重组新城疫病毒对肝癌肺转移鼠的治疗效果

文章利用重组新城疫病毒(rNDA)治疗肝癌肺转移鼠,将免疫调节基因白细胞介素2(IL2)插入rNDV基因组,拯救获得rNDV-IL2。MTT法检验rNDV-IL2对肝癌HepG2细胞体外抑制效果。通过小鼠尾静脉注射H22肝癌细胞,构建肝癌细胞肺转移模型,腹腔注射rNDV和rNDV-IL2,治疗肝癌肺转移模型小鼠。结果表明,rNDV-IL2有效感染HepG2细胞,表达外源基因IL2并抑制HepG2细胞增殖。重组新城疫病毒rNDV-IL2治疗试验动物后,体内IL2基因表达量提高,重组新城疫病毒有效控制转移灶形成,且显著促进T细胞增殖,提高试验动物存活率,未治疗组、rDNV载体治疗组和rNDV-IL2治疗组30 d成活率分别为0、50%和77.8%。     

重组斑马鱼IL-10蛋白的真核表达

[目的]在昆虫S2细胞中重组表达斑马鱼IL-10蛋白。[方法]PCR扩增斑马鱼IL-10蛋白编码基因,连接到分泌表达载体pMT/Bip/V5-His A中与辅助质粒pCoBlast共转染S2昆虫胚胎细胞,通过Blasticidin加压筛选,获得稳定表达斑马鱼IL-10的细胞系。用硫酸铜诱导IL-10蛋白表达,收集无血清的细胞表达上清,采用SDS-PAGE及Western鉴定目的蛋白。[结果]目的蛋白在昆虫细胞中获得表达,SDS-PAGE结果表明相对分子质量为23 kD,与预期结果相一致。[结论]获得了重组斑马鱼IL-10蛋白,为进一步在蛋白水平上研究其功能和调控机制奠定了基础。     

小麦基础日粮添加酶制剂对断奶仔猪生长、代谢和血液IL-2水平的影响

在小麦基础日粮中添加酶制剂 ,研究其对断奶仔猪生长、代谢和血液IL 2水平的影响。试验将 4 8头杜洛克×大约克×二花脸三元杂交断奶仔猪分为玉米基础日粮组 (Ⅰ )、小麦基础日粮组 (Ⅱ )和小麦基础日粮添加 0 0 17% (质量分数 )酶制剂组 (Ⅲ )。预试期 4d ,正试期 2 8d。结果表明 ,Ⅰ组较Ⅱ组仔猪日增重提高 4 0 % (P>0 0 5 ) ;Ⅲ组较Ⅱ组仔猪日增重提高 7 6 % (P <0 0 5 ) ,但对仔猪饲料转化率无明显影响。Ⅰ组与Ⅱ组相比 ,仔猪血液尿素氮含量极显著降低 (P <0 0 1) ,T4含量显著升高 (P <0 0 5 ) ,其他指标变化不显著 ;而Ⅲ组较Ⅱ组仔猪血液尿素氮含量、T4和IL 2含量显著升高 (P <0 0 5 ) ,血糖和T3 含量有上升趋势 ,胰岛素 (Ins)含量却略有下降。结果提示 ,小麦日粮添加酶制剂可以显著提高仔猪增重 ,甚至超过玉米日粮 ;酶制剂可以通过影响仔猪代谢和免疫而促进仔猪生长     

白细胞介素-1α对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

用体外培养的仔猪睾丸间质细胞，研究了白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）对间质细胞睾酮分泌的影响。结果，ＩＬ－１α能抑制ｈＣＧ诱导的间质细胞分泌睾酮，其睾酮产生量随ＩＬ－１α剂量的增加及作用时间的延长而下降；用２０Ｕ／ｍＬ和５０Ｕ／ｍＬ的ＩＬ－１α作用４８ｈ，可分别抑制６０％及６５％的睾酮分泌量；但无ｈＣＧ诱导时，５０Ｕ／ｍＬ的ＩＬ－１α可使间质细胞基础睾酮的生成量增加１倍。提示睾丸内ＩＬ－１α可能通过多种途径调节间质细胞睾酮的产生。     

白细胞介素-1β蛋白在孕哺期铅暴露仔鼠海马组织中的表达

为探讨母体铅染毒对其子一代海马组织中白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白表达的影响,将雌性小鼠自妊娠第1天开始经饮水染铅（0.3,1.0,3.0g/L,对照组饮蒸馏水）至仔鼠出生后21d断乳为止。随机抽取各组仔鼠,于出生后7,14,21d分别测其血液和海马组织中铅的含量;于出生后21d,采用Western blot方法测定各组海马组织中IL-1β的表达情况。结果表明,孕哺期不同剂量铅暴露后,出生后7,14,21d的仔鼠血铅、海马铅水平均明显高于对照组（P〈0.05）。Western blot结果显示,IL-1β蛋白在不同剂量铅暴露组海马组织中的表达明显高于对照组（P〈0.05）。相关分析表明,IL-1β蛋白的表达与血铅、海马铅呈显著正相关（P〈0.05）。母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,提示仔鼠血铅和海马铅的升高,引起海马组织中IL-1β表达的上调,可能损伤了海马神经元,进而损伤了神经系统。     

IL-6受体mRNA反义寡核苷酸抑制骨吸收的体外研究

目的：探讨IL-6RmRNA特异反义寡核苷酸(ASON)在体外对骨吸收的影响及意义。方法：采用器官培养法培养新生的小鼠颅盖骨，并分别用ASON、无义寡核苷酸(NSO)、IL-6或ASON与IL-6联合处理颅盖骨，未加药组为对照。培养一定时间后，测定培养上清液的钙含量，将实验组钙含量与对照组钙含量比值作骨吸收指数。结果：作用48h后，不同剂量的ASON均可轻度降低骨吸收指数，但无剂量依赖关系，ASON(5／μmol／L)对正常培养的颅盖骨的骨吸收的抑制率为8．6％；用IL-6培养颅盖骨使骨吸收指数呈剂量依赖关系升高，ASON(5．0／μmol／L)可能明显抑制由IL-6(40μg／L)引起的高骨吸收指数，其抑制率为58．0％；NSO对骨吸收指数无影响。ASON(5．0／μmol／L)分别作用12、24、48h的骨吸收指数则随时间延长而降低。结论：ASON阻断IL-6R表达后明显抑制IL-6刺激所致的新生小鼠颅盖骨骨吸收，而对正常培养的颅盖骨骨吸收抑制作用较弱。     

Autologous conditioned serum: the comparative cytokine profiles of two commercial methods (IRAP and IRAP II) using equine blood

Reasons for performing study: Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent and debilitating conditions affecting the horse. Autologous conditioned serum (ACS), commercially available as IRAP and IRAP II, is a recently developed treatment for OA in which plasma is prepared from venous blood by incubation with glass beads for 24 h. This product has been shown to increase anti‐inflammatory cytokines and growth factors in human blood. However, data for equine ACS preparations are lacking. Objectives: To characterise the protein profiles produced by commercially available ACS systems in equine blood. Methods: Blood was drawn from 5 horses into 6 groups: red top vacutainer (control), IRAP and IRAP II, with and without heparin. Samples were collected 1 or 24 h post draw and analysed for IL‐1ra, IL‐10, IGF‐1, TGF‐β, TNF‐α and IL‐1β using ELISAs. Results: Twenty‐four hour IRAP and IRAP II samples contained significantly higher levels of all cytokines relative to 1 h serum controls. At 24 h, IRAP II contained significantly higher levels of IL‐1ra and IRAP contained significantly higher levels of TNF‐α, compared to 24 h controls. In addition, TGF‐β, IL‐10 and IL‐1β in IRAP and IRAP II sera were similar to 24 h serum controls. The addition of heparin significantly reduced levels of IGF‐1, TNF‐α and TGF‐β, and significantly elevated levels of IL‐1ra. Conclusions: The cytokine profile that IRAP II produced is modestly better than IRAP. Incubation of whole blood in glass tubes stimulated cytokine synthesis, although not as efficiently as IRAP II. Potential relevance: Although high levels of IL‐1ra were found in ACS, elevation of other factors suggests these cytokines play a previously understated role in clinical improvements. Because ACS has been shown to alleviate clinical symptoms of OA, the present study suggests that factors other than IL‐1ra alone might be involved in its clinical efficacy. Species‐dependent elevations of cytokines warrant further investigation and optimisation of the systems appears to be necessary based on the differences between human and equine blood.     

大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织细胞因子表达及损伤程度的影响

本试验旨在研究体外感染金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织中细胞因子白介素-6（IL-6）、IL-1β和IL-8的表达及损伤程度的影响。以体外培养的奶牛子宫内膜组织作为研究对象,采用1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织进行体外感染,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测两种细菌刺激后奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白的表达量,并用HE染色法观察两种细菌感染后奶牛子宫内膜组织病理学切片。结果显示,1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL大肠杆菌体外感染后,奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β和IL-8 mRNA表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）;金黄色葡萄球菌感染浓度为1×10⁵、1×10⁶ CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量极显著高于空白对照组（P<0.01）,感染浓度为1×10⁷ CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,感染浓度为1×10⁶ CFU/mL时,IL-8 mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,其他感染浓度均与空白对照组无显著差异（P>0.05）。奶牛子宫内膜组织感染1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL金黄色葡萄球菌和大肠杆菌时,IL-6、IL-1β及IL-8蛋白表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）。相同浓度的大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织后,IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白表达量均极显著高于金黄色葡萄球菌感染组（P<0.01）。HE切片染色结果显示,大肠杆菌感染后仍有部分上皮细胞保留,而金黄色葡萄球菌感染后上皮细胞全部脱落。本试验结果表明,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织后,引起的炎症反应不同。大肠杆菌感染后,促炎性细胞因子被显著上调,而金黄色葡萄球菌感染后破坏子宫内膜上皮细胞程度更加严重。     

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 ,证明该融合蛋白具有特异性