表达口蹄疫病毒P1基因的重组伪狂犬病病毒TK/gG-/PgG-P1的构建

为了构建口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗株 ,将口蹄疫病毒 (FMDV) P1基因插入到伪狂犬病病毒 (PRV)通用载体 p Pg G- uni中 ,得到 PRV转移载体 p Pg G- P1。将转移载体与 Eco R 线性化后的 PRV弱毒疫苗株 TK- /g G- / lac Z 基因组 DNA共转染 PK- 15细胞 ,转染产物经多次空斑纯化和 PCR鉴定 ,获得了纯化的重组 PRV TK- /g G- / Pg G- P1,重组病毒基因组 DNA经酶切鉴定进一步表明 ,FMDV的 P1基因已成功地整合到 PRV弱毒疫苗株的基因组中。Western blot试验表明 ,FMDV P1基因在重组 PRV中得到表达。该研究为进一步研制口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了坚实的基础     

中药抗仔猪白痢作用机理实验观察

仔猪白痢是集约化养猪场的常见病，其病因复杂，发病率高，严重影响仔猪的生长发育，给养猪业造成巨大经济损失。临床上常用治疗仔猪白痢的抗菌药物主要依赖于它们的抑菌作用，而中草药的治疗作用则是多方面的，其作用机理很复杂。仔猪白痢的发病机理除与病原性大肠杆菌的致病作用有关外，还与年龄、免疫状态、生理机能、饲养条件等多种诱因造成的消化机能紊乱有关。     

H5N1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析

用RT-PCR法,以1株h5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA.将cDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行测序.测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸.将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92.5%～95.9%,编码的氨基酸同源性为97.0%～98.4%.本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系.     

果树晚霜冻害的特点及预防措施

近几年来 ,早春晚霜冻害给果树生产带来严重的损失。损失程度因霜冻持续时间、温度下降幅度、冻结转到解冻的急剧程度及果树所处的物候期等情况不同而有差异。现将晚霜冻害的特点及预防措施总结如下 ,供参考。1　晚霜冻的发生特点与危害特征1.1　发生特点　根据霜冻发生时的条件与特点不同 ,霜冻可分为 3种类型 :①辐射霜冻。这种霜冻延续的时间短 ,一般只是早晨几个小时 ,使局部果园气温下降到- 1℃～ - 2℃ ,因持续时间短 ,危害较小 ,较易预防。②平流霜冻。由强大寒流侵袭从而导致果园温度降至- 3℃～ - 7℃ ,甚至可达 - 10℃。这种霜冻…     

果园谨防米象为害

2003年8月12日，在山东招远张星镇小疃村王金彬苹果园，发现米象为害套袋嘎拉、红富士，随即进行了田间调查。现将调查情况简报如下：     

伪狂犬病根除计划

伪狂犬病是当今危害全球养猪业最严重的猪病，给养猪业造成了巨大的经济损失。西方发达国家大多在90年代相继制定和启动了该病的根除计划，并取得了很好的成效。该病在我国广泛存在并严重发病，损失巨大。“九五”期间我们承担了国家科技部中国生物工程开发中心生物技术攻关项目     

丹顶鹤人工授精的探索

丹顶鹤(Grus japonensis)，鹤形目、鹤科。它是一种季节性迁徙的候鸟，在朝鲜及中国东部越冬，在日本、中国东北及西伯利亚的东南部繁殖，喜欢在水位相对较深的沼泽地筑巢、觅食，主要以鱼、虾、贝类、昆虫和一些植物嫩叶、根等为食。目前，随着野生栖息地的减少，丹顶鹤的生存受到很大的威胁，据资料介绍，丹顶鹤野外仅存1700～2000只，被列为濒危物种。     

大蒜素对育肥猪生产性能的影响

目前抗生素作为饲料添加剂在我国应用十分普遍，但其前景却十分黯淡。因此，加大投资和科研力度进行抗生素代替技术的研究是非常必要的。通过提高动物食品的健康性、安全性水平，对畜牧业可持续发展的影响是十分深远的。现就通过在饲料中添加大蒜素研究其对猪生长性能的影响，为抗生素代替品的开发做一些基础工作。     

猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究

PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋），构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠，分别注射pCDNA3．1（＋）、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2，共免疫2次，间隔2周，分别于首免后2周和二免后4周采血，ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过两次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。     

猪伪狂犬病基因缺失疫苗的制备、安全性、免疫原性、保存期测定及区域试验

为了提供有效的伪狂犬病疫苗，用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株（TK^-/gG^-/LacZ^＋），研制了伪狂犬病基因缺失疫苗，并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定，同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存期进行了检测；同时将4批疫苗用于免疫23个猪场的母猪、新生仔猪和育肥猪进行区域试验。测定结果表明，疫苗经上述两种途径接种对不同阶段猪的最小免疫剂量均为10^5.0 TCID50；10倍免疫剂量的疫苗对初生仔猪、15日龄仔猪和妊娠母猪是安全的，免疫猪能抵抗强毒的攻击；疫苗在4℃和-20℃下分别可保存6个月和12个月。对伪狂犬病毒抗体阴性的70日龄商品猪和种猪的免疫期为6个月。田间试验表明，4批猪伪狂犬病基因缺失疫苗安全有效，并可用于仔猪发病时的紧急接种。为猪伪狂犬病基因工程疫苗的制备与应用提供了有力的依据。