猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白1α多克隆抗体的制备及应用

以真核质粒pcDNA3.1-flag-nsp1α为模板,利用PCR扩增出nsp1α基因片段,构建原核重组载体pET32a-nsp1α,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态,1 mmol/L IPTG在37℃诱导表达6 h,成功获得以包涵体形式存在的重组蛋白,能够与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体复性后作为抗原免疫新西兰大白兔,3次免疫后20 d获得兔多抗血清。通过间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光、免疫组化等试验获得了高效价的兔多抗血清,该血清能够特异性地识别真核质粒表达的nsp1α以及PRRSV BJ4株。该试验成功表达了pET32a-nsp1α重组蛋白,并制备了高效价、高特异性的兔抗nsp1α多克隆抗体。     

陇东小麦条锈菌越夏菌量测定方法研究初报

甘肃省陇东既是我国小麦条锈菌重要越夏基地,又是秋季向外传播的桥梁地区。陇东越夏菌量的多少是该地秋苗条锈病流行与否的主要因素。目前,多采用跑面选点的调查方法来确定越夏菌量。但这一方法误差较大,难于准确地反映越夏菌量。据多年资料分析,其调查结果与秋季病情相关性不明     

耐寒型抗盐碱树种银莓、沙枣引种及应用

对从北美引进的银莓(银果胡颓子Elaeagnus commutataBernh)、沙枣(银柳Elaeagnus angustifolia)及从国内甘肃引进的沙枣引种概况,以及其生态适应性、有效成分测定及应用前景进行了论述。通过近5 a的引种试验表明,银莓、沙枣抗寒、抗旱、抗风沙、耐瘠薄、耐盐碱,具有广泛的生态适应性和较为丰富的遗传多样性,并能在适度的盐碱胁迫下促进根瘤菌的形成。此外,该2种树种还具有潜在的饲料、药用开发价值,应用前景可观。     

行道树树种结构及健康评价的研究

采用实地观测方法,研究了长春市主城区(环城路内)78条主要道路行道树的树种结构特征与健康状况,结果表明:垂柳、新疆杨和糖槭是研究区内行道树的主要树种,分别占研究区树木总株数5 897株的12.79%、10.99%和10.53%;平均密度为276株·hm-2,平均胸径、平均树高、平均活枝下高和平均冠幅分别为11.7 cm、742 cm、201 cm和347 cm。环城路以内行道树43.96%的植株处于亚健康等级;健康和不健康植株分别占17.49%和10.99%;中等健康植株占27.66%。     

猪旋毛虫病快速检测试纸条的研制及特性测定

以旋毛虫重组分泌(excreting secretion．ES)抗原为基础,采用免疫金技术成功研制出旋毛虫病快速检测试纸条,试验结果显示试纸条与猪肺线虫、猪囊尾蚴、猪细颈囊尾蚴、猪米氏住肉孢子虫、猪蛔虫无交叉反应。证明旋毛虫病试纸条具有良好的特异性和敏感性,其敏感性与ELISA相当,与ELISA及消化法的检测结果符合率为100％。5min内肉眼观察获得结果,具有特异、敏感、快速、简单等特点,不需要任何专业技能和其他试剂。本方法的建立对猪旋毛虫病诊断和流行病学调查具有很大的应用价值。     

我国蜱虫源埃里希体的宿主分布及分子流行病学调查

为了解我国蜱虫源埃里希体(Ehrlichia)的宿主分布及分子流行病学情况,于2016—2017年在内蒙古、黑龙江、吉林、浙江和海南等省份采集寄生于牛、羊、犬等蜱虫样品1 000余只,根据采样年份、宿主、地点等因素随机取300份蜱虫按每5只为1组进行Ehrlichia分离鉴定和分子流行病学调查。PCR结果和测序数据显示,蜱虫样品中Ehrlichia的总阳性率为10%(6株/60组),阳性率与时间、宿主、地点等因素密切相连;对所分离的6株牛蜱虫源Ehrlichia进行分子生物学鉴定发现,其中5株为犬埃里希体(E.canis),另外1株为反刍埃里希体(E.ruminantium)。结果表明,E.canis是当前的优势流行菌株,且广泛存在并寄生于各类动物的蜱虫中,通过蜱虫叮咬进而感染多种动物;因此有必要进一步进行E.canis的流调、疫苗的研发、杀虫等来阻断埃里希体病的流行。     

磺胺嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及鉴定

基于1株分泌抗磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)高亲和力的SD单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),应用ELISA试验原理研制SD残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SD-Kit),并对其特性进行测定。SD-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9914,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.02～12.92μg/L,灵敏度为0.08μg/L,半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L,检测限为0.08μg/L;鲜奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为90.8%、95.8%,平均批内和批间变异系数均低于10%;基质对SD-Kit的检测结果影响不大;SD-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药几乎没有反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。     

不同土壤调节剂对新增耕地土壤质量以及玉米产量的影响

针对新增耕地重构土壤地力低等关键问题进行池栽模拟试验,以生土为池栽用土,以发酵后的农业废弃物为主料,结合苜蓿粉、聚丙烯酰胺、膨润土以及蛭石通过混合造粒制成9种配方不同配比的土壤调节剂（分别以F1～F9表示）,以玉米“郑单958”为试验材料,通过测定不同配方土壤调节剂对重构土壤的土壤容重、田间持水量、饱和含水量、有机质、养分（N、P、K）含量、脲酶和蔗糖酶活性的含量以及玉米光合与产量指标,探究不同配方的土壤调节剂对重构土壤物理、化学、生物方面的改良效果以及对玉米光合与产量的影响,并筛选出最佳土壤调节剂配方。试验设置常规施肥处理（CK1）、商品有机肥处理（CK2）以及施用9种不同配比的土壤调节剂处理（F1～F9）共计11个处理。结果表明：较CK1处理,施用土壤调节剂处理的土壤容重显著降低了4.85%～11.52%,田间持水量显著提升了21.58%～46.43%,有机质显著提升了21.27%～45.33%,脲酶活性显著提升了16.67%～27.24%。F7处理在具备优良的土壤改良作用的同时增产效果最佳,较CK1及CK2处理,产量显著提升了26.11%、21.69%。因此,选择F7处理的配比为...     

基于结构类似物的交叉反应性制备高灵敏度 玉米赤霉醇单克隆抗体

【目的】获取高灵敏度的玉米赤霉醇（zearalanol,ZAL）单克隆抗体,为提高玉米赤霉醇免疫学检测方法灵敏度研究奠定基础。【方法】利用ZAL的结构类似物玉米赤霉酮（zearalanone, ZAN）制备人工完全抗原。肟化改造ZAN得到ZAN-O;碳二亚胺（EDC）法把ZAN-O分别连接到牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上制备出ZAN-O-BSA和ZAN-O-OVA。ZAN-O-BSA免疫小鼠,免疫剂量为50 μg蛋白/只鼠。选取血清效价高、灵敏度好的小鼠进行细胞融合。阳性杂交瘤筛选过程中,利用ZAL替代ZAN作为阻断剂,筛选能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞。体内诱生腹水法来批量制备ZAL单抗,并对单抗的免疫学性能进行了鉴定。【结果】通过细胞融合,阳性杂交瘤筛选得到了1株能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为12B10A7,其分泌的ZAL单抗灵敏度(半数抑制浓度, IC₅₀)为577 pg?mL ^-1,亲和力常数Ka=6.21×10 ⁷L?mol ^-1,与结构类似物β-玉米赤霉醇（β-zearalanol, β-ZAL）、α-玉米赤霉烯醇（α-zearalenol, α-ZEL）、β-玉米赤霉烯醇（β-zearalenol, β-ZEL）、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEN）分别有43.06%、15.51%、15.22%、77.65%及9.79%的交叉反应率,而与其他霉菌毒素及载体蛋白交叉反应率均<0.06%。【结论】基于抗体交叉反应特性,利用ZAN制备人工抗原,得到了ZAL的单克隆抗体,所制备的单克隆抗体亲和力高,灵敏度好,特异性强。     

微生物菌剂和生根粉对甜瓜产量和土壤生态效应的影响

以甜瓜为试材,采用田间小区试验,探讨了微生物菌剂和生根粉对棚室甜瓜生理代谢、产量、土壤生态效应的影响,以期为甜瓜安全高效施肥提供参考依据。结果表明:施用微生物菌剂和生根粉可以显著提高甜瓜植株生理代谢能力和果实产量(P<0.05)。其中净光合速率提高39.92%~59.88%,蒸腾速率提高39.76%~46.18%,产量提高6.96%~31.53%。此外,施用微生物菌剂和生根粉可以改善土壤酸碱度,提高微生物数量。同时可以提升土壤酶活性,活化土壤速效磷、钾养分。