Optimizing injection time of GFP plasmid into sheep zygote

Microinjection of exogenous DNA into the cytoplasm of matured oocytes or zygotes is a promising technique to generate transgenic animals. However, the data about the microinjection time and procedure in sheep are limited and have not treated in detail. To obtain more in-depth information, the Sarda sheep oocytes from abattoir-derived ovaries were subjected to IVM and IVF. Then, the GFP plasmid as a reporter gene was injected into the cytoplasm of MII oocytes (n: 95) and zygotes at different post-insemination intervals (6–8 hpi, n: 120; 8–10 hpi, n: 122; 10–12 hpi, n: 110 and 12–14 hpi, n: 96). There were no significant differences in the cleavage rates between the groups. However, blastocyst rate of injected zygotes at all-time intervals was significantly lower than injected MII oocytes and control group (p < 0.05). Interestingly, the proportion of GFP-positive embryos was higher at 8–10 hpi compared with other injected groups (4 % versus 0 %, p  < 0.01). Among these, the proportion of mosaic embryos was high and two of those embryos developed to the blastocyst stage. In conclusion, we settled on the cytoplasmic microinjection of GFP plasmid at 8–10 hpi as an optimized time point for the production of transgenic sheep and subsequent experiments.     

复合双歧杆菌制剂对肉羊生长性能、养分表观消化率及血液生化指标的影响

为研究复合双歧杆菌制剂对肉羊生长性能、养分表观消化率及血液生化指标的影响,试验选择健康、体重相近的杜寒杂交肉羊60只随机分成4组,每组15个重复,每个重复1只,1组为对照组饲喂基础日粮,试验2、3、4组分别在基础日粮中添加2.5%、5.0%、10%的复合双歧杆菌制剂,预试验7 d,试验期56 d。结果表明:(1)试验3、4组的平均日增重较1组比分别提高13.5%、9.3%(P<0.05),料重比较1组比分别降低10.3%、9.4%(P<0.05),试验2、3、4组的干物质采食量均高于1组(P>0.05);(2)试验2、3、4组的干物质、钙、磷、酸性洗涤纤维表观消化率均高于1组(P>0.05),试验3、4组的粗蛋白质、中性洗涤纤维消化率较1组比分别提高17.2%、15.3%、12.5%、9.1%(P<0.05);(3)试验3、4组血清中的总蛋白(TP)含量较1组比分别提高16.0%、12.9%(P<0.05),试验2、3、4组血清中的白蛋白(ALB)含量均高于1组(P>0.05),试验2、3、4组血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量均低于1组(P>0.05),试验3、4组血清中尿素氮(BUN)含量较1组比分别降低15.4%、13.8%(P<0.05)。综上,不同水平的复合双歧杆菌制剂可以提高肉羊生长性能、养分表观消化率,且对血液生化指标无明显影响,以5.0%添加为适宜。     

计算机视觉技术在智慧羊场中的研究进展

智慧羊场具有科学化、标准化管理的优点,是羊场转型发展的趋势。计算机视觉技术是人工智能的核心,可以实现非接触性、自动化、实时监测羊的个体信息。本文总结并分析了计算机视觉在羊场的个体识别方法、行为识别方法、体尺与体重估测、疾病监测的研究现状,并指出计算机视觉在智慧羊场的进一步发展趋势。 [关键词] 计算机视觉|智慧羊场|个体识别|行为识别|体尺与体重估测|疾病监测     

纤维素酶处理荞麦秸秆对其纤维结构和滩羊肉品质的影响

本试验旨在研究荞麦秸秆经不同酶活纤维素酶处理对其发酵前后纤维结构、营养成分、微生物数量以及滩羊肉品质的影响。本试验分为两部分,第1部分为酶处理试验,第2部分为饲养试验。酶处理试验共设计3个组,分别为对照组（未经酶处理的荞麦秸秆）,试验I组（纤维素酶I处理的荞麦秸秆）,试验Ⅱ组（纤维素酶Ⅱ处理的荞麦秸秆）,每组3个重复。荞麦秸秆在发酵罐中密封贮存30 d后取样,然后测定其处理前后纤维结构、营养成分和微生物数量。饲养试验选择体重相近、健康状况良好的3月龄宁夏滩羊24只,采用完全随机分组设计分为3组,每组8只。日粮精粗比为30∶70,对照组饲喂基础日粮+未经处理的荞麦秸秆,试验I组饲喂基础日粮+纤维素酶I处理的荞麦秸秆,试验Ⅱ组饲喂基础日粮+纤维素酶Ⅱ处理的荞麦秸秆。预饲期15 d,正饲期60 d。正饲期结束后,每组选择5只体重接近的羊只禁食24 h后屠宰,测定羊肉理化指标和营养成分。结果表明：1） 未经酶处理的荞麦秸秆细胞壁结构完整,经纤维素酶处理的荞麦秸秆细胞壁结构存在不同程度的破坏;2） 试验I组和试验Ⅱ组中荞麦秸秆的酸性洗涤纤维分别显著降低18.71%和13.78%,中性洗涤纤维分别显著降低19.75%和17.81%（P<0.05）;3） 试验I组和试验Ⅱ组荞麦秸秆中的乳酸菌数量显著增加（P<0.05）,霉菌数量显著降低（P<0.05）;4）纤维素酶Ⅱ处理荞麦秸秆能够显著提高肌肉熟肉率（P<0.05）,纤维素酶I和纤维素酶Ⅱ处理荞麦秸秆后使得羊肉剪切力分别显著降低9.31%和11.84%（P<0.05）;5）试验I组和试验Ⅱ组的羊肉粗蛋白质含量分别为14.22%和14.23%,显著高于对照组（P<0.05）。综上所述,纤维素酶处理荞麦秸秆可以有效破坏秸秆细胞壁结构,改善秸秆营养成分,提高秸秆饲料品质和肉品质。在本试验日粮条件下,纤维素酶I处理荞麦秸秆的饲喂效果较优。     

边界病研究进展

边界病(border disease,BD)是由边界病毒(BDV)引起绵羊和山羊的一种病毒性疾病,临床症状表现为母羊不孕、流产和死胎,以及羔羊体型异常,多毛,震颤,因此又称"多毛震颤病","茸毛症"。该病的主要传播途径是垂直传播,持续性感染的羔羊是该疾病在绵羊中传播的潜在主要传染源。山羊相对绵羊感染症状相对较轻,主要表现为流产。目前尚无公认有效的BD疫苗,做好生物安全防控,严格饲养管理,及时对疑似染病动物特别是持续性病毒血症绵羊的检测和淘汰是防治本病的重要措施。现对该病的流行现状、病原学、流行病学、鉴别诊断和预防控制等方面的研究进展进行综述,旨在为研究人员及养殖户加强对BD的认识,做好疾病的相关预防工作,减少经济损失提供参考。     

我国羊隐孢子虫感染情况及危险因素

隐孢子虫是可以感染小反刍动物的肠道原生生物,具有潜在的公共卫生学问题。隐孢子虫可引起人和动物的腹泻和肠道疾病,严重情况下会出现死亡。被感染的动物可能是人畜共患型隐孢子虫的宿主,可引起公共卫生风险、农场利润减少和动物福利等问题。隐孢子虫病已被报道是新生牛、羊等反刍动物腹泻和死亡的一个重要原因,认为是新生羔羊腹泻的第二大诱因,仅次于轮状病毒。羊隐孢子虫病在世界范围内都有发现,不同程度地威胁着人和动物的身体健康,基于此,现就隐孢子虫对羊感染的危险因素和常用检测方法,以及我国羊感染的现状进行综述,为其防控提供参考。     

妊娠后期营养限制对蒙古绵羊胎儿生物原胺类神经递质的影响

本试验旨在研究妊娠后期营养限制对蒙古绵羊胎儿生物原胺类神经递质的影响。选择健康、体况相近的蒙古绵羊18只,对其进行同期发情、配种后,从妊娠第90天开始,随机分为3个组:营养限制1组[NG1组,n=6,代谢能(ME)=0.175 MJ/(kg BW 0.75·d)]、营养限制2组[NG2组,n=6,ME=0.330 MJ/(kg BW 0.75·d)]和对照组[CG组,n=6,ME=0.670 MJ/(kg BW 0.75·d)],在妊娠第140天时屠宰,取各组胎儿及其脑组织和血液。结果显示:NG1组胎儿的脑重较CG组显著增高(P<0.05),并且NG1组胎儿脑中5-羟色胺(5-HT)(P<0.01)、肾上腺素(EPI)(P<0.05)含量显著或极显著高于CG组,去甲肾上腺素(NA)的含量极显著低于CG组(P<0.01)。NG2组胎儿脑中5-HT含量极显著高于CG组(P<0.01),而NA(P<0.01)、多巴胺(DA)(P<0.05)含量显著或极显著低于CG组。另外,NG1组胎儿血浆中5-HT(P<0.01)、EPI(P<0.01)、NA(P<0.05)、DA(P<0.01)含量显著或极显著低于CG组;NG2组胎儿血浆中5-HT(P<0.01)、NA(P<0.01)、DA(P<0.05)含量显著或极显著低于CG组。由此得出,妊娠后期营养限制使得蒙古绵羊胎儿脑中5-HT、EPI含量升高和NA含量降低,血浆中5-HT、EPI、NA、DA含量降低。     

饲粮添加氨基酸锌对育肥羊屠宰性能、肉品质及血液和组织中微量元素含量的影响

本试验旨在研究氨基酸锌对育肥羊屠宰性能、肉品质及血液和组织中微量元素含量的影响。选择4月龄、体重为(29.00±0.61)kg的健康滩湖杂F1代公羊48只,随机分为4组,每组12只。对照组饲粮锌含量为52.80 mg/kg(硫酸锌),其中不含硫酸锌的锌含量为18.02 mg/kg,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组试验饲粮锌含量分别为对照组饲粮的1/2、1和2倍(氨基酸锌),预试期7 d,正试期60 d。结果表明:饲粮添加氨基酸锌显著提高了育肥羊平均日增重(P<0.05),以试验Ⅱ组平均日增重最高,达到283.59 g/d。饲粮添加氨基酸锌对育肥羊屠宰性能、肉质理化性状无显著影响(P>0.05),但随着饲粮氨基酸锌添加量增加,试验组肉骨比、背膘厚、眼肌面积先升高后降低,GR值、肌内脂肪含量升高,剪切力降低;试验组血液锌含量均高于对照组,在同等锌添加量条件下,试验Ⅱ组血清锌含量极显著高于对照组(P<0.01);各组间背最长肌、肾脏、心脏、肝脏及肺脏组织的锌含量差异不显著(P>0.05),但氨基酸锌添加量过高会影响肌肉、肾脏、心脏、肺脏中铁沉积及肝脏中铜沉积。综上所述,饲粮添加氨基酸锌可促进育肥羊生长,改善肉品质;在锌含量为18.02 mg/kg的基础饲粮中添加52.80 mg/kg锌(氨基酸锌)效果最佳。     

Toll-like receptor signaling is changed in ovine lymph node during early pregnancy

Toll-like receptors (TLRs) participate in regulation of adaptive immune responses, and lymph nodes play key roles in the initiation of immune responses. There is a tolerance to the allogenic fetus during pregnancy, but it is unclear that expression of TLR signaling is in ovine lymph node during early pregnancy. In this study, lymph nodes were sampled from day 16 of nonpregnant ewes and days 13, 16, and 25 of pregnant ewes, and the expressions of TLR family (TLR2, TLR3, TLR4, TLR5 and TLR9), adaptor proteins, including myeloid differentiation primary-response protein 88 (MyD88), tumor necrosis factor receptor associated factor 6 (TRAF6), and interleukin-1-receptor-associated kinase 1 (IRAK1), were analyzed through real-time quantitative polymerase chain reaction, Western blot, and immunohistochemistry analysis. The results showed that mRNA and protein levels of TLR2, TLR3, TLR4, TRAF6, and MyD88 were upregulated in the maternal lymph node, but TLR5, TLR9, and IRAK1 were downregulated during early pregnancy. In addition, MyD88 protein was located in the subcapsular sinus and lymph sinuses. Therefore, it is suggested that early pregnancy induces changes in TLR signaling in maternal lymph node, which may be involved in regulation of maternal immune responses in sheep.     

AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢中的转录差异及DNA甲基化程度分析

试验旨在检测5-羟色胺-N-乙酰基转移酶（AANAT）基因在绵羊休情季节和繁殖季节（卵泡期和黄体期）卵巢组织中的转录差异,并分析转录差异是否由DNA甲基化修饰程度改变所导致。试验采用自然环境条件和饲养管理一致,且体重差异在0.5 kg范围内的空怀母滩羊作为试验动物,采集其休情期、卵泡期和黄体期（每个时期3只）的卵巢组织,采用SYBR染料法进行实时荧光定量PCR检测AANAT基因在滩羊不同繁殖时期卵巢组织中的转录水平。随后针对转录水平有差异的两个时期（休情期和卵泡期）的样本,利用MethPrimer 2.0在线软件预测AANAT基因启动子区和第一外显子区的CpG岛;用重亚硫酸盐测序法（BSP法）检测AANAT基因启动子区及第一外显子区的甲基化程度。试验结果显示,滩羊休情期卵巢组织中AANAT基因转录水平显著低于卵泡期的AANAT基因转录水平（P<0.05）,休情期与黄体期滩羊卵巢组织中AANAT基因的转录水平差异不显著（P>0.05）。滩羊卵巢组织中AANAT基因启动子区上存在着一个长度为173 bp的CpG岛,第一外显子区存在着一个长度为118 bp的CG岛。然而,两个甲基化岛区内的单个CpG位点甲基化程度在滩羊休情期和卵泡期之间均不存在显著差异,暗示AANAT基因的表达受甲基化修饰外的因素调控。本研究结果可为进一步探讨AANAT基因在季节性发情和卵泡成熟中的功能提供参考资料。