牛FSHβ基因真核表达质粒的构建及表达分析

为开发可以体外合成牛促卵泡素(FSH)的表达系统,试验通过基因合成的手段获得牛FSHβ基因的目的片段,并通过酶切及T4 DNA连接酶的作用将FSHβ目的片段构建成pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒,并针对构建的pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒,采用菌液PCR、双酶切的方法对该重组质粒进行鉴定,并进一步利用293T细胞检测该重组质粒的表达情况。结果表明:菌液PCR和双酶切的结果证实了牛FSHβ基因片段插入了重组质粒中;pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒可以在293T细胞中表达出绿色荧光蛋白,而且经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测发现pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组质粒可以在293T细胞中转录并翻译出牛FSHβ基因的蛋白表达产物。说明pcDNA3.1-EGFP-FSHβ重组表达质粒构建成功,并且可以在293T细胞中表达。     

RNA甲基化转移酶METTL3对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响

【目的】探究RNA甲基化转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)对牛骨骼肌卫星细胞(bovine skeletal muscle satellite cells, BSMSCs)增殖和成肌分化的影响。【方法】利用体外诱导BSMSCs分化模型模拟牛骨骼肌生长发育过程,采用实时荧光定量PCR技术和蛋白质免疫印迹技术(Western blotting)检测METTL3在BSMSCs分化前后mRNA和蛋白表达水平的差异。设计合成METTL3干扰RNA(si-METTL3),且构建METTL3的过表达载体pcDNA3.1-METTL3,分别转染至BSMSCs中,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测转染效果和BSMSCs增殖标志因子盒转录家族成员7(paired box 7,Pax7)的表达情况,EdU检测细胞增殖情况。将转染si-METTL3和pcDNA3.1-METTL3的BSMSCs进行体外诱导分化,通过光学显微镜观察BSMSCs进入分化期的细胞形态,利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测BSMSCs分化标志因...     

大豆浓缩蛋白在仔猪饲料中的应用

大豆浓缩蛋白(soybean protein concentrates,SPC)是以大豆为原料,经过粉碎、去皮、浸提、分离、洗涤、干燥等加工工艺,去除大豆中的油脂、低分子可溶性非蛋白组分(主要是可溶性糖、灰分、醇溶蛋白和各种气味物质等)后所得到的大豆深加工产品。蛋白质含量高,食品级SPC一般不低于70%(干物质基础),故又称70%蛋白粉。由于消除了寡聚糖类胀气因子、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和皂甙等抗营养因子,营养素消化率有一定程度的提高,而且改善了产品风味和品质。从NRC(1998)的数据来看,其氨基酸的表观消化率甚至普遍高于脱脂奶粉和血浆蛋白粉(见表1)…     

渭北黄土高原果园生草地旱季土壤水分特征研究

在黄土高原渭北苹果园,分析多年生鸡脚草（Dactylis glomerata L.）、百脉根（Lotus corniculatu L.）、小冠花（Coronilla varia L.）三种牧草对0—200 cm土层含水量的影响。结果表明:冬春季节草地表现出明显的保墒性,而进入春季以后,随着牧草的萌发又表现出强烈的耗水性,4月10日—5月31日鸡脚草、百脉根、小冠花地块土壤总耗水量分别为99.57,104.81,82.13 mm,远高于行间裸地同期在该土层的耗水量（24.19 mm）,三种牧草的耗水能力大小依次为:百脉根 > 鸡脚草 > 小冠花。生草地块土壤稳定层对活跃层水分补偿作用明显,活跃层贮水量每减少1 mm,鸡脚草、百脉根、小冠花的相对稳定层贮水量分别减少0.60,0.60,0.73 mm。     

不同水平真菌中性木聚糖酶对蛋鸡养分消化率和表观代谢能的影响

通过代谢试验研究不同水平真菌中性木聚糖酶对蛋鸡养分消化率和表观代谢能的影响。试验分为4个处理,每处理6个重复。对照组A采用玉米-小麦型日粮;在对照组日粮基础上添加真菌中性木聚糖酶100、150 g/t和200 g/t构成处理日粮B、C和D,酶活分别为1 200、1 800 IU/kg和2 400 IU/kg。结果表明:添加100 g/t真菌中性木聚糖酶对营养物质消化率没有显著改善作用;添加150 g/t显著提高干物质、粗纤维和氨基酸(除Gly、Arg、Tyr和Pro)的表观消化率;添加200 g/t时干物质、粗蛋白质、粗纤维和氨基酸的表观消化率(除Arg、Tyr和Pro)显著提高,对表观代谢能也有提高趋势(P0.05)。在玉米-小麦型蛋鸡日粮条件下,添加真菌中性木聚糖酶2 400 IU/kg对蛋鸡养分消化率和表观代谢能的改善效果较好。     

牛乳腺干细胞的分离和生物学特征

为获得牛乳腺干细胞并对其生物学特征进行研究,通过悬浮培养,从体外培养的乳腺上皮细胞分离得到乳腺干细胞球,并通过RT-PCR、Western-blot、免疫组化染色和流式细胞分析对其表面抗原标记特征和分化特征进行研究。结果表明,牛乳腺干细胞表达CD29和CD49f,可以分化为腺上皮细胞和肌上皮细胞。该分离方法增加了获得牛乳腺干细胞的途径,特异性标记物CD29和CD49f可用于其生物学特征研究。     

干扰lnc23后牛骨骼肌卫星细胞转录组测序的生物信息学分析

试验旨在分析lnc23在调控牛骨骼肌卫星细胞分化过程中转录组水平的变化,筛选出可能参与调节骨骼肌卫星细胞生长的调控通路及相关mRNAs。采用第二代测序技术（next-generation sequencing,NGS）基于Illumia hiSeq测序平台对成功构建的lnc23抑制模型及相应对照组的牛骨骼肌卫星细胞进行转录组测序,将数据整理、过滤及评估后,通过生物信息学方法分析样品间基因转录差异表达,对这些差异基因进行GO和KEGG富集分析,并应用实时荧光定量PCR技术对转录组数据结果进行验证。结果显示,转录组测序共鉴定到19 358个基因,筛选到1 297个差异表达基因,其中上调856个,下调441个。差异基因的GO功能分析共包括细胞组分、分子功能和生物学过程3大类222个分支,其中有大量的差异基因与催化活性、分子功能调节、信号转导、生物黏附、新陈代谢相关。KEGG分析显示,差异基因共涉及190个通路,显著富集在PI3K-Akt、P53、TNF、RIG-Ⅰ样受体、神经活性配体受体互作、细胞因子互作等信号通路上,进一步从中筛选出可能参与细胞生长、肌肉发育过程的差异基因,如CCNA2、RRM2、IL-6、MYL2等。实时荧光定量PCR结果显示,所选的11个差异基因中有9个与转录组测序结果变化一致,表明了测序结果的可靠性。本试验完成了干扰lnc23及其对照后牛骨骼肌卫星细胞的转录组测序分析,获取差异基因的功能注释信息,初步揭示lnc23调控牛骨骼肌卫星细胞分化的潜在基因和通路,为深入探究lnc23调控牛骨骼肌卫星细胞的分化机制打下良好的基础。     

干扰MSTN的牛骨骼肌卫星细胞实时荧光定量PCR内参基因的筛选

为了筛选在牛骨骼肌卫星细胞（MSCs）分化前后稳定表达以及不受MSTN基因表达影响的内参基因,试验以野生组（WT）、转染干扰MSTN组（si-MSTN）和对照组（NC-MSTN）的牛MSCs作为样品,选取HMBS、B2M、GAPDH、TUBB、SDHA、18S rRNA、ACTB、RPL4、PPIA、HPRT1和YWHAZ作为候选内参基因,采用实时荧光定量PCR技术Ct值分析法对各候选内参基因的相对表达进行测定,首先利用3个独立评价软件geNorm、NormFinder和BestKeeper分别对各候选内参基因在野生组牛MSCs增殖期（GM）和分化第3天（DM3）细胞中的表达稳定性进行评价,筛选出前5个表达相对稳定的候选内参基因;然后以此为基础,利用相同的方法分析MSTN干扰组和对照组增殖期和分化第3天的细胞中上述5个内参基因的表达水平和稳定性。geNorm、NormFinder分析结果均显示,HMBS、B2M、TUBB、GAPDH和ACTB在牛MSCs分化前后表达较稳定,BestKeeper分析显示ACTB和TUBB相关系数（r）排序靠前,GAPDH、HMBS和B2M排序不是很高,但是GAPDH的SD值最小,因此选择这5个候选内参基因做后续试验;在牛MSCs MSTN干扰组和对照组增殖期和分化第3天,geNorm、NormFinder软件分析结果显示,上述5个候选内参基因中GAPDH、TUBB和B2M表达最稳定,BestKeeper分析显示TUBB相关系数排名不是最高,但其SD值最小,综合以上分析,选择TUBB作为牛MSCs干扰组和对照组增殖期和分化第3天最适内参基因。研究结果可为以后进行牛MSCs在不同生长时期以及MSTN表达被调控后基因的表达分析提供参考。     

不同能量水平对蛋鸡生产性能和经济效益的影响

选取 462只 46周龄海兰褐蛋鸡,根据体重随机分为 2个处理,低能组和高能组,分别饲喂能量水平不同 10.49MJ/kg和 11.28MJ/kg,蛋白质水平基本相同 15.57％和 15.60％的两种日粮。每个处理重复 5组,鸡只数分别为 44只、 48只、 48只、 47只、 44只和 46只、 47只、 46只、 45只、 47只。饲养期从 46周龄到 52周龄。试验结果低能组和高能组分别为：产蛋率 79.54％, 82.82％;采食量 124.0g, 129.3g;蛋重 65.16g, 65.70g;体增重 40.8g, 56.0g;料蛋比 2.39, 2.38;能量转化效率 25.08kJ/g, 26.88kJ/g。蛋白质转化效率 0.372g/g, 0.371g/g。经方差检验：蛋重、体增重差异不显著（ P>0.05）,产蛋率和采食量差异显著（ P<0.05）。在试验期的 44d内低能组盈利 807.24元,高能组盈利 633.14元。说明低能饲料的经济效益大。     

西门塔尔牛奶产量与其体型线性性状的相关,通径分析

本文通过对某牛场２０头西门塔尔牛产奶量与其体型线性性状进行相关、通径分析,结果表明：尻长、乳房深、体高、胸围、乳头长与其产奶量呈弱正相关,尻长、尻宽、乳头是影响产奶量的重要性状,且是正向作用;体高、胸围是影响产奶量的重要性状,起负面作用;尻长、尻宽对产奶量的直接作用大。