Development of a DNA marker for distinguishing CMS lines from fertile lines in rice (Oryza sativa L.)

The main objective of the present study was to identify mitochondrial DNA based marker, which can distinguish male sterile and fertile counterparts of the cytoplasmic male sterile (CMS) lines used in production of rice hybrids. Amplified fragment length polymorphism (AFLP) analysis in CMS lines: IR58025A & IR62829A and their respective maintainers: IR58025B & IR62829B identified a polymorphic DNA fragment of about 510 bp size that was present in both CMS (A) and absent in their maintainer (B) lines. Sequencing followed by database analysis of the polymorphic fragment indicated about 97% similarity with mitochondrial NADH gene subunits of rice, maize and wheat. Based on the variable sequence regions, a site specific primer pair (BF-STS-401) was designed. PCR analysis showed that BF-STS-401 could amplify a strong band of 464 bp size in CMS and a faint band of the same size in maintainer line. To act as a positive control and avoid possible errors in PCR, BF-STS-401 was multiplexed with a new primer pair (BF-STS-402), derived from mitochondrial atp9 subunit of rice, producing monomorphic amplification indiscriminately in both CMS and maintainer lines. Both the primer pairs in combination clearly differentiated CMS lines from their corresponding maintainer lines. This primer combination was validated in a set of diverse genotypes consisting of different sources of CMS lines, restorer lines, hybrids, varieties and mixed samples from private seed companies. Our results suggested that the multiplex primer pairs developed in this study can be effectively utilized to assess the genetic purity in commercial seed lots of CMS lines and hybrids of rice.     

胭脂萝卜种子纯度的RAPD检测研究

用80个随机引物对胭脂萝卜及杂株（花心萝卜和白心萝卜）的总DNA进行了RAPD分析,发现引物S50可在胭脂萝卜和杂株（花心萝卜和白心萝卜）的RAPD图谱中形成多态性差异,可用于胭脂萝卜种子的纯度检测。对1份胭脂萝卜种子进行RAPD检测,其结果与田间形态鉴定结果一致。     

一种简便有效的核酸纯化方法

核酸纯化是分子生物学实验中最常用的技术之一,现有的常规核酸纯化方法比较费时费力。结合经典的醇沉淀法与质粒提取试剂盒二者的优点,探索出改良柱纯化法,即在核酸溶液中加入适量的醇和醋酸钠,用硅胶柱快速回收核酸。试验证明新方法与现有方法的纯化效率相近,节约试验成本,且操作简单快速。纯化后的DNA能够满足酶切分析、细菌转化等试验的需要。     

利用SSR标记鉴定玉米杂交种黔单16号纯度的研究

玉米杂交种纯度鉴定对玉米种子质量管理具有重要意义;本实验利用SSR标记技术,以玉米杂交种黔单16号及其亲本DNA为供试材料,从30对SSR引物中筛选出3对在杂交种黔单16号中呈现双亲带型的引物;研究表明,这3对引物均可用于玉米杂交种黔单16号种子纯度鉴定.     

酸性PAGE鉴定杂交水稻品种纯度的研究

研究了水稻水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白的提取方法和酸性电泳系统中的胶联度、离子强度、染色方法，探索出了一套适宜水稻品种纯度和真实性鉴定的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统。应用该方法对当地推广的11个杂交水稻组合（包括12个亲本和11个杂交F1代）进行了分析。结果表明，该技术较为可靠、稳定、经济、快速，鉴别亲缘关系较近的材料具有较好效果。     

甘蓝型油菜秦优10号杂交种纯度鉴定的SSR引物筛选

为了建立一套快速可靠的油菜杂交种纯度的鉴定方法,本文以秦优10号及其亲本、杂种ZZH2为试验材料,对前人开发的2对SSR引物（7号引物,9号引物）进行了再次筛选。结果显示,7号引物不但能很好地区别出混入杂交种中的亲本,还能将杂交种子的同母异父组合种子从杂交种中分离出来,能够用于鉴别秦优10号杂交种子的真伪;9号引物能区分出杂交种和母本,但不能区分开杂交种和父本。同时,本试验利用人工制成的秦优10号杂交种标准样（纯度为100%）以及7份大田鉴定不同纯度梯度的杂交种子对7号引物鉴定结果的准确性进行了验证,鉴定结果与大田鉴定结果基本一致。本文结果将为鉴定秦优10号杂交种纯度提供更准确的技术资料。     

甘蓝型化学杀雄杂交油菜品种秦优33种子纯度的SSR鉴定

为了准确、稳定、高效的鉴定杂交油菜纯度,本研究在简单重复序列(SSR)琼脂糖电泳高效标准分析技术体系基础上,通过对479对引物筛选,获得扩增效果好、条带清晰稳定、可将化学杀雄杂交油菜品种秦优33及其亲本系三者皆可有效区别的SSR引物3对.利用其中的SA332引物对三者的高纯单株分别进行了单株验证,结果表明,三者的SSR单株图谱表现与各自的标准图谱的一致性对应率极高,分别达到了98％、99.33％和96.67％.同时利用SA332和SA85两对引物对秦优33生产商品种种子进行了实用化检测,并和大田形态结果进行了一一定株吻合率比对,结果显示,两对引物与大田的单株吻合率皆能达到96％以上,最高可达98.67％;两引物之间在两样品上的一致性偏差比较仅为0.67％和2.67％; 150株室内较小检验群体和大田300株以上较大考察群体的纯度偏差仅为-2.19％到3.76％.研究结果表明,室内SSR的鉴定结果和大田种子纯度的实际表现基本一致,可用于油菜杂种纯度的鉴定.     

佳美苦瓜纯度的SRAP鉴定

利用SRAP分子标记技术,对苦瓜品种佳美及其亲本的DNA指纹进行分析研究,经多次试验,从108对引物中筛选出2对特征引物能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带,扩增产物具有高度的稳定性和重复性,构建了相应的DNA指纹图谱.对100株佳美苦瓜进行了纯度鉴定,结果有3株植株只有母本特异带而没有父本特异带,与大田检测的结果...     

不同脱粒方法对狼尾草种子数量和质量的影响研究

比较了8种脱粒方法对威提特东非狼尾草Pennisetum clandestinum cv.whittet种子数量和质量的影响,结果表明,人工锤打脱粒法获得的种子破损率最低,纯净度和发芽率最高;木刀脱粒机脱粒法(筛孔直径0.8 cm)获得的种子数量最多, 10 kg种子材料可获得937.3 g种子,种子的破损率也较小,为8.37%,种子的纯净度为88.33%,种子的发芽率高达92.33%,仅次于人工锤打脱粒法.综合排名表明,人工锤打脱粒法和木刀脱粒机脱粒法(筛孔直径0.8 cm)同为第一,但人工锤打脱粒种子数量偏低,费时费力,经济效益不高.因此,最终确定木刀脱粒机脱粒法(筛孔直径0.8 cm)为威提特东非狼尾草种子脱粒的最佳方法.     

头孢氨苄不稳定性对建立相应复方制剂质量标准的影响

在兽用复方化学制剂头孢氨苄单硫酸卡那霉素乳房注入剂的注册检验过程中发现:当萃取所用的乙醚为国产分析纯试剂时,头孢氨苄会降解从而影响相应含量测定与降解物检查;在卡那霉素降解物检查项中,供试品溶液制备过程中的加热步骤会导致头孢氨苄降解从而干扰该项测定。针对上述两个问题进行研究后认为,申报方在标准中应对试剂纯度及卡那霉素降解物检查项中空白的配制方法作出详细规定。本实验在为完善该质量标准提供参考的同时,也可为同业人员制定含有不稳定主成分的兽用复方化学制剂的质量标准提供借鉴。