弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列（AJ132530）的同源性达99.6 %,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础.     

灌注果寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能的影响

采用营养灌注技术研究了果寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能的影响。试验选取6只安装有永久性瘤胃瘘管的内蒙古半细毛羯羊，随机分为两组，试验组一灌注1．00％果寡糖，试验组二灌注2．00％果寡糖。结果表明：灌注果寡糖可以显著（P〈0．05）降低试羊的瘤胃液相pH和瘤胃内的NH3-N浓度，显著提高（P〈0．05）瘤胃内的VFA含量和MCP含量。两个灌注水平都可以提高生长绵羊的瘤胃发酵功能。但2．00％的灌注水平仅在瘤胃NH3-N浓度的降幅方面比1．00％的灌注水平显著增大（P〈0．05），在对瘤胃液相pH值、VFA含量和MCP含量的影响方面两个灌注水平没有显著差异（P〉0．05）。     

MC4R基因主效位点在中外猪种中的遗传多样性及其与生长肥育性状的关联性分析

采用PCR-TaqI-RFLP技术,检测了9个中国地方猪种、3个外来猪种和1个培育猪种的612个个体及白色杜洛克×二花脸资源家系418头F2个体在MC4R基因D298N主效位点的遗传变异,统计分析了MC4R基因型与日增重、腹脂率及肩、胸、腰、臀部膘厚等生长肥育性状的关联性。结果表明:(1)G等位基因在中国地方猪种、长白和杜洛克中呈高频分布,而大白和南昌白猪具有高频率的A等位基因;(2)GG基因型个体的胸、腰、臀部膘厚较AA基因型和AG基因型个体厚,GG基因型个体的240日龄重、至240日龄平均日增重大于AA基因型个体,GG基因型个体的腹脂率高于AA基因型个体,差异显著。试验结果进一步验证了MC4R基因对猪生长肥育性状的影响效应。     

多系配套杂交群体遗传结构分析

利用8个微卫星标记对杜长大三元杂交群体5个种群，斯格配套系8个种群的遗传结构进行了分析。通过计算等位基因频率、基因杂合度、平均杂合度、多态信息含量、纯种间的遗传距离、F-统计量和迁移率进行分析。结果表明各群体的平均基因杂合度存在一定差异。纯种、祖代、父母代、商品代群体的平均座位杂合度和多态信息含量随着群体在杂交繁育体系中位置的由高到低而逐渐升高。Nei氏标准遗传距离显示，父本和母本间的遗传距离大，遗传距离大的父本和母本用于杂交，产生的杂种优势最大，这与实际的杂交组合一致。Fst衡量等位基因频率群体间方差，杜长大群体大约总变异的1．02％～15．60％来自种群间，而剩余的84．40％～98．98％来自种群内，斯格群体大约总变异的3．02％～15．22％来自种群间，而剩余的84．78％～96．98％来自种群内，斯格和杜长大纯种的遗传分化处于较小到中等之间。     

一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析

从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线；电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序，序列分析表明VP60基因序列全长1740bp，编码579个氨基酸，测序结果提交GenBank（注册号为DQ069280），并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较，结果表明核苷酸同源性为90．0％～98．0％，氨基酸同源性为94．1％～99．0％，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区；同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株，丰富了地方毒株资源，为明确我国地方株的分子流行病学，以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。     

亚洲璃眼蜱唾液腺一新基因(GP29)的原核表达及产物鉴定

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1,转化BL21,表达出一相对质量为53 ku的蛋白,其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381.7511”肽段序列两方面的结果证明,SDS-PAGE胶板上相对质量为53 ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与SwissPROT库中的任何蛋白均有较大差别,可能是一个新功能分子。     

西南地区农田主要种植草种及种植模式探讨

利用南方农区丰富的农田资源,大力发展草地畜牧业,引草入田,是发挥草业优势,突破农村发展瓶颈,增加农民收入的一项重要措施。探讨了西南地区农田的主要种植草种以及适宜西南地区的种植利用模式。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术.它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点.文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用.     

三种禾草萌发期抗旱性研究

采用蒸馏水及浓度为5%、10%、15%、20%和25%的PEG溶液处理梭罗草、青海草地早熟禾、垂穗披碱草种子,测定其发芽率、苗长、胚根/胚芽比值,以研究PEG对种子萌发的影响。结果显示:PEG浓度为5%时,青海草地早熟禾的相对发芽率出现小幅上升趋势,垂穗披碱草和梭罗草均呈下降趋势;不同处理对胚根/胚芽比值和苗长均有影响,梭罗草受影响小。因此这三种牧草在萌发期抗旱性依次为:梭罗草、青海草地早熟禾、垂穗披碱草。     

农牧交错区枯草期绵羊对补饲物采食行为研究

东北农牧交错区与牧区畜牧业生产不同,其中一个重要的不同点就是农牧交错区具有多种农副产品,这些农副产品在枯草期成为家畜丰富的干物质来源。而这些农副产品由于所含蛋白、纤维、口感等存在很大差异,因而家畜对其有不同的采食行为。对10种东北农牧交错区枯草期最主要的补饲物进行家畜采食行为的试验,为家畜的日常补饲及管理提供参考资料。结果表明:绿豆秸秆、葵盘、葵叶、羊草、玉米叶为补饲物的首选。