一个水稻与稻瘟病毒菌（Magnaporthe grisea）互作相关新基因的克隆

以水稻抗瘟性近等基因系H7R和H7S为材料，采用PCR－差别筛选（PCR－based differential screening）的方法分离和克隆了一个受稻瘟病菌诱导表达的基因，RIM9b。Northern杂交显示该克隆为受稻瘟病菌诱导的早期反应基因（片段）。其转录丰度在诱导12h达到最高峰。Southern杂交结果表明该基因以单拷贝存在于水稻基因组中。序列分析表明克隆包含一个558bp的开放阅读框，其序列与GenBank中数据无同源性。     

雪莲凝集素(GNA)基因的载体构建及在水稻中的整合表达

雪莲凝集素（ＧＮＡ）基因的载体构建及在水稻中的整合表达傅向东１李德葆１ＰａｕｌＣｈｒｉｓｔｏｕ２（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２ＪｏｈｎＩｎｎｅｓＣｅｎｔｒｅ，ＮｏｒｗｉｃｈＲｅｓｅａｒｃｈＰａｒｋ，ＮｏｒｗｉｃｈＮＲ４７ＵＨ，Ｕ...     

水稻细菌性条斑病病原菌(Xanthomonas campestris pv.oryzicola)单克隆抗体的研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术,融合经水稻细菌性条斑病病原菌(Xanthomonas campestris pv.oryzicola)免疫的BALB/C小鼠脾细胞和Sp2/O骨髓瘤细胞,经细条病菌典型菌株R17,R25和GX-1单独及三者混合包被进行ELISA检测筛选,建立了能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株18G 9,19D8,21F2,21G3,25E6和26F9细胞株。体外连续传代培养三个月,液氮冻存四个月后复苏培养,分泌抗体稳定。六株杂交瘤细胞的腹水单克隆抗体ELISA效价在1:2000左右。各株细胞的培养上清液ELISA效价为1:8左右。18G9,19D8和25E6细胞株所分泌的抗体为小鼠IgM类,21F2和21G3分泌的抗体为小鼠IgG_3亚类,26F9分泌的抗体为小鼠IgG_(2b)亚类。根据与植物病原细菌4个属6个种的20个不同菌株的特异性反应,将六株单克隆抗体分为A,B,C三组,20个菌株分为3个血清型和1个菌株群。     

TMV蚕豆株系CP基因及3′端非编码区序列分析与表达

根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３′端非编码区．ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３′端非编码区全长２２４个碱基．与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个．将ＣＰ基因及３′端非编码区插入ｐＧＥＭＥＸ－１的Ｔ７基因１０中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫检测证明，该特异带与ＴＭＶ抗血清呈阳性反应．将ＣＰ基因正向插入植物表达载体ＰＢⅠ１２１中，置于花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了植物表达载体ｐＺＬ５     

H2O2对陈化马铃薯切片抗氰呼吸的诱导作用研究

研究了H₂O₂对陈化马铃薯切片抗氰呼吸的诱导作用.用切片和纯化线粒体进行测定的结果均表明外源H₂O₂(5.0 mmol/L)处理对陈化马铃薯切片的总呼吸只有微弱的影响,但却可以明显诱导切片的抗氰呼吸,并显著提高抗氰呼吸对总呼吸的贡献.应用交替氧化酶的单克隆抗体进行Western杂交的结果表明,H₂O₂处理可以增强陈化马铃薯切片中交替氧化酶的表达,表明H₂O₂对抗氰呼吸的诱导作用与其时交替氧化酶表达的诱导有关.抗氰呼吸可能参与了H₂O₂调控植物抗病防御反应的作用机制.     

侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒（CMV）研究

从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物Ｃ－９３１。汁液摩擦接种６科２１种植物，Ｃ－９３１可侵染其中的６科１９种；体外抗性测定表明Ｃ－９３１的稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２），致死温度（ＴＩＰ）为５５－６０℃，２５℃体外存活期（ＬＩＶ）为４ｄ；提纯病毒粒体球形，平均直径２８ｎｍ；在琼脂双扩散反应中Ｃ－９３１能与ＣＭＶ抗血清呈阳性反应；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其衣壳蛋白亚基分子量为２９ｋＤ；用ＣＦ－１１纤维素柱提取受侵植物组织中ｄｓＲＮＡ，电泳鉴定表明共有５个核酸组分，长度（ｋｂ）分别为３．３，３．０，２．２，０．９和０．３５．根据上述性状，Ｃ９３１被鉴定为黄瓜花叶病毒，且该分离物含卫星ＲＮＡ。     

培养条件对大白菜无菌苗叶肉原生质体培养的影响

以市售栽培品种城青2号、高脚白大白菜无菌苗叶肉原生质体为材料,分别就激素、原生质体的培养密度、培养方式、多胺类物质对细胞分裂频率以及后期发育的影响进行了系统的研究.还探讨了在原生质体培养10天后加入提高了pH值的培养液来控制细胞褐化的可能性.     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种601的子叶中游离出原生质体,采用液体浅层培养,获得持续分裂的细胞。培养基中的2,4-D浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须经继代培养(MS培养基补加2,4-D 0.2mg/L,KT 2mg/L)后,再转至MS分化培养基(补加NAA0.01mg/L,KT 3mg/L)上,才能分化出芽。分化的芽在MS生根培养基(补加IBA0.5mg/L)上,可以形成完整植株。     

模块表达序列标签技术的建立及相关水稻cDNA阵列的应用

 提出了一种新的表达序列标签制作技术——模块表达序列标签（M EST）技术，利用该技术短时间内分离完成1985条水稻cDNA片段，制备完成相应的水稻cDNA阵列。实验证实：该技术体系能成功分离目的基因，正确检测基因表达丰度的改变，并具备通过对基因群体表达模式的监测以实现对生物学事件的精确描述。M-EST概念是对EST技术的完善和重要补充，运用M-EST技术能有效利用生物信息学知识，加快基因克隆速率，为基因功能的研究提供手段和工具。关键词:     

水稻受白叶枯病菌诱导抗性相关基因片段的克隆

利用已知植物Ｒ类基因保守结构域,设计简并引物作为随机引物,运用ｍＲＮＡ差异显示技术,分析水稻愈伤组织受白叶枯病菌诱导的ｍＲＮＡ表达丰度差异,获得３个差异片段。对３个差异片段进行了回收、重扩增与克隆,并对其中的一个差异片段进行了序列测定和杂交鉴定。该片段长度为６８０ ｂｐ,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果证实该片段受白叶枯病菌诱导表达且在抗性品种中的诱导表达明显强于在感病品种中的诱导表达。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂