N-乙酰半胱氨酸对脂多糖刺激仔猪免疫反应和小肠能量状态的影响

试验旨在研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）对脂多糖（LPS）刺激的仔猪免疫反应和小肠能量状态的影响。按照随机性原则将24头32日龄健康仔猪（11.58 kg±0.26 kg）分为3组（空白组、LPS组和NAC＋LPS组），每组设置8个重复。经过3 d适应期后，各组仔猪饲喂玉米-豆粕型基础饲粮（NAC＋LPS组在此基础上添加500 mg/kg NAC）。试验第21天，仔猪空腹称重后腹腔注射LPS （LPS组和NAC＋LPS组，注射剂量为100 μg/kg BW）或等量的生理盐水（空白组），3 h后前腔静脉采血，然后屠宰取肠黏膜、肝脏和淋巴结等样品，进行血细胞计数分析、小肠黏膜腺苷酸水平测定以及肝脏和淋巴结相关基因检测。结果表明，与空白组相比，LPS组仔猪血液中白细胞和中性粒细胞的数目显著提高（P<0.05），淋巴细胞数目显著降低（P<0.05）；小肠黏膜一磷酸腺苷（AMP）水平和一磷酸腺苷/三磷酸腺苷（AMP/ATP）值显著提高（P<0.05），ATP水平显著降低（P<0.05）；肝脏和淋巴结双链RNA依赖的蛋白质激酶（PKR）、干扰素诱导的四肽重复蛋白1（IFIT1）和黏病毒抗性蛋白1（MX1）基因的相对表达量均显著上调（P<0.05）。与LPS组相比，NAC＋LPS组仔猪血液中白细胞数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞百分比均显著降低（P<0.05）；回肠黏膜AMP水平和AMP/ATP值均显著降低（P<0.05）；肝脏IFIT1、PKR和MX1基因的相对表达量均显著上调（P<0.05），淋巴结IFIT1基因的相对表达量显著下调（P<0.05）。综上所述，饲粮中添加500 mg/kg NAC可缓解LPS刺激引起的仔猪免疫反应，并且能有效改善肠黏膜能量状态。     

抗菌肽CJH缓解脂多糖对仔猪消化性能的影响

试验旨在研究抗菌肽CJH对由脂多糖(LPS)导致的饲料中营养物质消化率及肠道消化酶活性降低的影响。试验将18头28日龄、体重相近的健康屯昌公猪随机分为空白对照组、LPS组和CJH+LPS组,其中LPS组和CJH+LPS组在试验第2和14 d腹腔注射LPS,CJH+LPS组在试验第2、6、10、14 d注射抗菌肽CJH,其他各组均注射等量生理盐水,试验期14 d。结果表明:LPS组与CJH+LPS组和对照组的粪样相比在干物质、粗脂肪和粗蛋白含量差异显著(P0.05)。CJH+LPS组与对照组仔猪胰腺及小肠消化酶活性差异不显著(P0.05),而LPS组相较于其他组均显著降低(P0.05)。结果提示,抗菌肽CJH对由LPS引起的仔猪消化性能降低有明显的改善作用。     

硒对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

本试验旨在研究硒(Se)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)氧化损伤的保护作用及其机制。将贴壁生长的第3代BMEC随机分为8组,每组6个重复,每个重复1个培养孔。对照(CON)组采用基础培养液,不添加Se和LPS,培养30h;LPS组和6个Se保护组在基础培养液中分别添加不同水平的Se(0、10、20、50、100、150和200nmol/L),培养24h后,加入1μg/mL LPS作为外源刺激作用6h。结果表明:1)与CON组相比,LPS组BMEC的相对增殖率显著下降(P0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著下降(P0.05),GPx1和TrxR1的基因和蛋白表达量、硒蛋白P(SelP)含量也显著下调(P0.05);而LPS组的一氧化氮(NO)含量,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性及其基因和蛋白表达量,炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)和白介素-6(IL-6)含量及其基因表达量,活性氧(ROS)活性,丙二醛(MDA)含量均显著升高(P0.05),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关因子p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的基因表达量呈相似变化。2)与LPS组相比,Se保护组随Se添加水平的增加,相对增殖率,T-SOD、CAT、GPx、TrxR活性,T-AOC,GPx1、TrxR1基因和蛋白表达量均呈先升高后下降趋势;而NO含量,iNOS活性及其基因和蛋白表达量,炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6含量及其基因表达量,MAPK信号通路相关因子ERK1/2、JNK、p38 MAPK的基因表达量,ROS活性,MDA含量呈先降低后升高的趋势;以20~100nmol/L Se保护效果较好,综合来看50nmol/L Se保护效果最好。结果提示,Se可提高BMEC的抗氧化功能,对LPS引起的细胞氧化损伤具有保护作用,其机制是Se增强TrxR活性从而抑制MAPK信号通路的激活,最终减少NO的大量释放,但过高水平的Se会对细胞造成损伤。培养液中20~100nmol/L Se的保护作用较好,尤其以50nmol/L Se效果最好。     

抗菌肽对脂多糖导致的仔猪肝脏氧化应激的影响

试验旨在研究给药抗菌肽CJH对由细菌脂多糖导致的仔猪肝脏氧化应激的影响。试验选用体重、日龄相近的健康屯昌仔猪(28日龄,♂)18头,随机分为3组,每组6个重复。分别为对照组、LPS组和CJH+LPS组,其中LPS组和CJH+LPS组在试验第2 d和第14 d腹腔注射LPS,CJH+LPS组在试验第2、6、10、14 d注射抗菌肽CJH,其他各组均以注射等量生理盐水替代,试验为期14 d。结果表明:与对照组相比,LPS组免疫器官指数显著降低(P0.05),而CJH+LPS组与对照组差异不显著,与对照组相比,LPS组肝脏形态受损明显,GSH-Px、T-SOD、CAT活性显著降低(P0.05),MDA浓度及炎性因子TNF-α水平极显著升高(P0.01),IL-1β、IL-6水平显著提高(P0.05),而CJH+LPS组改善了肝脏病理形态,显著缓解了LPS导致的上述指标的异常升高,且与对照组相比均达到差异不显著水平。结果提示抗菌肽CJH可能通过缓解炎症,对LPS导致的肝脏氧化应激具有明显的改善作用。     

内毒素对肉鸡肠黏膜及肝线粒体复活体Ⅰ活性的影响及氨基胍的保护效应

本研究采用30日龄黄羽肉鸡90只,随机分成内毒素处理组(LPS组,5mg/kg)、氨基胍治疗组(AG+LPS组)和生理盐水对照组。每组分别在处理后1、3、5、7h和9h时间点杀鸡取样。取肠黏膜、肝组织匀浆,提取线粒体。分别检测肠黏膜和肝脏线粒体复活体Ⅰ活性。结果显示,LPS在各时间段显著降低了肉鸡肠黏膜和肝脏线粒体复合体Ⅰ的活性(P<0.05)。注射AG 1h时,肉鸡肠黏膜和肝脏线粒体复合体Ⅰ的活性未发生变化(P>0.05),3h时却显著增加(P<0.05);5h、7h时,趋于正常(P>0.05);9h时,显著降低(P<0.05)。表明LPS诱导了线粒体的损伤,引起了线粒体内的复活体Ⅰ活性的紊乱,能量代谢障碍,组织机能发生改变;AG对LPS具有明显的颉颃作用,对机体起到保护作用。     

瘤胃异常代谢产物脂多糖对奶牛血浆中代谢产物和激素的影响及其机制

当奶牛饲粮中精饲料水平提高时,瘤胃液pH下降,奶牛常会发生亚急性瘤胃酸中毒(SARA),瘤胃内产生大量异常代谢产物,其中主要是细菌内毒素脂多糖(LPS).在SARA时期,外周血液中的LPS浓度升高,可导致奶牛发生一系列免疫应答,奶牛代谢也发生相应的变化.血浆葡萄糖、非酯化脂肪酸浓度升高,血浆氨基酸、β-羟丁酸、胆固醇和矿物质的浓度发生变化,血浆中的各种激素水平也会发生变化.这些代谢变化进而影响奶牛产奶量、乳脂和乳蛋白含量.本文对LPS对奶牛血浆代谢产物和激素水平的影响进行综述,并就其机制进行探讨.     

槲皮素和乙酸龙脑酯对小鼠的保胎作用及IL-10和CD80~+/CD86~+细胞的影响

本文旨在研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠流产的保护作用及其对小鼠子宫IL-10水平和脾脏CD80+/CD86+细胞数量的影响。试验选用LPS尾静脉注射(0.10μg/鼠),制造小鼠流产模型,于怀孕第4~7d分别口服不同保胎药物,检测各组(n=10)小鼠的流产率、胚胎吸收率、子宫组织IL-10水平和脾脏CD80+/CD86+表达的变化。发现LPS诱导流产的小鼠IL-10含量降低,CD80+/CD86+比值升高,预先口服不同保胎药物后,不同程度的抑制了LPS的作用,其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显,并且IL-10含量显著升高,CD80+/CD86+比值显著降低,与LPS流产组比较均差异显著(P0.05)。这些结果表明,LPS诱导流产与机体IL-10和共刺激分子CD80+/CD86+有关。保胎中药成分槲皮素和乙酸龙脑酯有降低小鼠脾脏CD80+/CD86+比值,促进母胎界面Th2细胞因子IL-10分泌的作用。     

亚急性瘤胃酸中毒对瘤胃异常代谢产物和微生物组成的影响

亚急性瘤胃酸中毒(Subacute Ruminal Acidosis,SARA)是反刍动物常见的一种代谢疾病。日粮中易发酵碳水化合物含量过高或纤维含量过低都会导致瘤胃内有机酸含量增多、缓冲液分泌量减少,pH值下降,进而导致瘤胃发酵异常和微生物区系改变。本文主要综述了奶牛发生瘤胃异常发酵对瘤胃内脂多糖(LPS)、组胺、乳酸及瘤胃微生物组成的影响。     

稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1∶1 000～1∶5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1∶10 000～1∶160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高。