布鲁氏菌重组L7/L12蛋白对小鼠免疫保护效果的评价

为探究布鲁氏菌候选保护性抗原L7/L12的免疫原性及其对小鼠的免疫保护效果，本研究经PCR扩增羊种布鲁氏菌16M株L7/L12基因，构建重组质粒p ET-22b-L7/L12，经双酶切鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3)中，通过IPTG诱导表达并纯化后利用SDS-PAGE与western blot检测。结果显示，获得了16 ku的重组L7/L12蛋白(r L7/L12)，且纯化效果较好。将r L7/L12以100μg/只腹腔注射免疫6周龄SPF BALB/c小鼠，14 d后以50μg/只加强免疫。首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d及49 d分别对所有小鼠尾静脉采血，通过间接ELISA方法检测小鼠血清中的Ig G抗体、其亚型(IgG1、Ig G2a)抗体水平及二者比值；并利用ELISA方法检测首免后21 d和35 d两组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果显示，首免后14 d，小鼠血清中Ig G抗体水平迅速升高，于首免后21 d达峰值并持续至首免后49 d (P<0.01)，对照组小鼠则一直无抗体产生；首免后14 ...     

冠状病毒与宿主细胞受体相互作用的研究进展

<正>冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒，具有复杂的进化历史，属于套式病毒目，冠状病毒科，冠状病毒亚科，冠状病毒属，这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^[1]。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒，成熟的冠状病毒直径为60～220 nm，分为4个不同的属:α、β、γ和δ冠状病毒(图1)。冠状病毒粒子多呈现球形或不规则形，其基因组大小介于26 000～32 000 bp，长度约为30 kb^[2]，包含6～11个开放阅读框(Open reading frame,ORF)，第一个ORF占整个基因组约67%，编码16种非结构蛋白(Nonstructural protein)^[3]，其余的ORF编码辅助蛋白和结构蛋白。4种主要的结构蛋白为刺突表面糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)^[4](图2A、2B)。S蛋白在结合宿主细胞上的受体中起着至关重要的作用，也决定了病毒的宿主向性^[5,6]。冠状病毒可以通...     

捕食线虫性真菌—少孢节丛孢菌口服生物制剂安全性试验

为研究少孢节丛孢菌口服生物制剂的安全性,将20只6月龄绵羊分成4组,前3组分别灌服含有1.0×105、1.0×106、1.0×107少孢节丛孢菌分生孢子口服生物制剂,第4组为对照组灌服灭菌的生理盐水,灌服后连续30d观察绵羊的各项临床指标;并在7d后每组分别剖检2只绵羊,无菌采集绵羊各器官组织,进行组织切片和少孢节丛孢菌的分离鉴定;另外,将12只感染捻转血矛线虫后的绵羊分成3组,灌服3个不同剂量的生物制剂后测定其对粪便中线虫的捕食活性。结果表明,绵羊的精神状态、食欲、饮水、体温、粪便、增量正常;绵羊肝脏、脾脏、肾脏、肠道淋巴结等组织器官没有出现病理变化;也未从上述组织中分离出少孢节丛孢菌;3个不同剂量的生物制剂均可显著降低绵羊粪便中的幼虫数量。研究结果证实,少孢节丛孢菌口服生物制剂安全有效,无毒副作用。     

BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入华赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2。用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化酵母GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用φ=1.5%甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白分子质量为23.2ku;Western blot分析表明,该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性。     

流产布鲁氏菌2308株磷酸甘露糖变位酶pmm基因缺失株构建及鉴定

旨在构建流产布鲁氏菌2308株pmm基因缺失株。PCR扩增流产布鲁氏菌2308株pmm基因的上、下游同源臂片段,并与枯草芽孢杆菌上SacB基因片段融合。连接至自杀载体PGEM-7Zf+,构建自杀载体PGEM-7Zf+Δpmm-SacB。电转化至流产布鲁氏菌2308株感受态细胞内,通过氨苄抗性和蔗糖敏感性筛选,获得基因缺失株2308Δpmm,对其进行PCR鉴定和稳定性检测。成功构建可稳定遗传的2308Δpmm基因缺失株,并在15代内未发生回复。在此基础上可以对2308Δpmm进行深入研究。