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92.
家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2~ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0~ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右 相似文献
93.
结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达 总被引:3,自引:0,他引:3
以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础 相似文献
94.
95.
苜蓿根和根颈腐烂病病原及防治研究进展 总被引:8,自引:2,他引:8
综述了国内外苜蓿Medicago sativa根和根颈腐烂病的病原研究、品种抗病性鉴定及其防治方法的研究进展,为该病害的进一步研究提供理论依据. 相似文献
96.
密花香薷挥发油成分的分析研究 总被引:9,自引:0,他引:9
采用水蒸气蒸馏法和气相色谱-质谱-计算机联用法对密花香薷的挥发性成分进行了分析和鉴定.分离出93个峰,确认了其中的84种化合物,其含量占全油的88.34%.主要化学成分为大根香叶烯(18.83%);D-柠檬烯(11.17%);2,5,5-三四基-1,3,6-庚三烯(6.30%);6-亚甲基-双环[3,1,0]己烷(5.90%);氧化石竹烯(3.94%);石竹烯(3.36%);4-碳-3,5-二甲基环己-1-烯(2.88%);α-3-环己烯-1-醇(2.06%). 相似文献
97.
几种牧草对河西走廊盐渍化土壤改土培肥的效应研究 总被引:13,自引:2,他引:13
在河西走廊盐渍化土地上种植老芒麦、扁穗冰草、碱茅和紫花苜蓿4种优质牧草,对盐渍化程度均有一定的改良效果.其中碱茅对盐渍化土壤的改土培肥效果最好,建植3年后的碱茅,与对照比较,0~20 cm土层中自然含水量增加125.99 g/kg,总孔度增加16.14%,容重降低0.27 g/cm3,pH值由8.43降到8.10,全盐含量降低52.90 g/kg,脱盐率达到76.12%,有机质增加3.67 g/kg,碱解氮含量增加18.63 mg/kg,速效磷和钾亦随之增加. 相似文献
98.
99.
紫花苜蓿引种及其对奶牛饲喂效果的试验 总被引:2,自引:0,他引:2
紫花苜蓿(medicago satica)属多年生豆科牧草,产草量高,草质优良,干物质中粗蛋白含量达15%~25%,相当于豆饼的1/2,比玉米高1.0~1.5倍,是优质的蛋白质饲料,素有“牧草之王”之美称。金衢盆地系红壤地区,因气候及土地状况等原因,自然饲草资源缺乏,适宜栽种的饲料作物和牧草品种较少,草地植被以禾本科为主,牧草产量和品质欠佳,紫花苜蓿的种植一直以来是空白。为了改良金华市牧草品种结构,提高牧草产量和质量,以适应当地奶牛业的迅速发展,进行了紫花苜蓿引种栽培及对奶牛饲养效果的试验。 相似文献
100.
生物芯片技术是20世纪90年代发展起来的分子生物学技术。自1991年,f硐or等提出DNA芯片的概念后,以DNA芯片为代表的生物芯片(Biochip)技术得到了迅猛发展。当然,生物芯片从实验室走向工业化却直接得益于探针固相原位合成技术和照相平板印刷技术的有机结合,以及激光共聚焦显微技术的引入。目前生物芯片技术已应用于分子生物学,疾病的预防、诊断和治疗,DNA序列测定,新药开发,生物武器的研制,司法鉴定,环境污染监测和食品卫生监督等诸多领域。 相似文献