胚胎干细胞体外分化研究进展

胚胎干细胞是来源于胚胎的、内细胞团的、具有多向分化潜能的细胞。随着胚胎干细胞，特别是分化机制研究的不断深入，胚胎干细胞分化为各种类型细胞的研究也取得了较大进展，从而为细胞移植、细胞治疗和组织工程等提供了一个新的途径。主要综述了小鼠和人胚胎干细胞向内、中、外三个胚层细胞类型分化的技术，以期为胚胎干细胞定向诱导分化的研究提供一些参考。     

牛乳腺干细胞的分离和生物学特征

为获得牛乳腺干细胞并对其生物学特征进行研究,通过悬浮培养,从体外培养的乳腺上皮细胞分离得到乳腺干细胞球,并通过RT-PCR、Western-blot、免疫组化染色和流式细胞分析对其表面抗原标记特征和分化特征进行研究。结果表明,牛乳腺干细胞表达CD29和CD49f,可以分化为腺上皮细胞和肌上皮细胞。该分离方法增加了获得牛乳腺干细胞的途径,特异性标记物CD29和CD49f可用于其生物学特征研究。     

5-aza—dC联合TSA对不同供体细胞来源牛核移植胚胎体外发育的影响

为研究5-aza—dC和TSA提高核移植胚胎体外发育能力的作用是否有供体细胞特异性,实验选择皮肤成纤维细胞、胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞作为核供体细胞进行核移植,联合使用20nM（72h）5-aza—dc和50nM（12h）TSA处理供体细胞和重构胚,比较5-ttZa—dC＋TSA对不同供体细胞来源核移植胚胎体外发育的影响。实验结果表明,经5-azaLdC＋TSA处理后,极显著提高了3种供体细胞来源核移植胚胎的体外囊胚发育率（P〈0．01）。虽然胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞得到的发育率稍高于皮肤成纤维细胞组,但各对照组之间以及各处理组之间的体外发育率没有明显差异,5-aza—dC和TSA对核移植胚胎体外发育的影响没有供体细胞特异性。     

小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定

采用胶原酶和胰酶联用的酶消化法分离小鼠骨骼肌卫星细胞,应用差速贴壁法进行纯化,并利用RT-PCR和免疫荧光染色方法对分化前后细胞的标志基因进行鉴定。结果显示:分离出的肌卫星细胞生长状态良好,RT-PCR和免疫荧光染色显示肌卫星细胞Pax7和MyoD呈阳性表达,诱导分化形成肌管后,分化标志基因MyoG和MHC呈阳性表达。本研究成功从小鼠肌肉组织中分离出了肌卫星细胞,并具有很好的体外分化能力,可以为肌肉的发育分化和损伤修复研究提供良好的细胞模型。     

胚胎生殖细胞体外培养体系研究进展

本文简述了胚胎生殖细胞(Embryonic GermCells，EG细胞)生物学特性，原始生殖细胞生存的维持需要有饲养层或应用条件培养基，现在大多数的培养要加入细胞因子以维持其生存和增殖。本文作一简述。     

绿色荧光蛋白标记牛乳腺上皮细胞生长特征和超微结构观察

为了研究绿色荧光蛋白标记对牛乳腺上皮细胞超微结构和细胞体外生长的影响,试验分离、培养和鉴定了牛乳腺上皮细胞,对细胞进行绿色荧光蛋白标记,制作超薄切片,用透射电镜观察细胞超微结构,并进行核型分析。结果发现,牛乳腺上皮细胞呈典型的"铺路石样"单层生长,经绿色荧光蛋白标记后,细胞发出绿色荧光,且维持转染前的基本形态,可以表达广谱细胞角蛋白。在超微结构上,转染前后的牛乳腺上皮细胞均有大而明显的核仁,核膜清晰,核内聚集有异染色质,表明遗传物质稳定。细胞表面微绒毛发达,显示物质、能量或信息的交流活动较强;胞质内线粒体、内质网丰富,胞质内均含有大量的脂滴,显示细胞营养物质代谢旺盛。对GFP标记乳腺上皮细胞进行染色体核型分析显示细胞内含有60条染色体,形态正常,呈二倍体核型。试验结果表明,绿色荧光蛋白可以用于标记牛乳腺上皮细胞,不会对细胞体外生长活性和超微结构等造成明显影响。     

乳腺干细胞自我更新相关信号通路研究进展

乳腺干细胞是来源于乳腺组织的一种成体干细胞,具有自我更新和定向分化潜能。乳腺干细胞对乳腺的发育和功能维持具有重要作用。近年来发现,乳腺干细胞与乳腺癌的发生也有密切联系。多条信号通路对乳腺干细胞的自我更新与分化起着重要作用,这些通路包括Wnt、Notch和Hedgehog通路等。了解这些信号通路的调控机制对乳腺干细胞、乳腺发育以及乳腺癌的研究均有重要意义。本文就近年来该方面的进展做一综述,以期为本领域相关研究提供参考。     

小鼠乳腺脂肪组织体外培养

乳腺周围脂肪组织构成了乳腺生存和发育的微环境,对乳腺细胞的增殖和乳腺肿瘤／癌的生长、侵袭都具有重要影响,但目前尚未见特定关于乳腺脂肪细胞分离与培养的报道。本研究通过组织培养法培养小鼠乳腺周围脂肪组织,不但获得了成熟脂肪细胞,还获得了脂肪干细胞样细胞。该培养体系的建立简单易行,为研究脂肪组织对乳腺癌的发生、生长和侵袭的影响提供了材料,也为体外获得成熟脂肪细胞和脂肪干细胞提供了参考。     

山羊核移植胚胎干细胞的分离培养

比较了不同发育阶段山羊核移植胚胎分离培养胚胎干细胞（NT-ESCs）的情况。结果表明,各阶段山羊核移植胚胎均可分离出NT-ESCs,其中孵化胚的NT-ESCs克隆形成率最高（38%）,与囊胚（26%）差异显著,与桑葚胚（18%）差异极显著。所分离的NT-ESCs细胞形态与正常ESCs相似,均具有碱性磷酸酶活性,可表达多能性基因Oct-4和表面标志抗原SSEA-1。     

胚胎干细胞体外诱导分化的研究进展

胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)是由早期胚胎内细胞团(ICM)或原始生殖(PGC)细胞经体外分离、抑制分化培养获得的多潜能细胞。ES细胞具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力，能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。由于ES细胞的全能性，在体外可以分化出包括3个胚层在内的所有细胞，