鸡毒支原体PCR诊断试剂盒的研制及应用(摘要)

鸡毒支原体(MG)主要引起鸡的慢性呼吸道病,造成肉鸡胴体品质下降,种鸡产蛋率、受精率和孵化率下降等.当MG与其它病原合并感染时,还会引起严重的并发症,导致鸡群死亡率增高,给养鸡业带来严重危害.MG在我国鸡群中的感染相当普遍,据对全国20个省市调查结果表明,该病的平均感染率高达78%,我们对广西调查结果显示,鸡群中该病平均感染率为56.9%,种鸡群中阳性率更高达89.5%,严重危害我国养鸡业的健康发展.快速准确诊断是有效防治MG的前提,由于MG所需培养条件苛刻,传统病原分离培养需要2-3周,甚至更长时间才得出结果,不适于临床诊断需要,为此我们建立了快速检测MG的PCR方法,并在此基础上研制出MG PCR诊断试剂盒,并在生产中推广应用.     

RT-PCR检测猪瘟病毒方法的建立与应用

建立RT PCR检测猪瘟病毒的方法。根据已发表的猪瘟病毒E2基因 (囊膜糖蛋白gP55基因 )序列 ,设计合成了一对特异性引物 ,扩增片段的大小为 50 7bp ,用RT PCR技术对石门系标准株和 1 0株分离株进行检测。结果这对引物对标准株和 1 0株分离株均能扩增出与预期大小相符 50 7bpRT PCR产物 ,而对其他 6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该RT PCR可检出 1 0 0pg的猪瘟病毒RNA模板 ,对人工感染猪不同组织样品进行检测 ,结果对白细胞抽提的核酸样品检出率最高为 1 0 0 % (2 4 / 2 4 ) ,其次为扁桃体、脾、肾 ,检出率为 83 3 % (2 0 / 2 4 ) ,再者为淋巴结 ,检出率为66 7% (1 6/ 2 4 )。对送检的 1 9份疑似猪瘟的病死猪病料组织进行RT PCR检测 ,结果有 1 6份样品为猪瘟病毒阳性。兔体交叉反应试验结果RT PCR阳性的 1 6份病料中 ,有 1 4份样品被判为含有猪瘟病毒 ,其他病料兔体交叉反应试验结果全为阴性     

应用PCR-RFLP分析鉴别广西鸡毒霉形体

针对鸡毒霉形体(MG)16S和23SrRNA基因间的高变区序列设计合成了1对引物，对MG菌株进行了PCR扩增，获得了1条899bp的DNA片段，而其他禽病病原DNA无扩增。扩增产物经用限制性内切酶AfaⅠ和Dra Ⅰ进行酶切片段长度多态性分析，表明各MG菌株酶切图谱间均存在差异。     

鸡毒支原体PCR检测试剂盒的研制与应用

根据基因库中鸡毒支原体 1 6SrRNA的序列研制PCR检测试剂盒 ,用于检测鸡毒支原体 (MG)。结果表明该MG PCR检测试剂盒对不同MG参考菌株和地方分离株均能特异性地扩增出 732bp条带 ,而对其他禽支原体和禽病病原体的扩增结果为阴性。该MG PCR试剂盒最低能检测出 1 0 0fg的MGDNA模板。保存期测定结果表明 ,该MG PCR试剂盒在 - 2 0℃条件下保存至 1 ,3 ,6和 9个月时 ,其敏感性无明显变化 ,仍能检测到 1 0 0fg至 1pg的MGDNA模板。保存至 1 2个月时其敏感度虽降低了 1个滴度 ,但仍能 1 0 0 %检出人工感染鸡的临床样品     

补饲糖蜜尿素舔砖对水牛增重性能的影响

在冬春季节 ,饲养状况差的情况下 ,利用 14头育成水牛进行了为期 6 0天的补饲糖蜜尿素舔砖对比饲养试验。结果表明 :补饲舔砖的水牛平均日增重为 30 8± 5 6g ,比对照组 113± 6 3g的日增重提高 195g,差异显著 (P <0 .0 1) ;试验组干物质采食量比对照组提高 13 6 % ;试验期间补饲舔砖的试验组平均每头水牛比对照组增加毛利收入 2 1 6元 ,日头均增加毛利收入 0 36元。说明补饲糖蜜尿素舔砖能明显提高水牛的增重性能 ,经济效益显著     

罗非鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定

从广西某江网箱养鱼场的发病或濒死罗非鱼中分离到8株呈β溶血的革兰氏阴性杆菌,符合嗜水气单胞菌的特征,致病性试验结果显示8株分离菌均具有较强的致病性,均能致死小白鼠和罗非鱼,并都能产生较强的毒素致死小白鼠;8株分离菌对环丙沙星、氟哌酸、氯霉素、庆大霉素等高度敏感。     

多重RT-PCR快速检测鉴别新城疫病毒强毒株和弱毒疫苗株方法的建立

根据新城疫病毒（NDV）基因结构的特点及强、弱毒株融合基因裂解位点的序列差异设计了4条引物，建立了一种可以快速鉴别NDV强毒株和弱毒疫苗株的多重PCR方法。检测结果显示，强毒株可以扩增出442bp的特异性片段和671bp的通用片段，弱毒疫苗株可以扩增出252bp的特异性片段和671bp的通用片段。该方法只需进行一次RT-PCR，整个过程可在数小时内完成。经敏感性测定，该方法最低能检测到100pg的NDV RNA。     

禽呼肠孤病毒分离株δ3蛋白基因克隆及序列分析

本研究将禽呼肠孤病毒广西两分离株R1、R2和美国分离株Iso1 S1基因中编码σ3蛋白的基因片段进行克隆和鉴定.对克隆片段测序后与参考株S1133、1733、138、176毒株的S1基因相应序列进行比较分析.结果表明,广西分离株R1、R2与美国分离株Iso1以及S1133、1733、176毒株的核苷酸和推导氨基酸的同源性均在95%以上,上参考株138的同源性在81%～85%之间.由此可见,除了与138参考株外,广西分离株R1、R2和美国分离株Iso1与其他比较的毒株的S1基因上存在很大的相关性.     

外来入侵植物飞机草在中国的适生区预测

飞机草是我国首批外来入侵物种之一。通过阈值依赖和非阈值依赖对MAXENT和Desktop GARP的预测结果进行比较,MAXENT预测结果较好,因此采用MAXENT对飞机草进行适生区预测,结果显示,飞机草在中国的适生区主要集中于南方的海南、台湾、云南、贵州、广西、广东、福建等省,其中云南北部、贵州西南部、广西中东部、广东北部及东部、福建南部将是开展飞机草监测及预警工作的重点区域。     

新城疫病毒广西强毒株的分离与鉴定

从广西某规模化鸡场两个鸡群病死雏鸡中分离到2株有血凝性的病毒，这2株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制和中和，经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、血清中和试验和RT-PCR检测结果，确定为新城疫病毒。2株病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为52和54h，脑内致病指数(ICPI)分别为1．975、1．875；鸡胚半数致死量(ELD50)分别为：10^-9.38／0.1mL、10^-9.68／0．1mL，实验结果证明该2株病毒为新城疫病毒强毒株。