亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及表达

从亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒中提取总RNA，采用反转录聚合酶链反应获得了长度约为700bp的核苷酸片段，大小与预期长度相符。扩增产物经克隆测序，证明其为VP1基因。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1，成功构建了重组表达质粒pGEX-VP1；利用1PTG诱导，表达出了53ku的目的蛋白条带。Western-blotting分析表明，表达产物能与亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗血清特异性结合。亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP1在大肠埃希氏菌中表达成功。     

FMDV结构基因P1的克隆与植物双元表达载体的构建

通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构基因P1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定。将P1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pB in438,构建重组中间表达载体pB inP1。采用三亲融合法构建植物双元表达载体pB inFMDV-P1。结果表明:P1基因为2 208 bp。重组中间表达载体pB inP1经BamHⅠ/SalⅠ双酶切、PCR扩增和序列测定,表明P1基因、Kozak序列等已插入pB inP1。在含50mg/L卡那霉素、25 mg/L链霉素和50 mg/L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行P1基因的PCR检测,证明植物双元表达载体pB inFMDV-P1构建正确。     

不同禽流感疫苗和不同接种剂量免疫麻花鸡的免疫效力试验

对我国目前推广的5种不同禽流感疫苗进行了免疫效果的比对分析;对麻花鸡群以不同免疫剂量进行接种,比较分析了疫苗剂量对禽流感免疫效果的影响;对比结果表明,重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）、禽流感灭活疫苗（H5N2亚型,N28株）、禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re-1＋H9N2Re-2株）抗体水平高,效果稳定,这3种疫苗为乌鲁木齐市麻花鸡禽流感防控中的疫苗首选;不同免疫剂量的对比试验结果表明,最佳禽流感疫苗接种剂量为0.5ml。     

转亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因烟草研究

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,抗性烟草植株中已整合了VP 1基因。     

毕节地区马铃薯玉米套作栽培技术模式研究

采用三元二次回归正交旋转组合设计,对毕节地区马铃薯玉米套作栽培技术模式进行研究.结果表明试验因子复合产量的影响顺序为玉米种植密度＞马铃薯种植密度＞分带带距.建立了毕节地区马铃薯玉米套作复合产值在1070.64元的栽培技术措施分带带距1.7471～1.9100m,马铃薯种植密度3256～3863株/667m2,玉米种植密度3536～4050株/667m2.     

栽培因子对大豆生长发育及群体产量的影响Ⅱ. 肥水、生长调控措施对产量的影响

研究了影响大豆产量的栽培因子——肥水、化控、化调、掐顶对大豆器官的生长发育和养分(NPK)吸收、生化指标、株型性状和群体产量的影响。结果表明：苗期肥水促进中期中部器官(叶、柄、茎节)的生长，花期肥水促进中后期上部器官(叶、柄、茎节)的生长；不同时期追施氮肥、磷肥，显著促进大豆相应生长中心器官对养分的吸收，追施氮肥不仅氮素含量增加，还有“以氮促磷”、“以氮促钾”的作用，并呈现出随着追肥期的推迟籽粒蛋白质含量增加的趋势；夏大豆最佳追肥时期是初花至花后10d，比对照增产15．6％～24．2％。多效唑化控，株高降低，叶片变小，籽粒产量有增有减。试验6种生长调节剂，“华孚”增产显著，增产5．8％。     

毕节地区马铃薯不同间套作栽培技术模式

为了提高马铃薯规模化、规范化、产业化生产水平，帮助农民调整产业结构和增收致富，壮大地方经济实力，积极为探索适合毕节地区地理气候条件下的马铃薯间套作技术模式提供科学理论依据。我们在国家科技部下达的“专用马铃薯优质高效生产技术研究与示范”项目实施过程中，在毕节市朱     

新疆乌鲁木齐市牛羊流产原因分析

[目的]确定引发牛羊流产的主要原因,从而提出科学有效的综合防控措施。[方法]采用疫病监测和流行病学调查方法,从饲养管理、疫病流行、流产情况、疫苗免疫等方面进行分析。[结果]分析认为:疫病是造成牛羊流产的主要原因,其中引发羊流产的主要是布鲁氏菌病和衣原体病,而引发牛流产的疫病具有多样性;饲养管理不善、饲草缺乏、环境条件差、消毒和卫生清扫不彻底、疫苗免疫应激等非疫病性因素也是引起牛流产的重要原因。[结论]分析结果提示:对羊应实施布鲁氏菌病、衣原体病免疫,对牛应加强饲养管理和卫生消毒;减少疫病的发生是防控牛羊流产的有效措施。     

鹅细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为探讨鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)在鹅胚上皮细胞(goose embryo epithelial cells, GEEC)中的增殖规律，研究采用荧光染料SYBR GreenⅠ渗入法，建立了检测GPV的荧光定量PCR方法，并用该方法分析了GPV在GEEC中的生长情况，绘制了生长曲线。结果显示，鹅细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法建立的标准曲线具有良好的重复性和特异性，与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内，随着模板量的减少，其对应的Ct值相应增大，得到的标准曲线方程为y=-3.341 2x+38.494,相关系数R²为0.998。特异性试验结果显示检测新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)、鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus, DHAV)、禽腺病毒(Avian adenovirus, FAdV)均为阴性。敏感性试验结果显示最低检测限为100拷贝/反应，而普通PCR的最低检测限为1 000拷贝/反应，熔解曲线为单一特征峰型，熔解温度为80℃±0.5℃。病毒生...     

犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备

为表达犬冠状病毒(canine coronavirus, CCV)S1蛋白，制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S1基因全长及其截短片段，分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中，转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株；用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白；纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原，免疫蛋鸡，用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体，通过Western blot检测抗体滴度，用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示，S1蛋白全长无表达，CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128 000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈...