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BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
引用本文:刘昱成,王国超,孟庆玲,乔 军,才学鹏,贺志昊,杨海波,万 鹏,陈创夫.BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[J].西北农业学报,2014,23(2):30-34.
作者姓名:刘昱成  王国超  孟庆玲  乔 军  才学鹏  贺志昊  杨海波  万 鹏  陈创夫
作者单位:(1. 石河子大学,动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室,新疆石河子 832003;2. 中国农业科学院 兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 兰州 730046)
基金项目:农业公益行业专项子课题(201303037 5);兵团国际科技合作计划项目(2012BC006)。
摘    要:根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入华赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2。用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化酵母GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用φ=1.5%甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白分子质量为23.2ku;Western blot分析表明,该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性。

关 键 词:BVDV      E2基因  载体构建  真核表达

Cloning of E2 Gene of Bovine Viral Diarrhoea Mucosal Disease Virus and Its Expression in Pichia pastoris
LIU Yucheng,WANG Guochao,MENG Qingling,QIAO Jun,CAI Xuepeng,HE Zhihao,YANG Haibo,WAN Peng and CHEN Chuangfu.Cloning of E2 Gene of Bovine Viral Diarrhoea Mucosal Disease Virus and Its Expression in Pichia pastoris[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2014,23(2):30-34.
Authors:LIU Yucheng  WANG Guochao  MENG Qingling  QIAO Jun  CAI Xuepeng  HE Zhihao  YANG Haibo  WAN Peng and CHEN Chuangfu
Abstract:
Keywords:Bovine viral diarrhea virus (BVDV)     E2 genes  Vector construction  Eukaryotic expression
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