胚胎稳定性的影响除与LT的直接毒性有关外,可能还与LT介导的免疫调节异常有关。     

转基因奶牛胚胎移植技术的试验研究

2006年6月至2010年3月以来,北京奶牛中心与中国农业大学合作,在北京奶牛中心良种场开展了转基因牛胚胎移植试验研究。本试验利用中国农业大学培育的转基因母牛作为供体,进行超数排卵生产体内胚胎,将获得的胚胎移植给15～15.5月龄荷斯坦母牛受体。截止2010年3月21日,累计移植转基因奶牛胚胎87枚,移植受体牛87头,妊娠48头,移植妊娠率为55.17%;产犊43头,成活34头,犊牛成活率为79%;经中国农业大学研究人员检测,有14头公牛携带转入目的基因,这14头公牛已全部进入北京市种公牛站饲养。目前,有10头公牛到了试采精月龄,精液经农业部牛冷冻精液质量监督检验测试中心(北京)检测,质量符合国家标准。     

家兔超数排卵和胚胎移植妊娠率的影响因素分析

应用FSH和HCG相结合的不同方法 (递减量与恒量法),对不同兔龄和是否经产的中国家兔进行了超数排卵处理。其中,递减量法超排处理:每间隔12 h依次肌肉注射15、15、10、10、5及5 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼;恒量法超排处理:每间隔12 h肌肉注射10 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼。17 h后,取卵经显微注射后移植到排卵点分布不同的家兔输卵管中,比较分析了超数排卵及胚胎移植妊娠率的影响因素,旨在优化兔超数排卵和胚胎移植方法。结果显示,①总量为60 U的FSH递减量肌肉注射法超排效果略优于恒量法(688枚、671枚),但差异不显著(P>0.05);②9～11月龄的母兔超排效果明显优于6～8月龄的母兔(794枚、565枚),差异显著(P<0.05);③经产母兔的超排效果明显优于未经产的母兔(887枚、472枚),差异显著(P<0.05);④经显微注射重组DNA的胚胎移植受体时,两侧卵巢均有排卵点的胚胎移植受体妊娠率明显高于一侧卵巢有排卵点和两侧卵巢均无排卵点的受体(81.25%、38.46%、37.50%),差异显著(P<0.05)。试验证明,通过肌肉注射递减总量为60 U的FSH对9～11月龄经产母兔的超排效果最佳,且两侧卵巢均有排卵点的受体胚胎移植妊娠率最高,为胚胎研究工作者提供了一定的参考依据。     

山羊胚胎分割及同卵双生试验

选择山羊晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡,用简化分割法二分。将19对裸半胚移植于18只受体羊,结果有12只妊娠,其中两只胚胎消失,两只流产,其余8只足月分娩,共产半胚羔11只。晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡各组的半胚发育为羔羊的发育率分别为12.5％(1/8)、20％(2/10)、25％(3/12)和62.5％(5/8)。前三组均未获得同卵双生羔羊。在第四组,将4对裸半胚移植于4只受体,有3只妊娠,足月分娩半胚羔5只,其中两对为同卵双生。本研究证明,对称分割山羊孵出增大胚泡,不仅其半胚在体内仍可继续发育形成正常胎儿,而且不装透明带移植其裸半胚,仍能获得较高的同卵双生率。山羊孵出增大胚泡更适宜用简化分割法分割。