蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

水稻GBSS与淀粉分支酶基因转录本丰度对直链淀粉含量的影响

为探讨水稻胚乳淀粉合成相关酶基因表达丰度与直链淀粉含量(AC)的相关性,为稻米品质改良提供指导,以127份早籼稻,143份晚粳稻和19份粳糯稻为材料,应用水稻胚乳RNA阵列分析了供试品系的直链淀粉含量和Wx(包括成熟转录本和非成熟转录本)、Sbe I基因mRNA丰度之间的相关性。结果表明,Wx基因非成熟转录本的剪接及修饰对AC值的大小起着十分重要的决定作用。而sbeI基因在不同品系间的相对表达丰度与相对应的AC值无直接相关性。     

水稻花期特异表达基因的cDNA和RNA阵列检测

用水稻孕穗期、开花期总mRNA为探针与含有2200个独立基因的cDNA阵列杂交,以检测开花期群体基因的表达谱。结果发现,在所获得的1720个有效克隆当中,有472条基因表达下调（占27.44％）,892条为持家基因（占51.86％）,356条基因表达上调（占20.70％）。表达上调的基因中有250个功能已知（占14.53％）,106个是功能未知的新基因（占6.16％）。其中S 腺苷甲硫氨酸还原酶、查尔酮合酶、酰基载体蛋白Ⅱ基因、过敏反应蛋白、醇溶蛋白、3-酮脂酰载体蛋白合酶Ⅲ和β-D-(1→3)-葡聚糖外水解酶等基因参与水稻开花和胚胎发育过程。为了进一步验证它们与开花过程的相关性,选取查尔酮合酶、酰基载体蛋白Ⅱ、醇溶蛋白、S-腺苷基甲硫氨酸还原酶和过敏反应蛋白等5个基因为探针,与755个水稻RNA斑点阵列进行杂交。结果证实醇溶蛋白和过敏反应蛋白基因受发育调节在乳熟成穗中高表达,查尔酮合酶和S-腺苷基甲硫氨酸还原酶基因在叶片中受光诱导、在根中受缺氮胁迫时高表达。在所有表型中,查尔酮合酶、S-腺苷基甲硫氨酸还原酶和酰基载体蛋白Ⅱ基因有相近的表达趋势,过敏反应蛋白和醇溶蛋白基因的表达趋势也相近。     

农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体筛选

在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子。通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传。Southern杂交分析表明,大约有2/3转化子的T DNA插入是单拷贝的。用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性,发现一个致病缺陷突变体：A1 412。该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,说明A1 412突变体在寄主组织中扩展进程被阻断。进一步的表型分析发现A1 412突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的7%,在疏水表面不能形成附着胞,部分分生孢子萌发也略有延迟。Southern 杂交显示A1 412基因组中T DNA插入是单拷贝的。上述结果表明,A1 412突变体表型的改变可能是由于T DNA插入而使某一具有重要生物学功能的基因失活所致。     

cDNA微阵列检测萌发期水稻重要代谢基因表达模式

使用含2200条水稻表达序列标签的cDNA微阵列检测了萌发期水稻胚芽、胚轴（含糊粉层和盾片）、胚根的基因表达模式,得到1032个有效的基因表达数据。其中,在胚芽、胚根、胚轴中特异表达的基因数分别为55、106和36个。以胚轴为参比,70个基因在胚芽、胚根中均表达上调,包括延伸因子1和多个核糖体蛋白基因,这些基因与顶端生长点的细胞分化和生长有关。胚轴特异表达的基因有36个,大部分参与胚乳贮藏物质的代谢,如聚泛蛋白基因、磷酸甘油酸激酶基因等。     

棉花疫病菌和辣椒疫病菌核糖体基因ITS区域的克隆和序列分析

采用真菌核糖体基因转录间隔区域（ＩＴＳ）通用引物,ＰＣＲ扩增棉花疫病菌、辣椒疫病菌核糖体基因的ＩＴＳ１和ＩＴＳ２,并对ＰＣＲ产物进行了克隆和序列比较。结果表明：棉花疫病菌的ＩＴＳ１和ＩＴＳ２分别由２０６和４５３个碱基组成,而辣椒疫病菌则分别由１７４和４３２个碱基组成。棉花疫病菌两个菌株之间ＩＴＳ１和ＩＴＳ２的同源性均高达１００％,而棉花疫病菌和辣椒疫病菌ＩＴＳ１同源性为７０．９％,其中中间区域５２     

水稻抗瘟性研究进展

稻瘟病是水稻三大病害之一。目前对水稻抗瘟性的研究主要集中在抗瘟性基因的分子标记和抗瘟性（相关）基因的克隆两方面。本文结合作者自己的工作就以上内容的研究新进展作一评述。     

云南省烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因克隆及序列分析

以从云南省主要烟区烟草上分离到的烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）的RNA为模板,采用RT-PCR技术,对TMV云南分离物（TMV-YN）的外壳蛋白（Coat protein,CP）基因及3’端非编码区和CMV云南分离物（CMV-YNa）的CP基因进行了cDNA克隆和序列测定。结果表明,TMV-YN的cDNA全长684个碱基（EMBL登录号为AJ239099）,通过GenBank进行同源性比较发现：其5'端的480个碱基为CP基因,编码159个氨基酸;3'端的204个氨基酸为非编码区;此CP基因与TMV-U1株系和TMV韩国普通株系核苷酸同源性均为100%。CMV-YNa的CP基因全长657个碱基（EMBL登录号为AJ239098）,编码218个氨基酸;此CP基因与CMV亚组 I 的CMV-RB株系、CMV-117F株系和CMV-Y株系的核苷酸同源性分别为96%、93%和92%。     

松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％,而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％;其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段,在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段,而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．     

番茄花叶病毒中国分离物的生物学特性及其基因结构分析(英文)

Ｔｏｍａｔｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ（ＴｏＭＶ）ｉｓａｓｐｅｃｉｅｓｏｆＴｏｂａｍｏｖｉｒｕｓ．Ｉｔｗａｓｆｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｅｄｉｎ１９０９ｉｎＡｍｅｒｉｃａ．ＴｏＭＶｐａｒｔｉｃｌｅｓａｒｅｓｔｒａｉｇｈｔｔｕｂｕｌｅｓ,ａｂｏｕｔ１８ｎｍｉｎｄ...