芨芨草基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

本文选出适合芨芨草Achnatherum splendens (Trin.) Nevski基因组DNA提取方法,对RAPD反应体系中的一些重要参数进行优化,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物和Taq酶浓度,建立了适合芨芨草RAPD分析的PCR反应体系.即在12.5uL的反应总体积中Mg2+浓度为1.5mmol·L-1,dNTPs 浓度0.2mmol·L-1,Taq酶0.5U,20ng模板DNA,10bp附机引物3.2pmol.反应程序为:前6个循环为95℃变性30s,35℃复性45s,72℃延伸80s,后36个循环为94℃ 45s,36℃ 40s,72℃ 70s,最后72℃延伸10 min.该反应体系具有良好的稳定性和重复性.     

绿色木霉内切纤维素酶的分离纯化及酶学性质的研究

绿色木霉AS3.5455经固体发酵,提取胞外纤维素酶,经硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE Cellulose-52离子交换层析、SephadexG-150凝胶柱层析等纯化出单一组分的内切β-葡聚糖苷酶,经SDS-PAGE电泳分析,该内切酶的相对分子量约为58.7KD,内切β-葡聚糖酶的最适作用温度为55℃,最适反应pH为5.5。     

山楂红色素提取及稳定性研究

[目的]探讨山楂红色素的提取方法和稳定性。[方法]用UV-754紫外可见分光光度计测定山楂红色素在不同波长下的吸光度值,确定其最大吸收波长,再用721分光光度计在该波长下测定不同色素溶液的吸光度值。[结果]液泛提取法是提取山楂红色素的最佳方法,其色素的色价和收率均高于另外2种方法,提取时间短,溶剂用量相对较少。山楂红色素的最大吸收波长为533nm,温度上限约为50℃,其在酸性溶液中有良好的稳定性,浸提液在室内比较稳定,对阳光较敏感。K+对色素没有明显影响,Ca2+对色素的吸光值有一些增强作用,而少量Fe3+会对色素产生严重影响。[结论]以0.1%HCl-95%乙醇为浸提液,采用液泛法提取山楂红色素能提高色素的色价和收率。     

核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较

以核桃叶片为材料,比较了高盐低pH法、SDS法、改良CTAB法和适合酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法提取基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、RAPD、ISSR等方法进行PCR扩增和用EcoRI、PstI内切酶酶切对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量和质量.结果表明,4种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,其中酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法产量最高,纯度适中.4种方法提取的DNA对以后的PCR和酶切均没有影响.     

大孔吸附树脂分离纯化博落回总生物碱的研究

以博落回总生物碱含量及回收率等为考察指标,研究大孔吸附树脂分离纯化博落回总生物碱工艺,结果表明:AB-8型大孔吸附树脂对博落回总生物碱静态饱和吸附量为104.65 mg/(g干树脂),洗脱率为95.9%,动态饱和吸附量为96.5 mg/(g干树脂),总生物碱回收率为91.24%、纯度为90%以上,是试验树脂中分离纯化博落回总生物碱的最佳大孔吸附树脂。分离纯化博落回总生物碱最佳工艺条件为:AB-8型大孔吸附树脂,洗脱剂为90%乙醇,洗脱剂用量为2~3倍树脂体积,上柱总生物碱量与树脂比为1∶10.5,上柱液总生物碱浓度为21.57 mg/m l,流速2~3 m l/m in,上柱液pH值为7~8。     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

一种适用于木本植物RNA提取的方法

木本植物富含酚类、多糖等代谢物质,用普通方法提取RNA时很难将其除去.选取杜仲叶片做材料,通过比较研究Trizol、改良CTAB法和热硼酸盐法三种RNA提取方法,发现改良CTAB法提取效果好且简单易行,单位鲜重材料获得的RNA产量高,电泳条带清晰完整,OD260/OD280=1.84,是一种适于木本植物RNA提取的方法.     

苦荞麦茎叶中黄酮的提取工艺研究

采用乙醇溶液浸提、水溶液浸提、乙醇抽提三种方法提取苦荞麦茎叶中的黄酮类化合物。结果表明：乙醇溶液浸提的最佳提取工艺条件是：浸提温度为70—75℃，乙醇浓度为75％，浸提时间为2h，乙醇用量为原料的20倍；水浸提的最佳工艺条件是：温度70—75℃，浸提时间为2h，水用量为原料的20倍；乙醇溶液抽提的最佳工艺条件是：95％的乙醇回流抽提8h。     

超声辅助提取大枣多糖及柱前衍生高效液相分析

为了探讨大枣多糖的超声波辅助提取最佳工艺条件及其单糖组成,研究了超声波频率、液料比、提取时间和提取温度对大枣多糖提取率的影响,以正交试验优化了超声波辅助提取的工艺条件;并采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行柱前衍生,反向高效液相色谱法(HPLC)紫外检测了单糖组分。结果表明,超声辅助提取大枣多糖的最佳工艺条件为:超声波频率28 kHz、料液比1 g∶10 mL、提取时间2.5 h、提取温度70℃,在此条件下提取率可达7.51%;提取的大枣多糖包括L-鼠李糖、D-果糖、葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖等5种单糖,D-甘露糖未检出。提示本试验确定的大枣多糖最佳工艺条件可行;PMP柱前衍生HPLC分析实现了糖类物质的良好分离,可作为大枣多糖结构分析的新方法。     

松花粉多糖提取、检测方法研究进展

为了促进松花粉多糖的开发研究,介绍了松花粉多糖的提取、分离纯化、检测方法及其在食品工业的应用.