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4.
以冻融法快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶 总被引:1,自引:0,他引:1
用含有TaqDNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli DH5α菌株,IPTG诱导表达Taq DNA聚合酶,利用该酶的热稳定性,反复2次-70℃,75℃交替冻融以裂解细胞释放胞浆;以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到快速纯化Taq DNA聚合酶的目的。PCR扩增反应和SDS-PAGE分析表明所制备的Tap DNA聚合酶的纯度,活力,敏感性,特异性均达到试验要求。该方法具有快速简便的优点。 相似文献
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一个水稻与稻瘟病毒菌(Magnaporthe grisea)互作相关新基因的克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
以水稻抗瘟性近等基因系H7R和H7S为材料,采用PCR-差别筛选(PCR-based differential screening)的方法分离和克隆了一个受稻瘟病菌诱导表达的基因,RIM9b。Northern杂交显示该克隆为受稻瘟病菌诱导的早期反应基因(片段)。其转录丰度在诱导12h达到最高峰。Southern杂交结果表明该基因以单拷贝存在于水稻基因组中。序列分析表明克隆包含一个558bp的开放阅读框,其序列与GenBank中数据无同源性。 相似文献
8.
白叶枯病菌诱导水稻特异基因表达的微阵列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
应用水稻(Oryza sativa)2200条非冗余表达序列标签(EST)所制备的cDNA微阵列及同位素^33P杂交体系,对水稻抗白叶枯菌近等基因系中早14R、中早9S经白叶枯病菌(Xanthomonas oryaepv.oyzae(Xoo))诱导后特异基因表达模式进行研究。结果表明:四叶期诱导3h后,在1336对有效数据所代表的基因中表达丰度上调有315个,下调有176个,对其中78个受诱导的已知功能基因进一步分析表明:cDNA微阵列上基因表达变化反应了植物防卫反应中基因表达的协同作用以及对病原物的攻击作出防卫反应的基本模式,尽管以往研究中一些基因未明确与植物抗病有直接关系。但在供试材料受白叶枯菌诱导后却发现其表达量发生了明显改变,对此作了初步讨论,另外,实验结果还发现了多个受白叶枯菌强烈诱导但功能未知的相关基因。 相似文献
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一、玉米种子在栽培过程中出现的问题及原因分析当前我国玉米种子的生产普遍存在产量较低、质量欠佳、栽培地的产量波动性大、产量相差较大等问题。造成这一现象的原因主要是因为栽培技术的作用并没有发挥到位,种子自身存在的问题以及生产条件等不利因素对玉米种子的生产影响并没有控制到最低。 相似文献
10.
一组容量为5 927条烟草(Nicofiana tabacum)EST的数据(GenBank登录号为CV015900~CV021826),包含521个重叠群和3 079个独立EST.EST数据分析显示:高丰度表达基因主要涉及光合代谢、蛋白合成等植物基本的生理功能;而低丰度表达基因则占假定独立转录本(TUTs)总数的85.5%.在此基础上,制备完成cDNA阵列,并应用于盐胁迫下烟叶的基因表达谱分析,结果表明,盐胁迫即可使烟草叶片的基因表达谱发生显著改变,并涉及多个重要的植物生理过程.包括水通道蛋白PIP2a、乙烯应答蛋白酶和mRNA剪接因子prp31等42个基因的检出,为阐明植物胁迫反应的调控机制提供新的线索. 相似文献